本发明涉及一种增加骨密度的葛根保健品及其制备方法。
背景技术
骨质疏松是一种全身性骨量及骨组织结构改变，伴有骨脆性增加且容易导致骨折的疾病，其以单位体积内骨量减少、骨的微结构退化、骨密质变薄、骨小梁数目减少、骨髓腔增宽、骨强度减低、易于骨折为特征。全世界大约有2亿人患有骨质疏松症，发病率居世界各种常见病的第六位。我国60岁以上老人80％患有骨质疏松症，约有骨质疏松症患者6000万-8000万，其中以老年妇女发病率最高。
葛根为豆科植物野葛puerarialobata(willd.)ohwi的干燥根，是中国传统的药食两用的植物。葛根的主要化学成分有异黄酮、多糖、皂苷、生物碱等其他化学成分。葛根异黄酮包括：葛根素、大豆苷元、大豆苷、大豆素等。
葛根用来治疗骨质酥松的研究已有将近二十年，大部分是用葛根与其他物质进行配方增加骨密度的研究，一类是用葛根与其他中草药配方，如zl201010173228.2公开将骨碎补、淫羊藿、葛根、黄芪配方，提取有效物质，制成保健品，具有增加骨密度的功能。另一类是与具有增加骨密度的化学物质配方，如zl201110123161.6公开用纳米珍珠粉、胶原蛋肽、葛根提取物三种原料配方，具有增加骨密度的功能。另外的研究主要针对葛根全葛或其化学成分葛根异黄酮、葛根素治疗骨质酥松的研究。研究认为葛根异黄酮、葛根素具有雌激素的效应，有效防止和治疗骨质酥松症。根据研究，葛根多糖具有较强的抗氧化作用，而有研究认为抗氧化剂显著增加去卵巢骨质酥松模型大鼠骨密度。皂苷也是一类具有很有生理活性的物质，有研究证明，三七、牛膝等总皂苷都具有增加骨密度的功能。大量研究证明葛根异黄酮、葛根素具有明确的增加骨密度的作用，而对其它成分(葛根多糖、葛根总皂苷等)增加骨密度的作用研究较少。各成分间的相互协同和增效作用暂时也无研究。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种增加骨密度的葛根保健品及其制备方法，这种葛根保健品各活性成分对增加骨密度可以起到相互协同和增效的作用。
本发明所采取的技术方案是：
一种增加骨密度的葛根保健品，是由葛根总皂苷提取物、葛根总黄酮提取物和葛根多糖提取物按质量比1：(6～8)：(2～4)混合制成的。
这种增加骨密度的葛根保健品的制备方法，包括以下步骤：
1)将采挖的葛根干燥，粉碎，得到葛根粉；
2)将葛根粉与酒精溶液a混合，进行热回流提取，得到提取液a和滤渣a；
3)将提取液a去除酒精，浓缩，干燥，得到含有总皂苷的原料粉a；
4)将滤渣a与酒精溶液b混合，进行热回流提取，得到提取液b和滤渣b；
5)将提取液b去除酒精，浓缩，干燥，得到含有总黄酮的原料粉b；
6)将滤渣b去除酒精，加入水提取，得到提取液c；
7)将提取液c浓缩，收集上清液，用酒精溶液c沉淀，所得的沉淀干燥，得到含有多糖类的原料粉c；
8)将原料粉a、原料粉b和原料粉c按质量比1：(6～8)：(2～4)混合，压片成型，得到葛根保健品。
制备方法的步骤1)中，葛根的采挖期为每年的11月至次年的1月。
制备方法的步骤1)中，干燥的温度为50℃～80℃。
制备方法的步骤1)中，粉碎的粒度为10目～30目。
制备方法的步骤2)中，葛根粉与酒精溶液a的料液质量比为1：(15～25)。
制备方法的步骤2)中，酒精溶液a中的乙醇质量浓度为90％～100％。
制备方法的步骤4)中，滤渣a与酒精溶液b的料液质量比为1：(10～20)。
制备方法的步骤4)中，酒精溶液b中的乙醇质量浓度为30％～50％。
制备方法的步骤6)中，去除酒精后的滤渣b与水的料液质量比为1：(20～40)。
制备方法的步骤7)中，酒精溶液c中的乙醇质量浓度为75％～85％。
本发明的有益效果是：
本发明提供了葛根总皂苷、总黄酮、多糖三类活性物质的提取工艺，并将获得的活性物质制成葛根保健品。通过三类活性物质的相互协同和增效作用，起到显著的增加骨密度作用。
附图说明
图1是本发明制备方法的工艺流程示意图；
图2是本发明各试验组的骨钙含量图；
图3是本发明各试验组的中点骨密度图；
图4是本发明各试验组的远端骨密度图。
具体实施方式
优选的，制备方法的步骤1)中，葛根的采挖期为每年的11月至次年的1月；进一步优选的，葛根的采挖期为每年1月。
优选的，制备方法的步骤1)中，干燥的温度为50℃～80℃。
优选的，制备方法的步骤1)中，粉碎的粒度为10目～30目；进一步优选的，粉碎的粒度为20目。
优选的，制备方法的步骤2)中，葛根粉与酒精溶液a的料液质量比为1：(15～25)。
优选的，制备方法的步骤2)中，酒精溶液a中的乙醇质量浓度为90％～100％；进一步优选的，酒精溶液a中的乙醇质量浓度为95％。
优选的，制备方法的步骤4)中，滤渣a与酒精溶液b的料液质量比为1：(10～20)。
优选的，制备方法的步骤4)中，酒精溶液b中的乙醇质量浓度为30％～50％；进一步优选的，酒精溶液b中的乙醇质量浓度为40％。
优选的，制备方法的步骤3)或步骤5)中，去除酒精的方法为旋转蒸发。
优选的，制备方法的步骤3)或步骤5)中，干燥的方法为冷冻干燥或喷雾干燥。
优选的，制备方法的步骤6)中，去除酒精后的滤渣b与水的料液质量比为1：(20～40)。
优选的，制备方法的步骤6)中，去除酒精的方法为旋转蒸发或自然挥发。
优选的，制备方法的步骤6)中，提取所用的水可选自纯水、蒸馏水或去离子水；进一步优选的，提取所用的水为纯水。
优选的，制备方法的步骤7)中，酒精溶液c中的乙醇质量浓度为75％～85％。
优选的，制备方法的步骤7)中，沉淀干燥的温度为60℃～70℃。
制备方法中所述的酒精溶液均为乙醇的水溶液。
优选的，制备方法的步骤8)中，原料粉a、原料粉b和原料粉c混合的质量比为1：(6～7)：(2～3)；最优选的，原料粉a、原料粉b和原料粉c混合的质量比为1：6.5：2.5。
以下通过具体的实施例对本发明的内容作进一步详细的说明。实施例中所用的原料如无特殊说明，均可从常规商业途径得到。
制备例：
参照附图1的工艺流程示意图，葛根保健品的制备方法为：
a.采挖：在每年的1月采挖葛根；
b.干燥：将采摘的葛根干燥，干燥温度为60℃；
c.粉碎：粉粹粒度20目；
e.将d步骤时产生的提取液旋蒸去除酒精，浓缩后，冷冻或喷雾干燥，得到含有总黄酮的原料粉a；
g.将f步骤时产生的提取液旋蒸去除酒精，浓缩后，冷冻或喷雾干燥，得到含有总皂苷的原料粉b；
i.将h步骤的提取液旋蒸浓缩、离心收集上清液，上清液用终浓度80％酒精沉淀，收集沉淀，收集沉淀，70℃烘干后粉碎，得到含有多糖类的原料粉c。
采用上述工艺生产的原料粉按原料粉a、原料粉b、原料粉c按1:6.5:2.5的比例进行配比，充分混匀后，通过压片机压片，每片约1g。所制得的葛根保健品进行功能评价试验。
评价试验：
以下是对采用本发明工艺及配方生产的保健食品片剂进行了功能评价试验。
1试验目的
观察采用本工艺及配方生产的片剂对去势大鼠骨密度的作用。为本工艺及配方生产的保健食品对去势大鼠增加骨密度的作用提供初步的实验依据。
2受试样品
采用本工艺及配方生产的片剂原料，性状：棕黄色粉末，批号：241201，贮存方法：阴凉干燥，避免阳光直射，密闭保存。
3实验动物
spf级sd种健康雌性大鼠，体重250～300g，由广东省医学实验动物中心提供，动物生产许可证号：scxk(粤)2013-0002，质量合格证编号no.44007200007451。实验动物使用许可证号：syxk(粤)2013-0011。饲养环境：温度20～26℃，湿度变动范围40％～70％。饲料由广东省医学实验动物中心提供。
4主要仪器
骨矿物测定仪(sd-1000)，电感耦合等离子光谱仪(5100icp-oes)。
5方法
按中华人民共和国卫生部颁布的《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版)方法操作。
6剂量设计
实验设6个组：假手术组、溶剂对照组、碳酸钙组和低、中、高三个剂量组，低、中、高剂量分别为0.66、1.32、3.96g/kg.bw，相当于人体推荐量的5、10、30倍，溶剂对照组ca2+为150mg/100g饲料，碳酸钙组剂量为0.39g/kg.bw，与样品高剂量组钙水平相同。
7样品处理
将受试样品掺入饲料中，按体重的8％折算。分别按0.41％、0.82％和2.46％将样品掺入配方饲料中制成低、中、高剂量组受试物饲料；另在配方饲料的基础上，按0.34％掺入与样品高剂量组钙水平相同的碳酸钙，制成碳酸钙组饲料。饲料配方参照ain93饲料配方。
8试验方法
60只雌性大鼠在实验室条件下适应观察三天后，随机分成六个剂量组，分别为假手术组、溶剂对照组、碳酸钙组和低、中、高三个剂量组，每组10只，分笼饲养。将掺入不同剂量受试样品的饲料分别给予各剂量组动物自由摄食；溶剂对照组动物和假手术组动物给予配方饲料；碳酸钙组给予碳酸钙饲料。所有大鼠经腹腔注射戊巴妥钠溶液(20mg/kg.bw)麻醉，进行双侧卵巢切除，术后肌肉注射2万u青霉素。假手术组打开腹腔后仅切除0.5g左右的脂肪，保留双侧卵巢。手术后各组给予配方饲料。自由摄食，饮用去离子水以避免从饮水中获得钙。
9观察指标
9.1一般情况：大鼠一般生理体征、外观、行为、大小便、皮毛等。
9.2生长发育：体重、食物利用率等。
9.3股骨重量：动物喂养3个月后处死，剥离出右侧股骨，于105℃烤箱中烤至恒重，称量骨干重。
9.4骨密度：用单光子骨密度仪测量左侧股骨中点及远心端的骨密度。
9.5骨钙含量：用电感耦合等离子光谱仪测定右侧股骨骨钙含量。
10结果判定
不以补钙为主的产品，溶剂对照组骨钙含量或骨密度显著低于假手术组，表明造成大鼠骨密度低下模型；去卵巢剂量组的骨钙含量或骨密度较溶剂对照组显著增加，且不低于相应剂量的碳酸钙对照组，而其它指标(体重除外)不显著低于溶剂对照组，可判定受试物具有增加骨密度功能作用。
11统计处理
所有数据采用spss13.0软件包进行方差分析，结果以均数±标准差表示
12本工艺及配方生产的片剂对大鼠体重、食物摄入量、利用率的影响
从表1可见：溶剂对照组大鼠体重、总增重、总摄入量、总利用率与假手术组比较，除始重无明显差异外(p＞0.05)，其余均有非常显著性差异(p＜0.01)；各剂量组各项指标与溶剂对照组比较，均无显著性差异(p＞0.05)，表明样品对大鼠体重、摄入量、利用率等无明显影响。
表1本工艺及配方生产的片剂对大鼠体重的影响(n＝10，)
13本工艺及配方生产的片剂对大鼠股骨重量、骨钙含量及骨密度的影响
从表2可见：溶剂对照组与假手术组比较，右侧股骨骨钙含量、左侧股骨远端骨密度显著降低，差异有非常显著性意义(p＜0.01)，表明造成大鼠骨密度低下模型。高剂量组与溶剂对照组比较，右侧股骨骨钙含量、左侧股骨远端骨密度显著增加，差异均有显著性意义(p＜0.05)；且远端骨密度均值大于碳酸钙组。表明该受试样品骨密度试验结果阳性。本发明各试验组的骨钙含量、中点骨密度、远端骨密度图可分别见附图2、3和4。
表2本工艺及配方生产的片剂对股骨重量、骨钙含量及骨密度的影响(n＝10，)
表2中注：1.δδ表示溶剂对照组与假手术组比较p＜0.01；2.**表示剂量组与溶剂对照组比较p＜0.01；*表示p＜0.05。
14结论
本实验结果表明，本发明的保健食品具有增加骨密度保健功能作用。