将携带荧光素酶编码基因(Luc)的质粒转染入细胞后,导入研究动物如大、小鼠体内,之后注入荧光素,通过生物发光成像技术(BLI)来检测光强度变化,从而实时监测疾病发展状态或药物的治疗功效等。也可以利用ATP对此反应体系的影响,根据生物发光强度的变化来指示能量或生命体征。
分类
D-Luciferin,SodiumSalt
D-Luciferin,PotassiumSalt?
D-LuciferinFirefly,FreeAcid
分子式
NaC11H7N2O3S2·H2O
C11H7N2O3S2K
C11H8N2O3S2
分子量
320.32g/mol
318.42g/mol
280.33g/mol
外观
淡黄色粉末
类白色至浅黄色粉末
溶解性
易溶于水(100mg/ml)
易溶于水(60mg/ml)
本品难溶于水,除非加入稀碱促进其溶解。
纯度
99.7%
>99%
使用方法
(1)体外实验:
a:储存液配置:将1g的荧光素钠盐或钾盐溶解于33.3ml水中,制备成30mg/ml的储存液。混匀,0.2μm滤膜过滤(可吹入惰性气体,如氮气,以防止氧化。)-80℃避光保存,一年内有效。
(2)活体成像:
a:工作液配置:①溶解1g荧光素钾盐或钠盐于66.6ml无Ca2+和Mg2+的DPBS中,配置成15mg/ml的溶液。②混匀,0.2μm滤膜过滤(可吹入惰性气体,如氮气,以防止氧化。)-80℃避光保存,一年内有效。
b:使用:①在冰上避光解冻(若是在冰上比较难解冻,可短暂温浴,并轻柔混匀)。
②按照动物体重150mg/kg进行注射,(例如,20g重的小鼠需要注射200μl)
③注射入体内10-20min(待光信号达到zui强稳定平台期),再进行成像分析。
注射方法
(1)腹腔注射:
将底物注射入腹腔中。推荐剂量为150mg/Kg(例如,20g重的小鼠需要注射200μl)。使用25G的针头,1ml注射器。
其方法如下示意图:
进针5mm,斜向上30°角。
(2)静脉注射:
小鼠的静脉注射通常是在小鼠的尾部或者眼眶静脉注射。静脉注射的推荐剂量同腹腔注射,150mg/Kg。注射液体的zui大体积不可超过血容量的10%。一般对于20g小鼠其血容量为2ml,故其zui大注射量应为200μl。使用1ml注射器26G针头,或者使用胰岛素注射器28G针头,确保注射器中无气泡。注射前将动物置于加热灯下约5min,或者将尾巴浸泡于温水中以扩张血管。操作时将小鼠固定于鼠筒或者烧杯中,乙醇消毒尾部,缓慢注射。
客户实例
TIPE2抗炎因子在乳腺癌动物模型中的抗肿瘤治疗作用
选自文献:ZhangZ,LiL,CaoS,etal.GenedeliveryofTIPE2inhibitsbreastcancerdevelopmentandmetastasisviaCD8+,TandNKcell-mediatedantitumorresponses[J].MolecularImmunology,2017,85:230.
FAQ
Q1:荧光素的纯度对实验有成影响吗?
A:有影响。99%以上的纯度较好。
Q2:甲虫荧光素和萤火虫荧光素之间有区别吗?
A:二者之间没有区别。
Q3:如何溶解荧光素,其溶液稳定吗?
A:荧光素钾盐在水中的溶解度为60mg/ml,荧光素钠盐溶解度为100mg/ml。荧光素游离酸是不溶于水的,但是在甲醇中的溶解度为10mg/ml,在DMSO中溶解度为50mg/ml。
荧光素钠盐和钾盐的水溶液短期内存放于-80℃,对实验效果没有明显影响。有实验证明,将荧光素溶解于脱氧中的水中会更稳定些。
对于一些较为敏感的试验,为了控制试验中的可变因素,较推荐新鲜配置的反应液。例如,低浓度的荧光素酶或者并非zui适的反应条件是需要高质量的底物才能进行反应。
Q4:荧光素钠盐和荧光素钾盐有什么区别?
A:目前的研究没有发现二者在使用效果上的区别,仅在物理特征上有些小的差别,如荧光素钠盐溶解度会高于荧光素钾盐。但是在体内实验研究中,有更多的研究者倾向于选择荧光素钾盐,据不*统计,选用钾盐的使用人是钠盐使用人的3倍。
Q5:荧光素钠盐,荧光素钾盐,和荧光素游离酸之间有什么区别?
A:游离酸不溶于水,在甲醇中的溶解度为10mg/ml,在DMSO中溶解度为50mg/ml,同样可用NaOH,KOH弱碱去调节溶液的PH值。荧光素的钠盐或者钾盐在使用过程中会更方便,尤其是在体内成像实验中,因其能够溶解在水中,反应毒性也会更小些。
Q6:为什么溶解荧光素钠盐或者钾盐的时候需用不含Ca2+或Mg2+离子的PBS,有无别的盐溶液可用来溶解荧光素?
Q7:荧光素酶的发光特性?
Q8:怎么将荧光素注入小鼠体内,注射方法之间的区别是什么?
Q9:荧光素底物可以透过血脑屏障吗?
A:荧光素底物约280道尔顿,荧光素的水溶性和脂溶性都非常好,很容易穿透细胞膜和血脑屏障。
Q10:荧光素酶的表达稳定性如何?
A:通过稳定筛选等过程,荧光素酶基因是能够插到细胞染色体内的。当细胞进行分裂、转移、分化时,荧光素酶也得到持续稳定的表达,荧光素酶的半衰期约为3h,故只有活细胞才能持续表达荧光素酶。
产品信息
产品名称
产品编码
规格
价格(元)
D-Luciferin,SodiumSaltD荧光素钠盐
40901ES01/02/03/08/10
0.1/0.5/1/5/10g
1008/2556/3996/15876/31212
D-Luciferin,PotassiumSaltD荧光素钾盐
40902ES01/02/03/08
0.1/0.5/1/5g
1000/2600/3996/14898
D-LuciferinFirefly,FreeAcidD萤火虫荧光素,游离酸
40903ES01/02/03
0.1/0.5/1
708/2556/3588
CoelenterazineNative天然腔肠素
40904ES02/03/08
0.5/1/5mg
589/1049/3899
Coelenterazine400a腔肠素400a
40905ES02/03
0.5/1mg
789/1499
Coelenterazineh腔肠素h
40906ES02/03/08
1329/2359/6759
ReadyToUseCoelenterazineh即用型腔肠素h
40907ES10
10vials
6856
Coelenterazinef腔肠素f
40908ES02/03
1329/2359
Coelenterazinecp腔肠素cp
40909ES72
250μg
2359.00
Coelenterazinehcp腔肠素hcp
40910ES72
Coelenterazinen腔肠素n
40911ES72
Coelenterazinee腔肠素e
40912ES02/03
Coelenterazine2-methyl二甲基腔肠素
40913ES50
50μg
929
DualLuciferaseReporterGeneAssayKit双荧光素酶报告基因检测试剂盒
11402ES60/80
100/1000次
536/4236元
LuciferaseReporterGeneAssayKit
萤火虫荧光素酶报告基因检测试剂盒
11401ES60/76/80
100/500/1000次
349/969/1748元
翌圣生物科技(上海)股份有限公司-主营产品:抗体,小分子抑制剂,荧光染料,干细胞培养,血清