伪狂犬病毒（PRV）是一种疱疹病毒，猪只感染后终生携带。母猪感染PRV后，可造成流产、死胎、木乃伊胎；仔猪感染PRV后，出现神经症状、呼吸症状，死亡率较高。PRV可以通过口鼻接触或空气飞沫感染健康猪群，空气飞沫在猪舍中游离，能迅速导致大量猪只感染。PRV基因缺失疫苗的广泛应用，使得通过检测gE抗体鉴别伪狂犬野毒感染变得更加方便。由于gE抗体诊断在鉴别野毒感染上的优势，gE抗体诊断成为大规模监测猪场伪狂犬野毒感染范围的有效方法。
但是伪狂犬gE抗体诊断也存在不足之处。由于伪狂犬野毒感染后终生带毒，终生产生gE抗体，而且伪狂犬gE母源抗体持续期可达90天，因此伪狂犬阳性场爆发疑似伪狂犬疫病，不能简单地通过gE抗体鉴别诊断进行确诊。
图1：伪狂犬病毒感染后gE抗体消涨规律
对于伪狂犬阴性场，猪只感染伪狂犬野毒后（图1红色线），从感染、潜伏期到发病前期，伪狂犬gE抗体（如图1中绿色线）的滴度都非常低，到发病期中后阶段，伪狂犬gE抗体的滴度才渐渐升高。由于抗体产生的滞后性，因此，阴性场在爆发疑似伪狂犬疫病时的紧急诊断，仅仅使用gE抗体检测方法容易遗漏真正的病因。
本案例是一例关于伪狂犬阴性场临床爆发疑似伪狂犬症状时的送检结果分析，希望广大养猪从业者在遇到此类情况时，正确送检。
一、猪场背景
二、实验材料
1.样品：流产母猪血清3份、流产胎儿1份，患病仔猪组织3份、血清3份。患病猪脑组织与其他组织分开检测。
2.试剂：核酸提取试剂盒、实时荧光PCR试剂盒购自湖南国测生物科技有限公司，伪狂犬gE抗体试剂盒购自北京金诺百泰生物技术有限公司（北京金偌诊断）。
三、实验方法
组织与流产胎儿取样后，研磨，提取病毒核酸，进行荧光定量PCR；流产母猪血清按照伪狂犬gE抗体试剂盒说明书操作。
四.实验结果
1.病原检测结果显示：伪狂犬野毒阳性、链球菌阳性，如图2-3所示。其中组织中伪狂犬野毒的Ct值在14-29之间（Ct值越低，病毒含量越高），链球菌Ct值在30-35之间，因此判定伪狂犬野毒为原发性病因，链球菌为继发性病因。
注：8号样品“铁”为该猪场仔猪补铁用的铁剂。
图2：病原检测结果
图3：荧光定量PCR检测数据
2.伪狂犬gE抗体检测结果：流产母猪伪狂犬gE抗体均为阳性，患病仔猪伪狂犬gE抗体均为阴性，如表1所示。
表1：伪狂犬gE抗体检测结果
样品原来编号
伪狂犬gE抗体
S/N值
判定结果
2-仔猪
0.72
—
3-仔猪
0.70
4-仔猪
0.93
5-流产母猪
0.09
+
6-流产母猪
0.26
7-流产母猪
0.51
注：伪狂犬gE抗体检测试剂盒购自金偌，S/N值≤0.6，判为阳性；S/N值>0.6，判为阴性。
3.综合诊断。检测结果显示患病仔猪伪狂犬野毒阳性、链球菌阳性，流产母猪伪狂犬gE抗体均为阳性，患病仔猪伪狂犬gE抗体均为阴性。综合诊断，导致该场母猪流产的病原是伪狂犬野毒，导致仔猪神经症状的原发性因素为伪狂犬野毒感染，继发性因素为链球菌感染。
五.讨论与分析
1.确诊病因。导致该场母猪流产的病原是伪狂犬野毒，导致仔猪神经症状的原发性因素为伪狂犬野毒感染，继发性因素为链球菌感染。因此优先考虑伪狂犬野毒的防控。
3.阴性场疑似伪狂犬爆发的紧急诊断，遵循病原诊断为主，抗体诊断为辅的策略。由于伪狂犬野毒感染早期，抗体产生的滞后性，抗体诊断试剂盒无法检测到，此时猪场又急需调查和控制伪狂犬野毒的感染范围。因此阴性场疑似伪狂犬爆发的紧急诊断策略是：先通过病原诊断确定病原，然后使用gE抗体检测方法连续多次的监测，淘汰阳性猪只，控制感染范围，直至重新恢复阴性。
附：诊断后的建议
一.紧急免疫1.立即注射伪狂犬疫苗。母猪免疫进口疫苗2-3头份/头，国产疫苗3头份以上/头，不同的栏舍用不同针头。母猪免疫后，仍然会有部分母猪出现流产，这并不是疫苗引起的流产，而是猪群早期感染伪狂犬病毒导致的。
2.其他栏舍进行伪狂犬疫苗的紧急免疫，提高猪群预防伪狂犬感染的能力。
3.从本次检测结果观察，Ct值较小，说明猪群感染伪狂犬的病毒载量比较高，仔猪出生后即出现神经症状，出现划水状，在24小时内出现死亡，即使仔猪耐过，临床可能会出现顽固性的腹泻现象，这与伪狂犬野毒感染有直接关系。
4.如果后期育肥猪出现干咳现象，需立即注射伪狂犬疫苗2头份。
5.禁止公猪诱情，严格隔离饲养，公猪伪狂犬疫苗免疫频次调整至每年4次，同时注意采集精液及时监控。
二.生物安全措施
1.哺乳仔猪出现神经症状，立即处死，清粪及消毒产床；
2.适当降低饲养密度，增加消毒频次，控制人员流动；
3.全场进行灭鼠工作，猪群全进全出；
4.对于近期出现流产和出现神经症状的阳性母猪，立即淘汰。
三.保健工作
预防伪狂犬感染继发的传胸及猪肺疫，做好紧急预案，若发现猪场出现呼吸道问题，及时送检鼻腔试子及肺脏，通过病原检测和药敏试验预防呼吸道问题；
四.药物防控
在控制住伪狂犬病毒后，用复方阿莫西林、磺胺类、林可霉素、氟苯尼考等药物进行细菌类疾病的防控，具体的药物本场可通过采集发病猪的组织（组织需完整，未切碎）做细菌增殖实验，测定敏感药物，也可通过对型的灭活疫苗进行防控。
五.预防监测
1.定期做抗原与抗体的监测，对已感染伪狂犬病毒的栏舍定期采集鼻拭子，查看伪狂犬是否散毒。对未感染伪狂犬病毒的猪群，每隔一个月定期全群采集血清，发现gE抗体阳性的猪只立刻淘汰，对整个猪群应严格实施生物安全措施和疫苗高强度免疫措施，直至通过病原检测发现全场的病毒载量下降至安全范围。
2.公猪定期检测血清伪狂犬野毒抗体和精液病原，遇到野毒抗体阳性立即隔离饲养，若精液中检出伪狂犬野毒，立即淘汰。
3.后期出现链球菌临床症状的猪只，需采集新鲜的病料，做细菌的增殖实验，样本需要冷藏保存。
目前新南方国测第三方猪病检测中心实验室，可开展脐带血检测、病原检测、血清抗体检测、微生物检测、水质检测、霉菌毒素检测等，欢迎广大养殖户朋友联系送检。
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