本书系统阐述了实时荧光PCR技术的基础理论和临床检测方法，共25章。
包括实时荧光PCR技术的基本原理和方法，PCR实验室设计与质量管理，检验标本的采集、运送、保存及核酸提取，PCR测定数据处理，PCR检验仪器设备，检验质量保证，实时荧光PCR检测病毒核酸检测的标准物质。
以及各型肝炎病毒、人免疫缺陷病毒、人乳头瘤病毒、巨细胞病毒、冠状病毒、EB病毒、流感病毒、沙眼衣原体、结核杆菌、淋病奈瑟菌、幽门螺杆菌、肺炎支原体、刚地弓形虫、解脲支原体等实时荧光PCR检测的标本采集与处理、引物和探针设计及临床意义。
本书资料翔实、新颖，实用性、指导性强，是从事临床疫病研究、诊治的重要参考书。
目录
第1章临床PCR技术的发展历史及趋势(1)
第一节PCR的起源和耐热DNA聚合酶的应用(1)
一、PCR的起源(1)二、耐热DNA聚合酶的应用(2)
第二节PCR的基本原理(3)
第三节PCR的反应动力学(5)
第四节PCR的扩增体系和扩增条件(5)一、PCR扩增体系的基本要素(5)二、PCR的标准扩增体系(8)三、PCR扩增的增强剂(9)
四、降落PCR(9)五、热启动PCR(10)六、COLDGPCR(10)七、PCR扩增结果分析(11)
第五节PCR的特点(12)一、高特异性(12)二、高灵敏度(12)三、简便快速(12)
四、特定的低纯度标本也可使用(12)
第六节PCR的发展(12)
参考文献(13)
第2章实时荧光PCR技术的基本原理和方法(14)
第一节发展历程(14)
第二节基本原理(15)一、PCR扩增的理论模式(15)二、实时荧光PCR的理论基础(16)三、TaqMan实时荧光PCR的基本原理(17)四、双链DNA交联荧光染料实时荧光PCR的基本原理(19)五、双杂交探针实时荧光PCR的基本原理(20)六、分子信标实时荧光PCR的基本原理(20)七、蝎形探针实时荧光PCR的基本原理(21)八、数字实时荧光PCR的基本原理(24)
第三节引物、探针的特点及设计软件(26)一、引物的特点(26)二、探针的特点(26)三、引物和探针设计软件(27)
第四节多重实时荧光PCR(28)参考文献(28)
第3章临床PCR实验室的设计及质量管理体系的建立(30)
第一节实验室的分区规划设计(30)一、标本的接收(30)二、实验室分区设计的一般原则及工作流程(31)
第二节实验室质量管理体系的建立(39)一、实验室质量管理概述(39)二、实验室质量管理的特点(41)三、质量体系文件的编写(42)
第三节实验室的记录管理(56)一、记录的种类(56)二、记录的标识(56)三、记录的填写(57)四、记录的封面和目录(59)五、记录的良好保存(59)六、记录的保存期限(59)七、过期记录的处理(59)八、记录表格样式的持续改进(59)九、电子记录的管理(60)
第四节实验室验收与实验室认可(60)一、实验室认可的由来及目的(60)二、实验室认可与认证的区别(61)三、实验室验收与实验室认可的关系(61)参考文献(62)
第4章临床PCR检验标本的采集、运送、保存及核酸提取(63)
第一节标本采集、运送、保存(63)一、标本采集(63)二、标本运送(65)三、标本保存(65)
第二节常见临床标本的处理和保存(66)一、血清(浆)样本(66)二、全血样本(66)三、外周血单个核细胞(66)四、痰(66)五、棉拭子(67)六、脓液(67)七、体液(68)八、乳汁(68)九、组织(69)
第四节核酸的提取方法(72)一、DNA提取的经典方法(72)二、RNA的提取(73)三、核酸提取的改良方法(74)参考文献(78)
第5章实时荧光PCR测定的数据处理(83)
第一节基本概念(83)
第二节实时荧光PCR外标绝对定量的数学模型(85)一、基本计算公式的推导(85)二、纵坐标为起始拷贝数对数值横坐标为Ct时的数学模型(85)三、纵坐标为Ct横坐标为起始拷贝数时的数学模型(86)
第三节实时荧光PCR相对定量的数学模型(87)一、相对定量的标准曲线法(87)二、2-ΔΔCt法(89)三、2-ΔΔCt的改良方法(89)四、多重PCR法(91)
第四节用曲线拟合的方法进行数据处理(92)一、Liu与Saint的方法(92)二、Ramakers等的方法(92)三、Tichopad等的方法(92)参考文献(93)
第6章实时荧光PCR仪及其发展(94)
第一节PCR仪的发展历史及基本原理(94)一、空气驱动循环PCR仪(94)二、变温金属块PCR仪(95)
第二节实时荧光PCR仪简介(95)一、美国ABI公司生产的实时荧光PCR仪(95)二、美国Cepheid公司的SmartCycler实时荧光PCR仪(98)三、美国BioGRad公司的实时荧光PCR仪(99)四、美国Stratagene公司的实时荧光PCR仪(100)五、Roche公司的LightCycler实时荧光PCR仪(101)六、Corbert的RotorGene实时荧光PCR仪(103)七、Eppendorf公司的Mastercyclereprealplex实时荧光PCR仪(104)
第三节实时荧光PCR仪选择(104)一、仪器使用的广泛程度(104)二、工作量(104)三、耗材的开放性(105)四、硬件设计特点(105)五、检测通道和可检测的荧光染料(105)六、温度梯度功能(105)七、软件功能(105)
第四节数字PCR仪简介(106)一、微流控芯片数字PCR(107)二、液滴数字PCR(107)
第五节实时荧光PCR仪的使用、维护和校准(108)一、实时荧光PCR仪使用中的注意事项(108)二、维护和校准(108)参考文献(111)
第7章临床PCR检验仪器设备的使用、维护和校准(112)
第一节天平(112)一、电子分析天平及其分类(112)二、天平的正确使用(113)三、天平的选择(114)四、天平的维护和校准(114)
第三节微量加样器(122)一、微量加样器的一般原理及分类(122)二、加样器的选择及使用(123)三、加样器的维护和校准(129)参考文献(133)
第8章临床PCR检验的质量保证(134)
第一节概述(134)一、基本概念(134)二、质量保证、室内质量控制和室间质量评价之间的关系(136)三、标本采集、运送、保存及其质量控制(136)
第二节室内质量控制(137)一、测定前质量控制(137)二、核酸样本的制备、扩增检测及其质量控制(144)三、统计学质量控制(146)
第三节室间质量评价(160)一、室间质量评价的程序设计(161)二、室间质量评价的局限性(164)参考文献(165)
第9章病毒核酸检测的标准物质及其应用(167)
第一节概述(167)一、基本概念(167)二、病毒核酸检测用标准物质的种类和溯源关系(169)
第二节病毒核酸检测用标准物质的制备(170)一、原材料的选择和分装(171)二、均匀性和稳定性(172)三、定值(174)四、标准物质的保存(175)五、核酸检测用标准物质的意义(175)六、核酸检测用标准物质的展望(176)参考文献(179)
第10章甲型肝炎病毒实时荧光PCR检测及临床意义(182)
一、HAV的特点(182)二、HAVRNA实时荧光RTGPCR检测(182)三、HAVRNA检测的临床意义(185)参考文献(186)
第11章乙型肝炎病毒实时荧光PCR检测及临床意义(187)
一、HBV的特点(187)二、HBVDNA实时荧光PCR测定(190)三、HBV变异的检测及其临床意义(196)四、HBVcccDNA的检测及其临床意义(200)五、HBV基因型的检测及其临床意义(201)六、HBVRNA的检测及其临床意义(204)七、HBV全基因组测定及其临床意义(205)参考文献(206)
第12章丙型肝炎病毒实时荧光RTGPCR检测及临床意义(210)一、HCV的形态和基因组结构特点(210)二、HCV的复制特点(211)三、HCV的变异特点及基因型(211)四、HCVRNA实时荧光RTGPCR测定(212)五、HCV基因分型检测及其临床意义(220)参考文献(223)
第13章人免疫缺陷病毒G1实时荧光RTGPCR检测及临床意义(226)
一、HIVG1的特点(226)二、HIVG1RNA的实时荧光RTGPCR测定(227)三、HIVG1RNA测定的临床意义(234)参考文献(235)
第14章人乳头瘤病毒实时荧光PCR检测及临床意义(237)
一、HPV的形态和基因结构特点(237)二、HPV的体内复制特点(239)三、病毒的变异特点(239)四、HPV基因型(240)五、HPVDNA的实时荧光PCR测定(240)六、HPVDNA检测的临床意义(248)参考文献(250)
第15章巨细胞病毒实时荧光PCR检测及临床意义(253)
一、人类巨细胞病毒的特点(253)二、人类巨细胞病毒实时荧光PCR测定(254)三、巨细胞病毒PCR检测的临床意义(267)参考文献(268)
第16章严重急性呼吸综合征冠状病毒实时荧光RTGPCR检测及临床意义(269)
一、SARSGCoV的特点(269)二、SARSGCoVRNA实时荧光RTGPCR检测(270)三、SARSGCoVPCR检测的临床意义(286)参考文献(286)
第17章EB病毒实时荧光PCR检测及临床意义(288)
一、EB病毒的特点(288)二、EB病毒实时荧光PCR测定(289)三、EB病毒PCR检测的临床意义(294)参考文献(295)
第18章流感病毒实时荧光RTGPCR检测及临床意义(296)
一、流感病毒的特点(296)二、流感病毒的实时荧光RTGPCR测定(298)三、流感病毒RTGPCR检测的临床意义(320)参考文献(320)
第19章风疹病毒实时荧光RTGPCR检测及临床意义(321)
一、风疹病毒的形态和基因组结构及功能特点(321)二、风疹病毒的复制特点(322)三、风疹病毒的变异特点及基因型(323)四、风疹病毒实时荧光RTGPCR测定及其临床意义(323)参考文献(330)
第20章麻疹病毒实时荧光RTGPCR检测及临床意义(332)
一、麻疹病毒的形态和基因组结构及功能特点(332)二、麻疹病毒的复制特点(334)三、麻疹病毒的变异特点及基因型(335)四、麻疹病毒实时荧光RTGPCR测定及其临床意义(335)参考文献(339)
第21章手足口病病原体实时荧光RTGPCR检测及临床意义(341)
一、手足口病病原体的形态和基因组结构特点(341)二、手足口病病原体复制特点(341)三、手足口病病原体实时荧光RTGPCR测定及其临床意义(342)四、手足口病病原体检测及其临床意义(349)参考文献(349)
第22章埃博拉病毒实时荧光定量RTGPCR检测及临床意义(351)
一、EBOV的形态和基因组结构特点(351)二、EBOV的基因分型(352)三、EBOVRNA实时荧光RTGPCR测定及其临床意义(352)参考文献(360)
第23章中东呼吸综合征冠状病毒实时荧光RTGPCR检测及临床意义(361)
一、MERSGCoV的形态和基因组结构特点(361)二、MERSGCoV的感染过程(362)三、MERSGCoVRNA实时荧光RTGPCR测定及其临床意义(363)参考文献(379)
第24章沙眼衣原体实时荧光PCR检测及临床意义(381)
一、沙眼衣原体的形态和基因组结构特点(381)二、沙眼衣原体的实时荧光PCR测定(381)三、沙眼衣原体PCR检测的临床意义(391)参考文献(391)
第25章结核杆菌实时荧光PCR检测及临床意义(394)
一、结核杆菌的特点(394)二、结核杆菌实时荧光PCR检测(395)三、结核杆菌PCR检测的临床意义(405)参考文献(406)
第26章淋病奈瑟菌实时荧光PCR检测及临床意义(407)
一、淋病奈瑟菌的特点(407)二、淋病奈瑟菌实时荧光PCR测定(408)三、淋病奈瑟菌PCR检测的临床意义(418)参考文献(419)
第27章幽门螺杆菌实时荧光PCR检测及临床意义(420)
一、幽门螺杆菌的特点(420)二、幽门螺杆菌实时荧光PCR测定(421)三、幽门螺杆菌PCR检测的临床意义(430)参考文献(430)
第28章肺炎支原体实时荧光PCR检测及临床意义(432)一、肺炎支原体的结构特点(432)二、肺炎支原体的实时荧光PCR检测(432)三、肺炎支原体PCR检测的临床意义(437)参考文献(437)
第29章刚地弓形虫实时荧光PCR检测及临床意义(438)
一、刚地弓形虫的特点(438)二、刚地弓形虫的实时荧光PCR检测(439)三、刚地弓形虫PCR检测的临床意义(444)参考文献(444)
第30章解脲支原体实时荧光PCR检测及临床意义(446)
一、解脲支原体的特点(446)二、解脲支原体实时荧光PCR检测(446)三、解脲支原体PCR检测的临床意义(451)参考文献(452)
第31章EGFR基因实时荧光PCR检测及临床意义(453)
第32章KRAS基因实时荧光PCR检测及临床意义(466)
一、KRAS基因特点及常见突变类型(466)二、KRAS基因突变实时荧光PCR测定及其临床意义(466)参考文献(477)
第33章BRAF基因突变的实时荧光PCR检测及临床意义(479)
一、BRAF的基因组结构特点(479)二、BRAF基因突变实时荧光PCR测定及其临床意义(480)参考文献(484)
第34章PIK3CA基因突变实时荧光PCR检测及临床意义(486)
一、PIK3CA的基因结构特点(486)二、PIK3CA基因突变实时荧光PCR测定及其临床意义(487)参考文献(497)