本病毒DNA/RNA提取试剂盒适合于从无细胞体液,包括血浆、血清、全血、腹水、培养细胞上清液、脑脊髓液及尿液等中提取高纯的病毒DNA/RNA。该产品可以满足绝大多数的病毒RNA/DNA的同时提取要求,如病毒RNA:HCV(丙肝病毒)、HIV(艾滋病毒)和HTLV(人类嗜T淋巴细胞病毒);病毒DNA:HBV(乙肝病毒)和CMV(巨细胞病毒)等。病毒裂解后,DNA/RNA后在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜(特别配备了PolyCarrier可以从体系中轻松捕获微量核酸),再通过一系列快速的漂洗-离心等步骤,将盐、细胞代谢物、蛋白等杂质去除,最后通过洗脱缓冲液将纯净的病毒DNA/RNA从硅基质膜上洗脱。纯化后的病毒核酸无杂质和PCR抑制剂,可直接适用于PCR/RT-PCR分析。
产品特点
1.不需要使用有毒的苯酚等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤。
3.多次柱漂洗确保高纯度,提取的病毒DNA/RNA纯度高,质量稳定可靠,可适用于各种常规操作,包括PCR/RT-PCR、酶切、测序、Southern杂交等。
产品组分
ProteinaseK
33mL
(使用前请添加20mL无水乙醇)
10mL
(每一瓶使用前请添加40mL无水乙醇)
RNase-free吸附柱和收集管
运输和保存方法
1)室温储存12个月不影响使用效果,各溶液使用后应及时盖紧盖子。
2)PolyCarrier常温运输,4℃可存放一个月,长期保存置于-20℃保存。
注意事项
1.所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机,如Eppendorf5415C或者类似离心机。
2.开始实验前将需要的水浴先预热到特定温度备用。
3.BB结合液和IR抑制剂去除液中含有刺激性化合物,操作时戴乳胶手套,避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。
4.PolyCarrier:
PolyCarrier使用方法:如果起始处理量很少,我们推荐使用PolyCarrier,如果预期有较大量核酸产量,用户可以根据需要选择是否加入PolyCarrier。使用时在每个样品提取所需裂BB结合液中加入4μlPolyCarrier储存溶液,将BB结合液与PolyCarrier溶液充分颠倒混匀即可(BB结合液容易起泡沫,请勿使用涡旋振荡混匀)。也可根据样品数量,在BB结合液中加入总共需要的PolyCarrier混匀备用。混合液在室温24小时内稳定。
6.如果是全血样品,EB洗脱液使用前建议用70℃预热。
5.本产品仅作科研用途!
使用方法
提示:
→第一次使用前请先在IR和WB溶液中加入指定量无水乙醇,充分混匀,加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!
1.200μl血清、血浆或者全血等体液(需恢复到室温,不足可用0.9%NaCl或者PBS补足)转入1.5ml离心管,加入200μlBB结合液和50μLProteinaseK,立刻涡旋振荡充分混匀。
如果处理样品量小或者病毒预期浓度较低,建议在200μlBB结合液中加入2μlPolyCarrier储存溶液。
2.72℃孵育10min,加入100μLBB结合液,充分混匀。
3.将上述混合物加入一个吸附柱RA中,(吸附柱放入收集管中)12,000rpm离心1min,倒掉收集管中的废液。
如果总体积超过750μl,可分两次将溶液加入同一个吸附柱RA中。
4.加500μlIR抑制剂去除液,12,000rpm离心1min,弃废液。
5.加入450μlWB漂洗液(请先检查是否已加入无水乙醇!),12,000rpm离心1min,弃废液,加入450μlWB漂洗液,重复一遍。
6.将吸附柱RA放回空收集管中,13,000rpm离心10s,尽量除去漂洗液,以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
7.取出吸附柱RA,放入一个RNasefree的离心管中,在吸附膜的中间部位加50μlEB洗脱液(事先在65-70℃水浴中加热效果更好),室温放置1分钟,12,000rpm离心1分钟。如果想得到较多量的DNA/RNA,可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中,12,000rpm离心1分钟。
洗脱体积越大,洗脱效率越高。如果需要DNA/RNA浓度较高,可以适当减少洗脱体积,但是最小体积不应少于20μl,体积过小降低洗脱效率,减少DNA/RNA产量。
9.洗脱出的DNA可直接运用于PCR实验(10-20μLDNA洗脱液),洗脱出的RNA也可以直接用于RT-PCR(3.5μL病毒RNA洗脱液)。