葡萄糖氧化酶法测定血清(浆)葡萄糖
原理
葡萄糖氧化酶利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸,并释放过氧化氢。过氧化物酶在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧,并使色原性氧受体4-氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物,即Trinder反应。红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。
试剂
1./L磷酸盐缓冲液称取无水磷酸氢二钠及无水磷酸二氢钾溶于蒸馏水800ml中,用1mol/L氢氧化钠调pH至,用蒸馏水定容至1L。
2.酶试剂称取过氧化物酶1
200U,葡萄糖氧化酶1200U,4-氨基安替比林10mg,叠氮钠100mg,溶于磷酸盐缓冲液80ml中,用1mol/LNaOH调pH至,用磷酸盐缓冲液定容至100ml,置4℃保存,可稳定3个月。3.酚溶液称取重蒸馏酚100mg溶于蒸馏水100ml中,用棕色瓶贮存。
4.酶酚混合试剂酶试剂及酚溶液等量混合,4℃可以存放1个月。
5.12mmol/L苯甲酸溶液溶解苯甲酸于蒸馏水约800ml中,加温助溶,冷却后加蒸馏水定容至lL。
6.100mmol/L葡萄糖标准贮存液称取已干燥恒重的无水葡萄糖,溶于12mmol/L苯甲酸溶液约70ml中,以12mmol/L苯甲酸溶液定容至100ml。2h以后方可使用。
7.5mmol/L葡萄糖标准应用液吸取葡萄糖标准贮存液放于100ml容量瓶中,用12mmol/L苯甲酸溶液稀释至刻度,混匀。
操作步骤
1.自动分析法按仪器说明书的要求进行测定。
2.手工操作法取试管
3支,按下表操作。
读取标准管及测定管吸光度。
计算
参考范围空腹血清葡萄糖为~/L。
临床意义
1.生理性高血糖可见摄入高糖食物后,或情绪紧张肾上腺分泌增加时。
2.病理性高血糖
糖尿病:病理性高血糖常见于胰岛素绝对或相对不足的糖尿病患者。
内分泌腺功能障碍:甲状腺功能亢进,肾上腺皮质功能及髓质功能亢进。引起的各种对抗胰岛素的激素分泌过多也会出现高血糖。注意升高血糖的激素增多引起的高血糖,现已归入特异性糖尿病中。
颅内压增高:颅内压增高刺激血糖中枢,如颅外伤、颅内出血、脑膜炎等。
脱水引起的高血糖:如呕吐、腹泻和高热等也可使血糖轻度增高。3.生理性低血糖见于饥饿和剧烈运动。
4.病理性低血糖
胰岛β细胞增生或胰岛β细胞瘤等,使胰岛素分泌过多。
对抗胰岛素的激素分泌不足,如垂体前叶功能减退、肾上腺皮质功能减退和甲状腺功能减退而使生长素、肾上腺皮质激素分泌减少。
严重肝病患者,由于肝脏储存糖原及糖异生等功能低下,肝脏不能有效地调节血糖。
注意事项
α型,故须放置2h以上,待变旋平衡后方可应用。
2.葡萄糖氧化酶法可直接测定脑脊液葡萄糖含量,但不能直接测定尿液葡萄糖含量。因为尿液中尿酸等干扰物质浓度过高,可干扰过氧化物酶反应,造成结果假性偏低。
3.测定标本以草酸钾-氟化钠为抗凝剂的血浆较好。取草酸钾6g,氟化钠4g。加水溶解至100ml。吸取到试管内,在80℃以下烤干使用,可使2~3ml血液在3~
4天内不凝固并抑制糖分解。
4.本法用血量甚微,操作中应直接加标本至试剂中,再吸试剂反复冲洗吸管,以保证结果可靠。
5.严重黄疸、溶血及乳糜样血清应先制备无蛋白血滤液,然后再进行测定。
评价线性范围至少可达/L,回收率94%~105%,批内CV为%~%。批间CV为2%左右,
左旋多巴100mg/L,维生素C
5mg/L以上,谷胱甘肽100mg/L时,可引起负误差;半胱氨酸达10mmol/L时,产生相当/L葡萄糖的正误差。
篇二:葡萄糖氧化酶法测定血清葡萄糖
实验名称:葡萄糖氧化酶法测定血清(浆)葡萄糖
实验原理
葡萄糖可由葡萄糖氧化酶氧化成葡萄糖酸并产生过氧化氢,后者在过氧化物酶的作用下,能与苯酚及4-氨基安替比林作用产生红色醌化合物。醌的产量与葡萄糖量成正比。醌化合物呈红色,其颜色深浅与葡萄糖含量成正比,在500nm出测定其吸光度,对照标准科计算出葡萄糖的含量。实验准备一、材料(1)血清
(2)血浆:以草酸钾-氟化钠为抗凝剂的血浆二、试剂
(1)试剂R1:磷酸盐缓冲液100mmol,,苯酚10mmol/L。(2)试剂R2:磷酸盐缓冲液100mmol,,葡萄