可以采用倍比稀释来测定病毒的滴度。
第一个Ep管中加入10uL病毒原液，记为1E+1uL；
第二个Ep管中进行了第一次十倍稀释，所得病毒原液为第一个Ep中的1/10，记为1E+0uL；
第三个Ep管中进行了第二次十倍稀释，所得病毒原液为第二个Ep中的1/10，记为1E-1uL；
依次类推…
第七个Ep管中进行了第六次十倍稀释，所得病毒原液为第六个Ep中的1/10，记为1E-5uL；
第八个Ep管中进行了第七次十倍稀释，所得病毒原液为第七个Ep中的1/10，记为1E-6uL；
换句话说：如果在加入1E-5uL病毒原液的孔中观察到3个带有荧光的细胞，说明该孔中至少有3个病毒颗粒感染了细胞，则该病毒的滴度等于带有荧光的细胞数除以病毒原液量，本例子中就是3/(1E-5)=3E+5，单位为TU/uL，也就等于3E+8TU/mL。
稀释计数法
滴度单位：TU/mL，指每毫升中含有的具有生物活性的病毒颗粒数。「TU」为「transducingunits」的缩写，中文为「转导单位」，表示可以感染并进入到靶细胞中的病毒基因组数。
第一天细胞准备
将生长状态良好的293T细胞消化计数后稀释至1×100000/mL，加入96孔板，100μL/孔，为每个病毒准备10个孔。放入37℃，5%二氧化碳培养箱中培养。
第二天加病毒
在EP管中做10倍梯度稀释，连续10个稀释度。稀释方法如下：每种病毒准备10个1.5mLEP管，每管加入90μL培养液，往第一个管中加入10μL病毒原液，混匀后，吸取10μL加入第二个管混匀。依此类推，做十个稀释度（10—0.00000001）。
吸取96孔板中原有的培养基，加入含稀释好的病毒液。并做好标记。
第三天追加培养液
在每个孔再加入100μL完全培养液，利于细胞的生长。
第四天观察结果并计算滴度
在荧光显微镜下观察结果，并数出最后两个有荧光的荧光细胞克隆数。假设为X和Y，则滴度（TU/mL）=（X+Y×10）×1000/2/X孔的病毒液的含量（μL）。
定量PCR法
病毒感染1天前，取6孔板接种HOS细胞。每孔细胞为5×100000个。
接种细胞24小时后，取两个孔的细胞用血球计数板计数，确定感染时细胞的实际数目，记为N。
弃去其他培养板中的培养基，更换为含有5μg/mLpolybrene的新鲜培养基。将浓缩病毒用培养基稀释200倍，也就是取1μL病毒加入到199μL的培养基中。在3个培养孔中分别加入0.5μL，5μL和50μL的稀释病毒。
感染开始后20小时，除去培养上清，换为500μL含DNaseI的新鲜培养基。在37℃消化15分钟，这一步是要除去残余的质粒DNA。然后换为2mL正常的培养基，继续培养48小时。
用0.5mL0.25%胰酶-EDTA溶液消化细胞，在37℃放置1分钟。用培养基吹洗下，离心收集细胞。按照DNeasy试剂盒的说明抽提基因组DNA。每个样品管中加入200μL洗脱液洗下DNA。用DNA定量试剂盒定量（Bio-Rad）。基因组DNA可以稳定保存在-20℃至少两个月。
准备PCR所需的试剂和样品。为病毒序列检测引物配总管Ⅰ：
Forwardprimer（100pmol/mL）：0.1μL×n
Reverseprimer（100pmol/mL）：0.1μL×n
Probe（100pmol/mL)：0.1μL×n
水：19.7μL×n
n=numberofreactions。例如：总反应数为40，将1mL2×TaqManUniversalPCRMasterMix，
4μLforwardprimer，4μLreverseprimer，4μLprobe和788μL水混和。震荡后放在冰上。
2×TaqManMasterMix：25μL×n
10×RNasePprimer/probemix：2.5μL×n
水：17.5μL×n
n=numberofreactions。例如：总反应数为40，将1mL2×TaqManUniversalPCRMasterMix，100μL10×RNasePprimer/probemix和700μL水混和。震荡后放在冰上。
在预冷的96孔PCR板上完成PCR体系建立。从总管Ⅰ中各取45μL加入到A-D各行的孔中，从总管Ⅱ中各取45μL加入到E-G各行的孔中。
分别取5μL质粒标准品和待测样品基因组DNA加入到A-D行中，每个样品重复1次。另留1个孔加入5μL的水做为无模板对照（no-templatecontrol）。
分别取5μL基因组标准品和待测样品基因组DNA加入到E-G行中，每个样品重复1次。另留1个孔加入5μL的水做为无模板对照（no-templatecontrol）。
所使用定量PCR仪为ABIPRISM7000定量系统。循环条件设定为：50℃2分钟，95℃10分钟，然后是95℃15秒，60℃1分钟的40个循环。
数据分析：测得的DNA样品中整合的慢病毒载体拷贝数用基因组数加以标定，得到每基因组整合的病毒拷贝数。
滴度（integrationunitspermL，IU/mL）的计算公式如下：
IU/mL=(C×N×D×1000)/V
其中：C=平均每基因组整合的病毒拷贝数；N=感染时细胞的数目（约为1×100000）D=病毒载体的稀释倍数；V=加入的稀释病毒的体积数。
96孔板病毒滴定实验方法总结一
看了前面一个关于病毒滴定方法的帖子,自己也做过不少次,所以想写出一点儿,算是个总结,希望能对各位有所帮助.这里我写2种方法,一种是在稀释好的病毒液里加细胞悬液.另一种是在长成单层的细胞上,加入已经稀释好的病毒液.这两种方法我都做过,效果各有长处.
1.一个确定的地方是,所用细胞是贴壁生长,所以在维持液或者生长液中都不能加入胰酶,这一点和流感病毒病毒滴定测定有很大不同;
2.稀释液配方:MEM(或DMEM)+1%双抗+NaHCO3(加入量由所需要pH值确定,一般以加到pH7.0为主,可用pH试纸测定,NaHCO3的浓度为6%).另,MEM,或DMEM的选择由所培养的宿主细胞决定;
3.细胞悬液为细胞+生长液(MEM+10%小牛血清+3%谷氨酰胺+1%双抗+NaHCO3).在加细胞悬液的病毒滴定测定方法中,如果不加入细胞生长液,则细胞无法贴壁;
方法一.在稀释好的病毒液中加入细胞悬液:
1.一个确定的地方是,所用细胞是贴壁生长,所以在维持液或者生长液中都不能加入姨酶,这一天和流感病毒病毒滴定测定有很大不同;
3.细胞悬液为细胞+生长液:
MEM+10%小牛血清+3%谷氨酰胺+1%双抗+NaHCO3
加细胞悬液的病毒滴定测定方法中,如果不加入细胞生长液,则细胞无法贴壁;
4.96孔板上做10倍稀释病毒,从10-1开始,一般做5-6个稀释度,即到10-5或10-6即可,每孔25微升,每个稀释度做4孔,或者8孔,一般做4孔即可;
5.消化细胞,并用生长液反复吹打细胞,使细胞充分混允,放入双碟,用排枪将细胞悬液加入相应孔中,每孔100