C57BL/6雄性小鼠40只，体质量22~25g，来自中国医科大学实验动物部。将小鼠随机分为4组:对照组、LPS组(腹腔注射LPS10mg/kg)、LPS+5000U/kg乌司他丁组和LPS+50000U/kg乌司他丁组。本研究中动物处理方法符合动物伦理学标准。
LPS(美国Sigma公司)；乌司他丁(国药准字H19990134，100000U/支，广东天普生化医药股份有限公司)；Nrf2抗体(英国Abcam公司)；肿瘤坏死因子-α(tumornecrosisfactor-α，TNF-α)和白细胞介素-6(interleukin-6，IL-6)ELISA检测试剂盒(武汉博士德生物有限公司)；丙二醛(malondialdehyde，MDA)和过氧化物歧化酶(superoxidedismutase，SOD)检测试剂盒(南京建成生物科技有限公司)。
LPS处理24h后处死小鼠，通过心腔取血，2000r/min下离心20min后取上清液，应用罗氏自动生化检测仪(瑞士罗氏公司)检测各组小鼠血清Cr和BUN水平。
取各组小鼠右肾，4%多聚甲醛固定，包埋切片后进行HE染色。用LeicaDMi8显微镜(德国徕卡公司)观察肾组织的形态变化(×400)。对肾脏病理损伤程度进行盲法评分，AKI评分标准分5个等级:0分，正常肾组织；1分，肾小管受损范围<25%；2分，肾小管受损范围25%~<50%；3分，肾小管受损范围50%~<75%；4分，肾小管受损范围≥75%。
LPS处理24h后处死小鼠，通过心腔取血，2000r/min下离心20min后取上清液，根据试剂盒的操作说明，采用ELISA法检测各组血清中TNF-α和IL-6的水平。
取各组小鼠左肾，用RIPA裂解液裂解匀浆，12000r/min下离心15min后取上清液，根据试剂盒的操作说明，采用ELISA法检测各组肾组织中MDA和SOD的浓度。
取各组小鼠右肾，4%多聚甲醛固定，包埋切片后，二甲苯脱蜡，乙醇脱水，清除内源性过氧化物酶，抗原修复后冲洗，封闭，一抗用Nrf2抗体稀释液(1∶150)，二抗用生物素化羊抗兔IgG，DAB显色，苏木素复染。LeicaDMi8光学显微镜下观察Nrf2在肾组织的表达(×400)。
取各组小鼠左肾组织，经裂解、匀浆、离心后，提取总蛋白，用BCA法进行蛋白定量，依次进行凝胶电泳，电转膜，室温封闭2h，加入洗膜缓冲液洗膜，加Nrf2抗体稀释液(1∶1000)，4℃孵育过夜，缓冲液冲洗后加入二抗室温下孵育，使用免疫印迹化学发光法显色，最后应用凝胶图像处理系统分析目标条带。
应用GraphpadPrism6.0统计分析数据。结果以x±s表示，2组间比较采用t检验。P<0.05为差异有统计学意义。
综上所述，乌司他丁可通过抑制氧化应激损伤和炎症反应来保护LPS刺激引起的AKI，且乌司他丁的抗氧化应激和抗炎作用呈一定程度的剂量依赖性。乌司他丁的保护作用可能与激活Nrf2的表达有关。本研究并未直接证实Nrf2参与其中，需要今后进一步的深入研究。