本发明涉及一种胶体金免疫层析试纸金标垫和样品垫的处理液及处理方法，属于免疫层析检测技术领域。
背景技术：
胶体金免疫层析法(colloidalgoldimmunochromatographyassay，gica)是一种将抗原抗体特异性反应通过胶体金标记和免疫层析表现出来的一种快速检测方法，该方法与传统的血清学检测和pcr等分子生物学方法相比具有快速、简便、无需特殊实验设备、结果可靠等优势。
金标垫和样品垫是胶体金免疫层析试纸的重要组成部分，样品垫在使用前一般需要通过样品垫处理液进行处理，由于检测样本及项目的不同，不处理或使用常规的样品垫处理液应用于检测时，存在较大的问题，例如：出现假阳性和假阴性反应、阴阳性对比度不高、不能有效的促进金标结合垫中的金颗粒释放等。金标垫的主要作用是吸附标记有相应蛋白的胶体金颗粒，常用材料有聚酯膜。金标垫决定了标记有相应蛋白的胶体金颗粒的活性(包括灵敏度和特异性)、释放效果以及长期的稳定性，因此对胶体金免疫层析试纸的效果影响很大。目前金标结合垫的制备方法多为直接将标记好的浓缩的金颗粒喷涂或浸泡到聚酯膜上。或将聚酯膜通过常规的处理液浸泡处理后，再将标记好的浓缩的金颗粒喷涂或浸泡到聚酯膜上。但是使用过程中发现，该方法制备的金标结合垫在检测过程中释放慢且不完全，影响检测结果的准确性和灵敏度等。
技术实现要素：
本发明的目的在于克服现有技术的缺点，提供一种胶体金免疫层析试纸金标垫和样品垫的处理液；
本发明的另一目的提供一种胶体金免疫层析试纸金标垫和样品垫的处理方法。
本发明的目的通过以下技术方案来实现：一种胶体金免疫层析试纸金标垫和样品垫的处理液，它包括以下原料：
磷酸氢二钠：0.5～1.0％，磷酸二氢钾：0.05～0.1％，蔗糖：1～3％，tween-20：0.5～1ml/l，表面活性剂：1～2ml/l。其中，处理对象为金标垫时，表面活性剂为s6；处理对象为样品垫时，表面活性剂为s6和s9的混合溶液。
作为优选方案，它包括以下原料：
磷酸氢二钠：0.58％，磷酸二氢钾：0.052％，蔗糖：1.0％，tween-20：0.5ml/l，表面活性剂：1.0ml/l。其中，处理对象为金标垫时，表面活性剂为s6；处理对象为样品垫时，表面活性剂为s6和s9的混合溶液。
一种胶体金免疫层析试纸金标垫和样品垫的处理方法，它包括以下步骤：
s1.材料选择：选择未经较多或特殊处理的普通型玻璃纤维素膜和聚酯膜；
s2.预处理：对玻璃纤维素膜，将玻璃纤维素膜放置烘箱中充分烘干；对聚酯膜，先在纯化水中浸泡1.5～2.5h，浸泡后甩掉水分并放置在烘箱中充分烘干；其中，所述烘箱的烘干温度为110～130℃；
s3.润湿：用移液器将上述的处理液均匀的涂布在预处理后的玻璃纤维素膜和聚酯膜上，刚刚润湿即可；
s4.烘干：润湿后的玻璃纤维素膜和聚酯膜移至烘箱，在75～85℃温度下烘干，玻璃纤维素膜作样品垫待用，聚酯膜作金标垫待用。
进一步地，步骤s1中所述聚酯膜在纯化水的浸泡过程中换水两次。
一种胶体金试纸条，采用以下方法制备：
s1.制备金标结合垫：用制备好的胶体金溶液标记相应蛋白，将标记好的蛋白封闭、离心和浓缩后得到浓缩的胶体金溶液，使用胶体金喷金机将浓缩的胶体金溶液喷涂到上述处理后的聚酯膜上，37～40℃鼓风烘干，即制备成金标结合垫；
s2.组装：将上述制备的金标结合垫和经上述方法处理后的玻璃纤维素膜组合成胶体金试纸条。
进一步地，步骤s1中所述的标记相应蛋白为金黄色葡萄球菌蛋白a、检测人心肌钙蛋白小鼠单克隆抗体igg、检测犬瘟热病毒的小鼠单克隆抗体igg或大肠杆菌表达的抗原中的任意一种。
进一步地，步骤s1中所述浓缩的胶体金溶液为原体积的1/10。
本发明具有以下优点：提供了一种胶体金免疫层析试纸金标垫和样品垫的处理液，改处理液能有效改善样品垫和金标垫的一些物理或化学性质；本发明公开的处理方法与普通处理方式比较，胶体金免疫层析试纸在以下方面有明显的提高：
1.加样本和/或缓冲液后，金颗粒迅速均匀释放，并且释放完全，无任何残留；
2.检测后本底干净、洁白，有助于阴性和阳性的区别判定；
3.提高了产品的阳性检出率；
4.金标结合物稳定性有极大提高，组装的试纸条稳定性相应提高。
即：通过本发明方法改进后的试纸条，提高了检测效果，增加了产品存放的稳定性。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的描述，本发明的保护范围不局限于以下所述：
实施例1：一种胶体金免疫层析试纸金标垫和样品垫的处理液，它包括以下原料：
实施例2：一种胶体金免疫层析试纸金标垫和样品垫的处理液，它包括以下原料：
磷酸氢二钠：0.8％，磷酸二氢钾：0.08％，蔗糖：2.0％，tween-20：0.8ml/l，表面活性剂：1.5ml/l。其中，处理对象为金标垫时，表面活性剂为s6；处理对象为样品垫时，表面活性剂为s6和s9的混合溶液。
实施例3：一种胶体金免疫层析试纸金标垫和样品垫的处理液，它包括以下原料：
磷酸氢二钠：1.0％，磷酸二氢钾：0.1％，蔗糖：3.0％，tween-20：1.0ml/l，表面活性剂：2.0ml/l。其中，处理对象为金标垫时，表面活性剂为s6；处理对象为样品垫时，表面活性剂为s6和s9的混合溶液。
实施例4：一种胶体金免疫层析试纸金标垫和样品垫的处理方法，它包括以下步骤：
s1.材料选择：选择未经处理的普通型玻璃纤维素膜和聚酯膜；
s2.预处理：对玻璃纤维素膜，将玻璃纤维素膜放置烘箱中充分烘干；对聚酯膜，先在纯化水中浸泡1.5h，浸泡过程中换水两次，浸泡后甩掉水分并放置在烘箱中充分烘干；其中，所述烘箱的烘干温度为110℃；
s3.润湿：用移液器将实施例1的处理液均匀的涂布在预处理后的玻璃纤维素膜和聚酯膜上，刚刚润湿即可；
s4.烘干：润湿后的玻璃纤维素膜和聚酯膜移至烘箱，在75℃温度下烘干，玻璃纤维素膜作样品垫待用，聚酯膜作金标垫待用。
实施例5：一种胶体金免疫层析试纸金标垫和样品垫的处理方法，它包括以下步骤：
s1.材料选择：选择未经特殊处理的普通型玻璃纤维素膜和聚酯膜；
s2.预处理：对玻璃纤维素膜，将玻璃纤维素膜放置烘箱中充分烘干；对聚酯膜，先在纯化水中浸泡2.5h，浸泡过程中换水两次，浸泡后甩掉水分并放置在烘箱中充分烘干；其中，所述烘箱的烘干温度为130℃；
s3.润湿：用移液器将实施例2的处理液均匀的涂布在预处理后的玻璃纤维素膜和聚酯膜上，刚刚润湿即可；
s4.烘干：润湿后的玻璃纤维素膜和聚酯膜移至烘箱，在85℃温度下烘干，玻璃纤维素膜作样品垫待用，聚酯膜作金标垫待用。
实施例6：一种胶体金免疫层析试纸金标垫和样品垫的处理方法，它包括以下步骤：
s2.预处理：对玻璃纤维素膜，将玻璃纤维素膜放置烘箱中充分烘干；对聚酯膜，先在纯化水中浸泡2h，浸泡过程中换水两次，浸泡后甩掉水分并放置在烘箱中充分烘干；其中，所述烘箱的烘干温度为120℃；
s3.润湿：用移液器将实施例3的处理液均匀的涂布在预处理后的玻璃纤维素膜和聚酯膜上，刚刚润湿即可；
s4.烘干：润湿后的玻璃纤维素膜和聚酯膜移至烘箱，在80℃温度下烘干，玻璃纤维素膜作样品垫待用，聚酯膜作金标垫待用。
实施例7：一种胶体金试纸条，采用以下方法制备：
s2.组装：将上述制备的金标结合垫和经实施例4所述处理后的玻璃纤维素膜再组合包被有结核分枝杆菌抗原(tb-sa)蛋白的硝酸纤维素膜、吸水纸、pvc底板，经组装、切割成胶体金试纸条，可用于检测人血样中结核分枝杆菌igg抗体。
实施例8：一种胶体金试纸条，采用以下方法制备：
s2.组装：将上述制备的金标结合垫和实施例5所述方法处理后的玻璃纤维素膜再组合包被有小鼠抗人心肌钙蛋白ctni另一单克隆抗体的硝酸纤维素膜、吸水纸、pvc底板，经组装、切割成胶体金试纸条，可用于检测人血样中心肌钙蛋白ctni。
实施例9：一种胶体金试纸条，采用以下方法制备：
s2.组装：将上述制备的金标结合垫和实施例6所述方法处理后的玻璃纤维素膜再组合包被有小鼠抗犬瘟热病毒另一单克隆抗体的硝酸纤维素膜、吸水纸、pvc底板，经组装、切割成胶体金试纸条，可用于检测犬分泌物中犬瘟热病毒。
以下通过实验说明本发明的有益效果：
一、样品垫(玻璃纤维素膜)和金标结合垫(聚酯膜)的选择：
一般从供应商处能够购买到不同型号或种类的样品垫(玻璃纤维素膜)和金标结合垫(聚酯膜)，可选用未经供应商较多或特殊处理的普通型玻璃纤维素膜和聚酯膜。
二、样品垫(玻璃纤维素膜)的处理：
1.将一张a4纸大小的玻璃纤维素膜放置烘箱120℃充分烘干；
2.配制玻璃纤维素膜处理液：称取磷酸氢二钠5.8g，磷酸二氢钾0.52g，加纯化水溶解，再加1ml的表面活性剂s6和1ml的表面活性剂s9，溶解后加纯化水定容至1l；
3.用移液器将处理液均匀的涂布在玻璃纤维素膜上，刚刚润湿即可，每张玻璃纤维素膜使用的处理液的量保持相同；
4.将含有处理液的玻璃纤维素膜移至烘箱，80℃充分烘干，待用。
三、金标结合垫(聚酯膜)的处理：
1.将一张a4纸大小的聚酯膜平铺在含有1l纯化水的容器中，放置2小时，然后换水两次，充分去除聚酯膜表面附着的水溶性化学试剂及其他物质；
2.取出聚酯膜，通过甩干机甩掉水分后，放置烘箱120℃充分烘干；
3.配制聚酯膜处理液：磷酸氢二钠5.8克，磷酸二氢钾0.52g，蔗糖10g，加纯化水溶解，再加0.5ml的tween-20，2ml的表面活性剂s6，溶解后加纯化水定容至1l；
4.将烘干的聚酯膜平铺在玻璃板上，用移液器将处理液均匀的涂布在聚酯膜上，刚刚润湿即可，每张聚酯膜使用的处理液的量保持相同；
5.将含有处理液的聚酯膜移至烘箱，80℃充分烘干，待用。
三、金标结合垫的制备：
1.按照柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液，得到20-40nm大小的胶体金溶液，标记相应的蛋白。
例：标记金黄色葡萄球菌蛋白a(spa)，将胶体金用0.2m的碳酸钾调级ph值6.0-6.5，然后将胶体金放在磁力搅拌器上，将浓度为1mg/ml的spa蛋白溶液缓慢滴加进胶体金溶液，直至氯化钠测试稳定为止。
2.标记好的蛋白用10％的bsa或者其他大分子物质(如peg20000、pva等)进行封闭，一般bsa的终浓度在0.5％-1.0％之间，大分子物质在0.05-0.1％之间，得到封闭好的胶体金溶液；
4.使用胶体金喷金机将浓缩的胶体金溶液喷涂到处理好的聚酯膜上，37-40℃鼓风烘干，即制备成了金标结合垫。
四、样品垫(玻璃纤维素膜)和金标结合垫(聚酯膜)组合成胶体金试纸条并与未处理的金标垫效果比较：
1.未处理的样品垫(玻璃纤维素膜)和金标结合垫(聚酯膜)指从供货商购买未经处理的或经过tween-20浸泡然后烘干的常规处理。
2.用相同的方法，将标记、封闭好的金标结合物喷涂到聚酯膜上，烘干，然后根据检测项目的不同，在pvc底板上组装样品垫、标记好的硝酸纤维素膜、吸水纸等，组成胶体金试纸条，我们组装了检测结核分枝杆菌igg抗体试纸条(胶体金颗粒标记spa蛋白，硝酸纤维素膜包被结核抗原tb-sa蛋白)、检测人心肌钙蛋白(ctni)试纸条(胶体金颗粒标记小鼠抗人心肌钙蛋白ctni单克隆抗体，硝酸纤维素膜包被小鼠抗人心肌钙蛋白ctni另一单克隆抗体)，检测犬瘟热病毒试纸条(胶体金颗粒标记小鼠抗犬瘟热病毒单克隆抗体，硝酸纤维素膜包被小鼠抗犬瘟热病毒另一单克隆抗体)，进行检测效果比较，其优势如下：
a.经过处理的聚酯膜喷涂上标记封闭好的胶体金后，胶体金颜色鲜艳，烘干后颜色红亮；未经处理的或经过tween-20浸泡然后烘干的常规处理的聚酯膜喷涂上标记封闭好的胶体金后，胶体金颜色略发紫，烘干后颜色更紫甚至显紫褐色。
b.组装成试纸条检测效果的比较：
1)检测结核分枝杆菌igg抗体试纸条效果对比，如表1所示：
表1：检测结核分枝杆菌igg抗体试纸条效果对比
2)检测人心肌钙蛋白(ctni)试纸条效果对比，如表2所示：
表2：检测人心肌钙蛋白试纸条效果对比
3)检测犬瘟热病毒试纸条效果对比，如表3所示：
表3：检测犬瘟热病毒试纸条效果对比
结论：通过以上过程的处理，制备的样品垫(玻璃纤维素膜)和金标结合垫(聚酯膜)性质稳定，加样本检测时，金颗粒能快速并完全的释放，阴阳性对比度增加，背景良好，提高了产品的稳定性及检测效果。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都涵盖在本发明的保护范围之内。