动物微生物学中常见的病毒和细菌病诊断

狂犬病病毒(Rabiesvirus)属于弹状病毒科(Rhabdoviridae)狂犬病毒属(Lyssavirus),是引起人和动物狂犬病的病原,该病在世界各地均有发生。

一、生物学特性

病毒子长140~180nm,宽75~80nm,一端钝圆,另端平凹,呈子弹头形或试管形。在螺旋对称的衣壳中,含有负股单股RNA。具有脂蛋白的囊膜,在膜上有血凝素的穗状突起。该病毒只有一个血清型。

二、抵抗力

病毒在pH为7~9的范围内比较稳定,在56℃经30min可使病毒灭括。

五、致病性

狂犬病病毒几乎可以感染所有的温血脊椎动物,同样也能感染人。本病主要由患病动物咬伤后而感染。当健康动物皮肤粘膜有损伤时,接触病畜的唾液亦可以感染。病犬的唾液于症状出现前1~2周便可能会有病毒。存在于病畜唾液中的病毒,通过咬伤而进入易感动物的皮下组织,然后沿着神经纤维由外周进入神经中枢。也有人认为病毒是由外周经血液侵入脑组织。病毒在脊髓和脑组织中增殖,并可按离心方向由中枢神经向外扩散,而脑脊髓液在病毒扩散中,亦起着重要作用,使所有器官都能查出病毒。抵达唾液腺的病毒,在其上皮细胞内又大量增殖,并进入到唾液中。病毒在中枢神经系统中的继续繁殖,损害神经细胞和血管壁,引起血管周围的细胞浸润。神经细胞受刺激后,首先引起兴奋症状,如神经紊乱和反射性增高,后期神经细胞变性,逐渐引起麻痹,当呼吸中枢麻痹后即可造成死亡。

六、微生物学诊断

常用的特异性检查方法有包涵体检查,动物试验,荧光抗体检查等三种。

(一)包涵体检查取大脑、小脑,特别是海马角部分,用刀片切开印片,趁印片未完全干燥时,以塞勒(Seller)氏液染1~5s,水洗、干燥、镜检。内基氏小体呈鲜红色、间质呈粉红色、红细胞则为桔红色。内基氏小体为圆形、卵形、核形、阿米巴形。大小为24~27μm,位于细胞浆内。用姬姆萨氏(Giemsa)染色,小体为红色(图10-1)。

由于有些犬、猪和草食兽的病例及病初死亡或早期剖杀动物中可能不见包涵体,所以并不是所有的病例都能检查出包涵体来。

(三)荧光抗体检查近来多用此法。因为该法特异性强,简单而迅速,并且在包涵体尚未形成时,就可检查出抗原,因此,是诊断狂犬病较好的方法。

此外,中和试验、补体结合试验、交叉保护试验、血凝抑制试验、

间接免疫酶试验(HRP-SPA)、以及单克隆抗体检测、RT-PCR检测(比

标准化荧光抗体法敏感100~1000倍)等均可用于狂犬病的检查。

七、免疫与治疗

狂犬病的预防和治疗常用疫苗(弱毒苗和灭活苗)及免疫血清,能得到良好的效果。对患狂犬病的病犬和可疑犬,应立即捕杀,以免伤害人、畜。

伪狂犬病病毒

伪狂犬病病毒(Pseudorabiesvirus)又称猪疱疹病毒Ⅰ型,属于疱疹病毒科(Herpesviridae)疱疹病毒甲亚科(Alphaherpesvirinae)。它是引起多种家畜和野生动物以发热、奇痒及脑脊髓炎为主要症状的一种疱疹病毒。由于本病的临床症状同狂犬病有类似之处,曾被误认为狂犬病,后来才起用了“伪狂犬病”这一病名。本病广泛分布于世界各地。

本病毒呈圆形或椭圆形,为双股DNA,20面体立体对称,位于核心无囊膜的病毒粒子直径约110~150nm,位于胞浆内带囊膜的成熟病毒粒子的直径约180nm。衣壳壳粒的长度约12nm、宽9nm,其空心部分的直径约4nm.

本病毒是疱疹病毒中抵抗力比较强的一种,在畜舍内干草上的病毒,夏季存活30d,冬季达46d。病毒在pH4~9之间保持稳定。在50%甘油盐水中保存的病料0~6℃下154d感染力仅轻度下降,保存到3年时仍具感染力。

牛患病后在皮肤的某部位出现狂痒是本病的基本特征。狗和猫的症状与牛相似,但不攻击人和其他动物,常在出现症状后24~36h死亡。山羊无瘙痒症状,主要表现不安、大量出汗、后期出现痉挛和麻痹。多在24~48h内死亡。人可能具有某种程度的易感性。

(一)病毒分离在病的急性期,用棉拭子在口咽部取样。病死动物取扁桃体、颈淋巴结和鼻粘膜。收集局部水肿液和该区域的神经干。部分采集脊髓和脑(最好是中脑、脑桥和延脑)。

1.鸡胚接种本病毒可适应鸡胚,接种4d后,在绒毛尿囊膜上可见白色痘斑性病变,并迅速侵袭整个神经系统,导致胚胎头盖骨突起。

2.动物接种病料皮下接种兔,能产生典型的瘙痒症状,2d后兔舐接种部位,以后更狂暴,啃咬皮肤。症状持续4~6h,兔卧地不起,阵发性痉挛和呼吸困难死亡。经兔接种后的材料则可感染豚鼠和小白鼠,引起瘙痒症状。

(二)血清学检查

1.血清中和试验一般用乳兔肾细胞或PK-15细胞。病毒滴度不低于105TCID50/0.1ml,使用滴度在100~500TCID50范围内。被检血清作倍比稀释。血清中和效价在1:2时可疑,1:4时为阳性。

2.ELISA试验某些国家已把ELISA(间接法)作为诊断该病的标准方法。但该病毒的抗体与牛疱疹病毒Ⅰ型抗体有交叉反应。在同等条件下,用已接种病毒和空白细胞培养物分别制备病毒抗原和对照细胞抗原。如被检血清在病毒抗原孔的吸收值较对照孔高0.15以上者判为阳性。

3.荧光抗体试验采取新鲜病料,做冰冻切片进行荧光抗体染色(间接法)检查,该法比病毒分离更快速。

4.琼脂扩散试验抗原用PK-15细胞系生产制备,待检猪血清不稀释,25℃左右14~18h即可判定。但该方法尚需在实践中进一步验证。

THE END
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