酶联免疫斑点技术(EnzymeLinkedImmunospotAssay,ELlSPOT)是细胞免疫学研究中敏感的检测方法之一,可以在单细做水平对抗体分泌细胞(ASC)及细胞因子(CK)分泌细胞进行检测。由于是单细胞水平检测,ELISPOT比ELISA和有限稀释法等具有更高的灵敏性。能从20万-30万细胞中检出1个分泌该蛋白的细胞。并且该方法能够对抗原刺激后的活细验进行功能性检测,具有较高的特异性、直观可信度高,并且易操作,已被广泛用于分泌CK细胞检测或ASC测定中,在国内外免疫学界获得了广泛的应用。
AIDEliSpotReaderClassic
酶联免疫斑点分析仪
德国艾迪(AID)是的研发并生产酶联斑点分析仪的厂商,早在全球上市酶联斑点分析仪,自AIDEliSpotReader上市以来,已经有超过1500多家实验室正在使用AID的EliSpotReader-酶联免疫斑点分析仪。
AIDEliSpotReader硬件和软件完全符合欧盟CE认证,FDA21CFRpart11规范、GMP/GLP标准。
AIDEliSpotReaderClassic主要配置:
德国制造高分辨率科研级别相机,彩色CCD芯片,清晰捕捉微小斑点
QuadPack高精度电动载物台:全自动控制,位移,各孔自动居中
LED环形无影照明光源:照射均匀,可清晰分辨因孔侧壁反光造成的幻影现象,准确识别孔底边缘
水准的电动光学镜头:镜头自动聚焦,自动曝光调节,保证清晰捕捉微小斑点
独立高配置计算机系统:与分析仪独立,有效减少故障率,预装正版Win7及Office软件等
ELISPOT软件:全自动读板,自动计数分析;同步完成斑点图像扫描、斑点计数与结果分析;
AIDEliSpotReader软件功能:
斑点图像采集与计数:
全自动读板,自动采集各孔图像;
内置不同因子参数设置,直接调用;
CountAID功能协助优化读数参数,并具有智能参数记忆功能。
结果分析:
直接判断阴阳性检测结果;
诊断模块AIDiagnostic,适用于临床诊断用ELISPOT实验的结果判读,单独输出每例病人斑点图像和结果报告;
统计分析各孔斑点分布、对比免疫反应强弱、细胞因子分泌量化比较等。
数据输出与质控:
可输出单孔图像、任意孔及整板图像;
多种保存格式,Excel,Txt,PPT等;
输出数据可自定义包含斑点数,SFU,光密度强度,Activities,斑点分布图表等;
包含质控模块,操作历史自动记录,符合GLP规范。
Applications-酶标ELISPOT应用文献:
Science1998,279:QuantitationofHIV-1–SpecificCytotoxicTLymphocytesandPlasmaLoadofViralRNA.GrahamS.Ogg,XiaJin,etal.
Science1998,281:IdentificationofLFA-1asacandidateautoantigenintreatment-resistantLyme-Arthritis.GrossDM,etal.
Nature2005,433,887-892.Toll-likereceptor3promotescrossprimingtovirus-infectedcells.OliverSchulz1*,etal.
Lancet2005,366:1443-1451.EffectofBCGvaccinationonriskofMycobacteriumtuberculosisinfectioninchildrenwithhousehold
tuberculosiscontact:aprospectivecommunity-basedstudy.AhmetSoysal,etal.
Lancet2003Apr5;361(9364):1168-73.ComparisonofT-cell-basedassaywithtuberculinskintestfordiagnosisofMycobacteriumtuberculosisinfectioninaschooltuberculosisoutbreak.EwerK,etal.
Blood2009,114:4089-4098.Interleukin-21restoresimmunoglobulinproductionexvivoinpatientswithcommonvariableimmunodeficiencyandselectiveIgAdeficiency.StephanBorte,etal.
AIDiSpotReader荧光酶联免疫斑点分析仪
(可见光/荧光双重检测功能的ELISPOT分析仪)
AIDiSpotReader主要配置:
德国制造光学系统高分辨率科研级别相机,彩色CCD芯片,高品质成像,保证微小斑点及斑点晕的识别
水准的电动光学镜头:镜头自动对焦,自动曝光调节,保证清晰捕捉微小斑点
荧光照明系统:高能氙灯,激发效率高,波谱范围广250-1000nm,是适合荧光成像的激发光源
4-8位滤光片轮,全自动切换,至少标配FITC和Cy3荧光滤光片,其他波长可加配
独立高配计算机系统:与分析仪独立有效减少故障率,配置实时更新
ELISPOT软件:全自动读板,自动计数分析;自动叠加不同荧光通道图像,找出共染色斑点(共分泌细胞)
AIDiSpotReader专利的软件功能及技术先进性:
专利的荧光图像Overlay技术保证多色因子共分泌斑点准确识别,避免酶标双色检测中因不同细胞因子分泌量不均而引起的误判
全自动判读:iSpot对板上每孔的各种颜色荧光斑点分别成像,例如检测FITC标记的IFN-γ分泌情况和Cy3标记的IL-2分泌情况,软件再自行将不同荧光图像叠加(Overlay),准确识别共分泌(IFN-γ&IL-2)细胞。整个过程全自动,无需人工干预;
性能稳定,兼容扩展性好:高能激发保证微弱荧光信号检测,窄带滤光片保证特异性信号检测,多色扩展只需加配滤光片;
技术先进性:早在全球上市酶联斑点分析仪,1996年发明《应用Elispot方法检测血液细胞活性》的专利;唯一拥有《以荧光滤光片为基础进行荧光多色ELISPOT的检测系统》的专利PCT/EP2008/009112‐FluoroAID;
学术发表性:从荧光款2007年上市到现在,80%荧光EliSpot应用SCI文献是由发表的,被公认作荧光检测的佳选择;
国际认可度高:与牛津大学Oxford免疫学实验室密切合作开发是其用于结核的酶联斑点(T-Spot)诊断的专用工具;国际艾滋病、疫苗行动组织(IAVI)指定品牌;全球Elispot试剂盒开发实验室(如瑞典Mabtech)专用品牌。
Applications-荧光ELISPOT应用文献:
NatureMedicine.2013Oct;19(10):1305-13.Cellularimmunecorrelatesofprotectionagainstsymptomaticpandemicinfluenza.SaranyaSridhar,&AjitLalvani,etal.
Infection,2014Jan.IGRA-positivepatientsandinterferon-gamma/interleukin-2signatures:CantheFluoroSpotassayprovidefurtherinformationP.Bittel,etal.
Journalofinternalmedicine,2013.DecreasedfunctionalTlymphocyte-mediatedcytokineresponseinpatientswithchemotherapy-inducedneutropenia.hrmalmL.,etal.
MethodsMolBiol.2012;792:77-85.Dual-andtriple-colorfluorospot.AhlborgN,AxelssonB.
ELISPOT应用领域(Application):
免疫学基础研究:T细胞和B细胞,Th0/Th1/Th2细胞转换分析
疫苗研究:ELISPOT是检测和评价疫苗的细胞免疫的有效方法。国际上普遍采用ELISPOT方法监测HIV疫苗研究中的免疫应答反应,在国际艾滋病疫苗行动计划中,采用ELISPOT法对T细胞功能进行评价。
药物筛选:化合物和药物免疫学反应的筛选感染性疾病诊断与研究:例如结核病的临床诊断,莱姆病、艾滋病等传染病的研究
肿瘤免疫研究:已用于分析和评价在癌症病人中诱导肿瘤特异的T细胞的疫苗试验。治疗前后特异性细胞免疫应答水平的检测,可有效的评估治疗效果,对于治疗和用药提供重要的参考信息。
自身免疫病研究:调整机体免疫调节功能,对自身免疫病的治疗揭供更有效的措施