商业和临床兽医实验室中的错误可分为:分析前、分析中或分析后。分析前错误在人类和兽医实验室中最为常见,通常与样本收集和处理中的疏忽有关。分析误差与仪器或方法的精密度、准确度、灵敏度和特异性有关,分析后误差可能与转录误差或对呈现数据的误解有关。
以下是导致分析前错误实验室结果的血液采集和样本处理的5个最常见原因:
01、非禁食患者
图1未禁食狗的脂血。该样品冷藏过夜,使红细胞沉降,从而突出血浆的脂血性质(箭头)。
图2脂血血清。如果使用间接电位测定法评估方法,过量的脂质会导致测量电解质的错误减少
02、体外溶血
溶血(即红细胞溶解导致粉红色至红色血清(图3)或血浆)分为病理性(即体内)或人为性(即体外)。体外溶血可能与创伤性样本收集、样本处理不当、极端温度和/或延迟处理有关。体外溶血降低红细胞浓度;然而,在没有体内溶血的情况下,血红蛋白浓度是准确的,因为许多分析仪的血红蛋白测量需要裂解所有红细胞,然后进行透光评估。红细胞浓度的人为降低也可能导致包括计算中的红细胞浓度(例如,计算的血细胞比容、平均红细胞血红蛋白浓度)的指数结果的改变。
图3溶血血清
吸光度分光光度法用于测量许多生化分析物(例如胆红素、尿素氮、肌酸激酶、磷、胆固醇)的浓度,并测量穿过含有感兴趣的目标分析物(即酶促反应的产物)的光量。然后将测量的波长与感兴趣物质的已知吸收光谱进行比较。游离血红蛋白吸收光,由于游离血红蛋白的存在会干扰检测,导致检测结果不准确。此外,标记的体外溶血可导致细胞内液中浓度较高的离子和分子的释放;还可能会遇到ALT、AST、磷和钾(取决于物种)的虚假增加。
体外溶血可以通过使用无创伤性静脉穿刺、适当的患者约束和处理、合适的样本收集(例如,大口径针头)和恰当的样本处理(例如,与抗凝剂轻轻混合和及时分析)来预防。当样品分析延迟时,样品的冷藏是必要的,但样品不应直接放在冰上以减少溶血。
03、凝集样本
图4EDTA管中的血凝块。建议在分析前目视观察大块凝块,但木棒涂抹器(如图所示)也是实现此目的的绝佳工具
图5狗血样中的大血小板团块(箭头和插图)
04、样本量不足
由于过量抗凝剂稀释或样本体积不足以满足运行要求的检测,所以收集微量的样本体积或使用过大的试管可能会导致不利的结果。采血管应填充至指定的管体积,这通常由细小的填充线指示(图6)。
图6提交给参考实验室的EDTA试管,其中包含的血液量不足以满足所选试管尺寸的要求。可以看到细微的填充线
与血液相比,EDTA抗凝剂是高渗的;然而,如果EDTA管被适当填充,张力的差异不会导致CBC结果的临床显著变化。当EDTA管未充分填充时,相对于全血的过量EDTA抗凝剂会促使细胞内水渗透运动至相对高渗的血浆/抗凝剂溶液,以试图平衡张力,导致红细胞收缩(creation)和从旋转的血细胞比容错误地减少了压实的细胞体积。当来自EDTA管的血液通过血液分析仪进行CBC时,分析仪将红细胞悬浮在与正常血浆等渗的稀释剂中。在含有过量EDTA的样品中,与收缩的RBC相比,稀释剂是低渗的(不是等渗的);液体冲回细胞并重新获得体积。因此,从短样本计算出的血细胞比容是准确值。
如果预计样本量较低,则应向参考实验室索取所需分析物的最小样本量和推荐的样本处理技术。
05、延迟处理
图7来自提交给实验室进行术前CBC染色的健康狗的血液比较,该血液用相同的染色剂染色,但相隔24小时制备。采集后一小时内制备的单层血膜(A)。可以看到具有正常形态的节段性嗜中性粒细胞,其特征是深色浓缩染色质和明确的细胞核压痕。红细胞呈现正常形态,中央苍白,边缘光滑。冷藏24小时后制备的血涂片显示老化伪影(B)。中性粒细胞核凝聚较少,呈淡粉色,染色质更光滑(几乎透明化);这可能与有毒变化相混淆。红细胞是圆的;有些不再表现出健康犬红细胞典型的中央苍白。
对于生化测试,血液应凝集(15-30分钟)并离心以从血清中分离细胞成分。与细胞成分分离后,应立即分析血清或冷藏长达24至48小时。血清的延迟分离和去除不可避免地导致化学成分的代谢,尤其是葡萄糖的减少。由于酶的活性和动力学,血清酶特别容易因延迟处理(>24小时)而导致错误结果。如果预计会出现延迟,安排调整或与参考实验室讨论所需分析物在冷冻血清中是否稳定会很有帮助。
06、结论
识别这些收集和抽样错误有助于防止出现错误结果,并在这些情况无法避免时帮助解释结果。将样本提交给参考实验室时,临床医生应传达已知的收集和处理错误,以帮助确保临床病理学家的准确解释。尽管本文未包含,但通过留置导管进行的样本采集,如果不按照之前描述的建议进行,可能会导致多个临床上显著的错误,例如HCT和其他液体稀释值错误降低,错误增加值(例如,葡萄糖,钾)继发于给药物质的污染,以及因过度吸入而继发的溶血。