打造全球齐全的基因编辑细胞库和基因编辑技术平台2022-05-2016:04
肿瘤个体化治疗以疾病靶点基因诊断信息为基础，以循证医学研究结果为依据，为患者提供接受正确治疗方案的依据，已经成为现代医学发展的趋势。临床研究证实，通过检测肿瘤患者Th物样本中Th物标志物的基因突变、基因SNP分型、基因及其蛋白表达状态来预测药物疗效和评价预后，指导临床个体化治疗，能够提高疗效，减轻不良反应，促进医疗资源的合理利用。
个体化医学检测应用技术包括Sanger测序法、焦磷酸测序法（Pyrosequencing）、新一代测序（NGS）、扩增阻滞突变系统（ARMS）-PCR法、高分辨率熔解曲线（HRM）法、数字PCR（DigitalPCR）、荧光原位杂交（FISH）、免疫组化（IHC）、荧光定量逆转录PCR(Q-RT-PCR)等。
NGS在分子诊断中的应用
（1）产前筛查和产前诊断：靶向区域基因组测序、大范围基因组测序、染色体非整倍性检测
（2）遗传病诊断
（3）肿瘤诊断与治疗
（4）植入前胚胎遗传学诊断
（5）病原微Th物检测
……
什么是分子诊断的标准品
根据《体外诊断试剂注册管理办法》（试行），体外诊断试剂可分为I类、II类、III类，其中II类、III类要求进行性能验证，国内现有的个体户诊断项目绝大多数属于此类。
性能验证的内容包括：精密度或重复性（定性和定量）、准确度（定性为方法学比较或与标准样品盘比较）、线性（定量）、可报告范围（定量）、检出限（定性）、参考区间（定量）、抗干扰能力等。
涉及人基因组的检验项目包含如下质控品：
①阴性质控品：判断假阳性反应
②阳性质控品：判断假阴性反应
③提取内对照：监测提取效率是否符合要求
④扩增内对照：监测扩增效率是否符合要求
什么时候需要使用诊断标准品
·免疫组织化学参考品
·融合基因参考品（DNA层面、RNA层面、蛋白层面）
·基因重排参考品（DNA层面、RNA层面、蛋白层面）
·基因突变参考品（SNV、Indel）
·CNV参考品
·低甲基化水平参考品
·基因组不稳定参考品
NGS标准品构建的思考维度
（1）表征问题：标准品是否具有代表性，如何更具有代表性
（2）稳定性问题：是否满足批次内和批次间稳定性需求
（4）成本问题：成本的可控性
NGS标准品的分类与特点
（3）不同标准品模型之间的比较
NGS标准品的模型构建
(1）随机修饰：VIRUS-FreeTM基因导入系统
优势：流程短，无需病毒包装；插入片段大小不受限制；表型稳定
劣势：需要高效的转导方式
（2）定点修饰：基于CRISPR介导的基因编辑技术；适用于基因的定点缺失Del、定点插入Ins、定点突变SNV、拷贝数变异CNV和基因重排等。
案例：293T细胞EGFR基因V769_D770insASV点突变
定点突变方案：通过CRISPR介导的同源重组技术进行定点突变p.V769_D770insASV(c.2307_2308insGCCAGCGTG)