实时荧光定量PCR选择要领!技术文章湖南国测生物科技有限公司

所谓real-timeQ-PCR技术,是指在PCR反应体系中加入荧光基因,利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。

目前购买荧光定量PCR仪,一般包括:实时荧光定量PCR仪+开机检测试剂+通用电脑+自动分析软件。

而一台实时荧光定量PCR仪的硬件配置主要看:温控模块、光路检测模块。

温度控制是qPCR技术的核心所在,为了实现高准确度,实时PCR热系统必须确保整个加热块的温度均匀性,确保能够以相同速率的反应处理所有的样本。

01

温控速率

升降温速度快的是好设备,但是单一模块升降温速度快并不代表样本升降温速度也快,所以还要看样本的升降温速度是否也快,注意最大升降温速度≠平均升降温速度。

02

温控精度

控温模块中银质半导体控温模块目前是比较好的,因为银是金属中银的导热性能较高,升降温速度快,孔间温度均一性好,边缘效应相应减少。

金属的热传导系数表:银>铜>金>铝>铁>锡>铅。

温度准确度和温度均一性越小越好。

光源

光强比较:光强比较:髙强度白光LED>卤钨灯>单色LED

白光LED的亮度约是卤钨灯的3倍左右,单色LED的10倍左右,能够捕捉到更多的荧光信号,是专业光源领域的最新技术代表。

寿命比较:寿命比较:髙强度白光LED=单色LED>卤钨灯

白光LED的寿命长达10000小时以上,一般可以使用5-10年左右,基本上超过了一般科研仪器的正常工作寿命,基本终身无需更换光源,而卤钨灯光源基本每2年就要更换一次,费时费力,南方更是不足一年就要更换一次。

检测器

荧光定量PCR灵敏度:冷CCD>CCD>光电倍增管CPM>光电二极管

CCD作为荧光信号的接受器,其质量直接决定了仪器的检测灵敏度和稳定性。10℃的冷CCD,和常温CCD有着质的区别,在专业光学领域,冷CCD的造价成本至少要比常规CCD高出一倍以上。冷CCD在更低的温度下进行光信号捕捉,能够提供更高的光感灵敏度和更低背景噪音。因此,有的荧光定量PCR能够稳定区分1000和2000拷贝的浓度差异,而有的只能做到区分5000和10000个拷贝数。

03

光路传导

光路设计应尽可能有效消除边缘效应,光路设计是否有效消除孔间边缘效应,可以自行进行实验检验。

-广^_^告-

温度控制模块

猪警-2000采用银质半导体温控模块和多点温控技术,温度准确度±0.1℃、温度均一性±0.1℃,确保实验精确度,最大升降温度速度12℃/s,半小时可完成扩增反应。

光学检测模块

光源采用免维护白光LED灯,光源强度大;高灵敏度光电传感器,检测灵敏度比CCD探测器高10倍,无孔间的边缘干扰影响;光路传导采用侧底部采光,每个反应孔都拥有独立光纤传输,使用最佳滤光片组合,无孔间检测干扰。

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