近期，由日本学者发表在VETERINARYRESEARCH上的一篇《AntiviralactivityofitraconazoleagainsttypeIfelinecoronavirusinfection》，在兽医圈引起了轰动。
伊曲康唑，属于抗真菌成分，但该研究证明，它在细胞中能表现出抗病毒作用，也许能用于治疗I型FCoV感染，成为治疗猫传腹的药物！
猫冠状病毒猫冠状病毒（FCoV）是有囊膜的正链RNA病毒，存在两种血清型：I型FCoV和II型FCoV。I型更有可能引起FIP，临床上由Ⅱ型引起的FIP仅占2-30%。现在有很多针对FIP的抗病毒药物和疫苗正在研究中，但尚未投入临床实践。
试验内容
WST-8法测定细胞存活率，评估ICZ对fcwf-4细胞的细胞毒性作用
fcwf-4细胞对I型FIPV、II型FIPV和II型FECV都很敏感。细胞毒性百分比的计算公式为：细胞毒性（％）=100-[（ICZ处理组细胞的OD/ICZ未处理组细胞的OD）]×100。
ICZ的CC50和CC10分别为208.0±22.9（平均值±SE）μM和1.1±0.4（平均值±SE）μM（图1）。
图1ICZ在fcwf-4细胞中的细胞毒性作用
黑色圆圈表示用ICZ处理的细胞，白色圆圈表示未用ICZ处理的对照组细胞。
空斑减数试验，研究使用ICZ对FCoV感染fcwf-4细胞的影响
病毒蛋白表达试验，进一步评估ICZ对FCoV感染力的影响
空斑抑制试验测定在FIPV-1KU2感染fcwf-4细胞后再使用ICZ的效果
空斑减数率（％）=100-[（ICZ处理组空斑数）/（ICZ未处理组空斑数）]×100。研究结果表明，ICZ可以降低I型FCoVs的感染力，且呈剂量依赖型（图2A）。0.03-20μM的ICZ即能抑制I型FCoV的噬斑形成。但是，ICZ对II型FCoV的感染力影响很轻微。
基于空斑减数试验和细胞毒性测定的结果，ICZ对每种病毒的IC50（半数抑制浓度）和SI（CC50半数死亡浓度）/IC50）显示在表1中。
对病毒滴度进行测定可知，ICZ可以抑制I型FCoV的产生，且有剂量依赖性。而ICZ对II型FCoV的效果不太明显。（图2B）
通过免疫荧光（IFA）测定核衣壳蛋白水平。在用ICZ预处理的fcwf-4细胞中，FIPV-1KU2的N蛋白水平显著降低。但是ICZ预处理并没有影响FIPV-II79-1146的N蛋白水平（图2C）。
通过空斑抑制试验测定在FIPV-1KU2感染fcwf-4细胞后再使用ICZ的效果。结果显示，在感染前或感染后使用ICZ都能起到对FIPV-1KU2很好的抑制作用（图2D）。但是对FIPV-II79-1146的抑制作用很轻微。
图2.ICZ对I型FIPV和II型FIPV的抗病毒作用
D.感染后使用ICZ的抗病毒效果。KU2：FIPV-1KU2菌株，UCD1：FIPV-1UCD1菌株，UCD4：FIPV-1UCD4菌株，1146：FIPV-IIWSU79-1146菌株，ICZ：伊曲康唑。
对fcwf-4进行flipin-cholesterol染色，用莱卡显微镜和LASX集成成像系统进行分析；用AmplexRedCholesterol检测试剂盒测定细胞内胆固醇数量。评估ICZ对fcwf-4细胞的胆固醇蓄积和细胞内胆固醇水平的影响
胆固醇转运抑制剂U18666A可以强有力地抑制I型FCoVs感染。曾有报道称ICZ可抑制细胞内胆固醇的转运，作用机制与U18666A类似。
本试验对fcwf-4进行flipincholesterol染色，用莱卡显微镜和LASX集成成像系统进行分析可知，ICZ与U18999A相似，能够诱导细胞内胆固醇的蓄积（图3A）。用AmplexRedCholesterol检测试剂盒测定细胞内胆固醇数量可知，2.5μM和20μM的ICZ对细胞内胆固醇水平的降低效果均与2.0μM的U18666A一致（图3B）。
图3.ICZ对fcwf-4细胞的胆固醇蓄积和细胞内胆固醇水平的影响
A.ICZ诱导细胞内胆固醇蓄积。白色箭头指示的内容是白色方框的放大图。
在猫冠状病毒的2种血清型中，ICZ能够抑制I型FCoV感染。大约70-90％患有FIP的猫感染的是I型FCoV，将ICZ作为抗FIPV药使用可能是有效的。另一方面，ICZ不影响II型FCoV，表明ICZ的抗病毒作用根据FCoV的血清型不同而不同。
本研究结果显示，对于确诊患有FIP的猫，按照10mg/kg，一日2次，服用ICZ，可以降低病毒载量。但是长期连续使用高剂量ICZ，会导致血液丙氨酸氨基转移酶增加，指示肝脏受损，但在停止给药后这种症状能够恢复。
之前曾报道过U18666A通过作用于NPC1来抑制胆固醇转运和I型FIPV感染。该研究证实了ICZ可以抑制细胞内胆固醇转运。大家对ICZ引起细胞质中胆固醇蓄积已经有了一些研究，但机制尚未清晰。最近有报道称，ICZ通过作用于NPC1使溶酶体中的胆固醇蓄积。根据该报告，ICZ可以通过与U18666A相同的机制来抑制I型FCoV的复制。另外，ICZ通过作用于NPC1以外的蛋白质来抑制I型FCoV以外的病毒的感染。
不过该结论仅针对于本试验研究，还未在临床上被实践应用。感兴趣的医生们可以尝试给药~