李涵乔，王海伦，苏美玉.8种非洲猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒的比对试验研究[J].猪业科学,2023,40(4)：67-69.
8种非洲猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒的比对试验研究
李涵乔1，王海伦2，苏美玉1
为了评价不同品牌的非洲猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒的有效性，从而保证实验室的检测结果更加的真实可信。本试验样品血清由北京测易生物科技有限公司提供的第一批124份和第二批240份血清样本，分别根据说明书进行8种不同品牌的非洲猪瘟ELISA抗体试剂盒进行检验。以3种进口品牌试剂盒分别比对，选定最优试剂盒作为参考标准。随后检测5种国产试剂盒的kappa一致性，敏感性、特异性和符合率，将5种品牌试剂盒的检测效果进行比对分析。5种试剂盒的一致性有差异，但整体水平较高；根据试验结果其中4种试剂盒的一致性及诊断效能的表现较为优秀，1种试剂盒一致性水平较低，诊断效能较差。市场所售的非洲猪瘟商品化试剂盒的检测效果存在较大差异。因此，建议监测工作中，采用国际或国内已知或指定的分析方法，通常根据公司的设备进行测试，并评估分析和分析效果，被认为是选择设备的最重要因素，以确保设备的有效性，并确保有效监测和控制非洲猪瘟。
非洲猪瘟（ASF）是一种具有高传染性的病毒性疾病，其发病率和致死率几乎为100%，主要是由于非洲猪瘟病毒（ASFV）所致。1921年，肯尼亚首先报告了该病，随后出现了好几个主要的洲际传染。中国第一例非洲猪瘟病例于2018年8月在辽宁省沈阳市被发现。从那以后，ASFV迅速蔓延到了全国各地，造成了大量的生猪生产损失。世界动物卫生组织将该病列为国家法定报告性传染病，在我国并列为国家重点防治的一类疫病。
1
材料与方法
1.1材料
1.1.1检测试剂盒
此次试验中所需要测试的8种非洲猪瘟商品化试剂盒分别购买于7家试剂公司。其中：进口3种（编号A，B，C）国产5种（编号D，E，F，G，H）；阻断法的试剂盒有2种（编号A，C），其余试剂盒为间接法。8种试剂盒的详细信息见表1。
1.1.2血清样本
第一批猪血清样本124份，因样品损耗不足后又购入样本240份，两批样本均y由北京测易生物科技有限公司供给。
1.1.3设备与耗材
奥地利TECAN公司产品的96孔SUNRISE型酶标仪。上海森信实验仪器有限公司的37℃恒温箱。Thermofisher公司产品的精确的单道和多道微量移液器以及Axygen公司的一次性移液器吸头。
1.2方法
1.2.1ELISA抗体检测
分别用（A、B、C）3种品牌ELISA试剂盒对第一批的124份猪的血清样本进行非洲猪瘟病毒抗体检测；分别用（D、E、F、G、H）5种品牌ELISA抗体检测试剂盒对第二批的240份猪血清样本进行非洲猪瘟病毒抗体的检测。检验过程应按照试剂盒的说明书进行试验，并根据说明书要求确定试验结果。
1.2.2数据处理分析
对检测数据使用Excel处理。用SPSS23.0软件进行统计学的分析。（1）结果一致性，应用kappa检验：kappa系数＜0，极差；0～0.2，微弱；0.21～0.4，弱；0.41～0.6，中度；0.61～0.8高度；0.81～1.0，极强。（2）以进口试剂盒比对结果最优的试剂盒的结果作为参考标准，计算8种试剂盒的特异性、敏感性以及符合率。
2
统计分析
2.1进口试剂盒比对结果
现利用第一批猪血清样本，对市场上常用的3种进口品牌试剂盒A，B和C分别进行比对，样本背景清晰，124份样品中50份采自非洲猪瘟阴性场，74份采自阳性场，对比三种试剂盒的诊断效能，从而选定最优试剂盒做为参考标准，对比结果见表2。
这3种试剂盒中C品牌的诊断效能最好，A和B两种试剂盒中均在阴性样本中检测出假阳性，B品牌中还检测出2份假阴性，所以本次试验以C品牌作为参考标准。
2.2国产试剂盒比对结果
利用D品牌ELISA检测试剂盒对第一批124份猪血清样本进行检测，以C品牌ELISA试剂盒检测结果作为参考标准，具体检测结果见表3。
因第一批样本损耗不足，故利用（E，F，G，H）4种品牌试剂盒对第二批240份样本进行检测，C品牌试剂盒检测出33份阳性样品和207份阴性样品，均以C品牌检测结果作为参考标准。具体检测结果见表4。
D试剂盒检测出9个假阴性，E试剂盒检测出1个假阳性，F试剂盒检测出3个假阳性，G试剂盒检测出1个假阳性，H检测出18个假阴性。
将5种非洲猪瘟试剂盒的检验结果分别和C试剂盒的检验结果进行kappa一致性检验分析。分别得出各试剂盒的kappa值，如表5所示。
3
诊断效能评价
以C品牌为标准，根据表3的检测结果，分别计算5种试剂盒的敏感性、特异性和符合率。具体比较结果见表6。
4
分析与讨论
通过比较本研究中的8种试剂盒，可以更好地了解非洲猪瘟商业化试剂盒的检测结果，可以为非洲猪瘟的防范防控提供技术帮助。
根据测试结果，（D，E，F，G）4种试剂盒的不仅一致性有良好表现，而且诊断效能也有较优的表现，但是H品牌的一致性水平比较低，诊断效能比较差，而在实践中容易导致检验的结果偏差比较大。5种试剂盒的检测方法都是间接法，但检测效果有比较大的区别。间接非洲猪瘟ELISA法对包被抗原的纯度要求比较高。如果太低就易出现假阳性，会导致结果不准。总之，不同品牌和类别只能作为非洲猪瘟试剂盒选择的参考条件之一，但是检测效果应该是商品化试剂盒选择的第一考虑因素。
因为样本量有限，所以只对一批进行了对比，并不能保证各批间的稳定性。因此，在使用过程中，需要对其稳定性进行进一步的评价。现在市面上有很多种非洲猪瘟ELISA试剂盒的品牌，但从这次的对比来看，他们的效果有很大的差别。因此，监测抗体时，我们应该仔细选择，建议选择效果最好的E和G，这对非洲猪瘟病毒检验的好坏具有重大意义。
5
结论
本试验结果表明，市场上销售的非洲猪瘟商品化试剂盒的检验效果有比较大的区别。建议在非洲猪瘟血清抗体监测工作中，采用国际或国内已知或指定的分析方法，通常根据公司的设备进行测试，并评估分析和分析效果，被认为是选择设备的最重要因素，以确保设备的有效性，并确保有效监测和控制非洲猪瘟。