认证主体：宁夏凯米世纪网络科技有限公司
IP属地：宁夏
统一社会信用代码/组织机构代码
91640100MA774ECW4K
1、挥发性盐基氮检测方法挥发性盐基氮的测定方法（一）半微量定氮法1、原理挥发性盐基氮是指动物性食品由于酶和细菌的作用，在腐败过程中，使蛋白质分解而产生氨以及胺类等碱性含氮物质。此类物质具有挥发性，在碱性溶液中蒸出后，用标准酸滴定计算含量。利用弱碱性试剂氧化镁使试样中碱性含氮物质游离而被蒸馏出来，用硼酸吸收，再用标准酸滴定，计算出含氮量。2、试剂2.1氧化镁混悬液（10g/l）：称取1.0g氧化镁，加100ml水，振摇成混悬液。2.2硼酸吸收液（20g/l）。2.3盐酸c(hcl)=0.01mol/l或硫酸c(1/2h2so4)=0
2、.01mol/l的标准滴定溶液。2.4甲基红乙醇指示剂（2g/l）。2.5次甲基蓝指示剂（1g/l）。3、仪器3.1半微量定氮器3.2微量滴定管：最小分度0.01ml。4、分析步骤样品处理：精确取10g试样（粉碎好的样品）于200ml磨口三角瓶中，加100.0ml(v总)蒸馏水于振荡器上振荡30分钟，4000转离心。蒸馏滴定：将盛有20.0ml吸收液及5-6滴混合指示液的锥形瓶置于冷凝管下端，并使其下端插入吸收液的液面下，准确吸取10.0ml（v分取）上述样品上清液于蒸馏器反应室内，加10ml氧化镁混
3、悬液（10g/l），迅速盖塞，并加水以防漏气，通入蒸汽，进行蒸馏，蒸馏5min即停止，吸收液用盐酸标准滴定溶液（0.01mol/l）或硫酸标准滴定溶液滴定，终点至蓝紫色。同时做试剂空白试验。5、计算式及结果表述：挥发性盐基氮（w）以每100g样品含氮毫克数表示。w样品中挥发性盐基氮的含量，mg/100g;v1测定用样液消耗盐酸或硫酸标准溶液体积，ml;v2试剂空白消耗盐酸或硫酸标准溶液体积,ml;c盐酸或硫酸标准溶液的实际浓度，mol/l;14与1.00ml标准标准滴定溶液c(hcl)=1.000mol/l或硫酸标准滴定溶液c
4、(1/2h2so4)=1.000mol/l相当的氮的质量，mg;m样品质量，g。结果的表述：报告算术平均值的三位有效数。6、允许差相对误差10%。方法（二）微量扩散法1、原理挥发性含氮物质可在37碱性溶液中释出，挥发后吸收于吸收液中，用标准酸滴定，计算含量。2、试剂2.1饱和碳酸钾溶液：称取50k碳酸钾，加50ml水，微加热助溶，使用上清液。2.2水溶性胶：称取10g阿拉伯胶，加10ml水，再加5ml甘油及5g无水碳酸钾（或无水碳酸钠），研匀。2.3硼酸吸收液（20g/l）。2.4盐酸c(h
5、cl)=0.01mol/l或硫酸c(1/2h2so4)=0.01mol/l的标准滴定溶液。2.5甲基红乙醇指示剂（2g/l）。2.6次甲基蓝指示剂（1g/l）。3、仪器扩散皿（标准型）：玻璃质，内外室总直径61mm,内室直径35mm；外室深度10mm，内室深度5mm；外室壁厚3mm，内室壁厚2.5mm，加磨砂厚玻璃盖。微量滴定管：最小分度0.01ml。4、分析步骤将水溶性胶涂于扩散皿的边缘，在皿.内室加入1ml吸收液及1滴混合指示液。在皿外室一侧加入1.00ml按方法（一）中第4条制备的样液，另一侧
6、加入1ml饱和碳酸钾溶液，注意勿使两液接触，立即盖好；密封后将皿于桌面上轻轻转动，使样液与碱液混合，然后于37温箱内放置2小时，揭去盖，用盐酸或硫酸标准滴定溶液(0.100mol/l)滴定，终点呈蓝紫色。同时做试剂空白试验。5、计算式同方法（一）：w样品中挥发性盐基氮的含量，mg/100g;v1测定用样液消耗盐酸或硫酸标准溶液体积，ml;v2试剂空白消耗盐酸或硫酸标准溶液体积,ml;c盐酸或硫酸标准溶液的实际浓度，mol/l;14与1.00ml标准标准滴定溶液c(hcl)=1.000mol/l或硫酸标准滴定溶液c(1/2h2so
7、4)=1.000mol/l相当的氮的质量，mg;m样品质量，g。6、允许差相对误差10%。==几种常见的动物源性饲料中挥发性盐基氮的测定挥发性盐基氮totalvolatilebasicnitrogen物质，简称tvbn。它是指肉蛋白质在微生物的作用下发生分解产生氨、胺类碱性含氮物质，这类物质易和有机酸形成盐，具有挥发性，称这类物质为挥发性盐基氮物质。肉中挥发性盐基氮物质含量的多少可以反应肉品质新鲜程度。tvbn值：100克肉中所含挥发性盐基氮物质的毫克数。该值是肉品新鲜度指标。国家标准规定：一级鲜肉15mg/100g,二级鲜肉15-25mg
8、/100g,腐败肉25mg/100g。挥发性盐基氮作为食品和水产品质量的重要指标，在近几年才被应用作为动物源性饲料产品的一个重要指标，主要反映动物源性饲料的新鲜度。本试验通过参考gb/t5009.44-2021肉与肉制品卫生标准的分析方法，结合动物源性饲料产品的实际情况，建立一种适用于动物源性饲料产品中挥发性盐基氮含量测定的简便方法。11、原理动物源性饲料产品富含蛋白质，由于微生物的作用易发生腐败，使蛋白质分解产生氨及胺类等碱性含氮物质，称为挥发性盐基氮物质。此类物质具有挥发性，用凯氏定氮法在碱性环境中将挥发性盐基氮物质蒸馏出来后，用硼酸接收，再用标准盐酸滴定，计算含量即为tv
9、bn值。22、仪器与试剂2.1仪器实验室用样品粉碎机：刀片式高速粉碎机；分析天平：感量0.0001g；半微量凯氏蒸馏装置：水蒸汽蒸馏式；振荡机；离心机；匀浆机；微量滴定管：最小分度0.01ml。2.2溶液的配制2.2.1c=0.01moll盐酸标准溶液（无水碳酸钠标定）：吸取分析纯盐酸1ml，用蒸馏水定容至1000ml，标定。2.2.22%硼酸溶液：分析纯硼酸2g溶于100ml水配成2%溶液。2.2.3混合指示剂：甲基红0.1%乙醇溶液，溴甲酚绿0.5%乙醇溶液，两溶液等体积混合，阴凉处保存期三个月以内。2.2.41%氧化镁溶液：分
10、析纯氧化镁1.0g溶于100ml蒸馏水振荡成混悬液。2.2.5防泡剂:不含氮、主成分为有机硅的固态或液态试剂。3、测定步骤3.1试样的处理按饲料采样方法制备试样,要求粉碎细度能一次性达95%以上过cq16(相当于40目)筛，粉碎样品充分混合后（筛上、筛下的全部筛分范围样品）装入磨口瓶中备用,在粉碎样品时，磨膛不能发热。称取10g试样(精确到0.0001g)于250ml具塞锥形瓶中，加蒸馏水100ml，振荡摇匀30min。鱼粉和蚕蛹粉等原料采用过滤，滤液为样液；而血浆蛋白粉、血球蛋白粉、鱼溶浆等不易过滤的原料采用离心，在离心机上于1500g(
11、大约3000r/min)离心10min，上液为试样液。3.2蒸馏取20ml2%的硼酸溶液于150ml锥形瓶中，加混合指示剂2滴，使半微量蒸馏装置的冷凝管末端浸入此溶液。蒸馏装置的蒸汽发生器的水中应加甲基红指示剂数滴，硫酸数滴，且保持此溶液为橙红色，否则补加硫酸。准确移取10ml样液注入蒸馏装置的反应室中，用少量蒸馏水冲洗进样入口，再加入10ml1.0%的氧化镁溶液，不起泡的动物源性饲料不加防泡剂，而易起泡的动物源性饲料产品，例如血浆、血球、血粉等必须滴加1g固体（或0.5ml液体）防暴剂，在入口处加水封好，防止漏气，蒸馏4min，使冷凝管末端离开吸收液面，再
12、蒸馏1min，用蒸馏水洗冷凝管末端，洗液均流入吸收液。蒸馏。吸收氨后的吸收液立即用0.01mol/l盐酸标准液滴定，溶液由蓝绿色变为灰红色为终点，同时进行试剂空白测定。结果的计算挥发性盐基氮（tvbn）含量以（mg/100g）表示。=(v1-v2)*c*14/(m*0.1)*100式中::样品挥发性盐基氮的含量mg/100g；v1滴定试样时所需盐酸标准溶液体积，ml；v2滴定空白时所需盐酸标准溶液体积，ml；c盐酸标准溶液浓度，mol/l；m：试样重量，g；14：与1.00ml盐酸标准滴定溶液c(hcl)=1.000mol/l相当的氮的质量，m
13、g。44、结果与讨论4.1不同试样制备方式对检测结果的影响4.1.1不同粉碎粒度试样对测试结果的影响分别取未粉碎的鱼粉试样，粉碎至40目、60目的鱼粉试样，按3的分析测试步骤进行分析，每种处理情况测试5次，测试结果见表1。表1不同粉碎粒度、不同试样处理方式对测定结果的影响项目振荡30min处理高速匀浆机10min处理未粉碎40目60目未粉碎40目60目挥发性盐基氮,mg/100g150.1148.3152.4147.5153.4215.7221.4217.9218.5220.1225.321
14、9.8220.8223.4221.3215.4214.8217.5216.8219.7220.3219.8220.8217.5222.6224.5221.3223.2222.6219.9平均值，mg/100g150.3217.7223.5216.8220.2222.3根据单因子方差分析，在（a0.05）,未粉碎处理的样品与粉碎至40目和60目样品存在显著差异；而粉碎至40目和60目样品处理差异不显著。4.1.2不同试样处理方式对测试结果的影响分别取未粉碎和已粉碎40目、60目鱼粉试样用高速匀浆机匀浆10分钟
15、，按3的分析测试步骤进行分析，测试结果见下表1。根据单因子方差分析，在（a0.05）,三种处理方式差异不显著。4.2本方法的重复性分别取鱼粉、血球蛋白粉、血浆蛋白粉、血粉、膨化血粉等样品，每个样品测定6次，计算其标准偏差及变异系数，结果见表2。表2不同试样挥发性盐基氮（tvbn）含量测定的重复性测定值，mg/100g平均值mg/100g标准偏差变异系数(%)鱼粉215.7,221.4,217.9,218.5,220.1217.72.1751.00血球蛋白粉1#17.5,18.3,16.9,17.7,18.517.780.6423.6
16、1血球蛋白粉2#101.5,103.7,104.8,102.4,105.2103.51.5671.51血浆蛋白粉1#15.2,13.9,14.6,15.6,16.115.080.8585.69血粉554.7,537.1,547.0,558.3,571.3553.6812.7712.31膨化血粉2215.2,2240.5,2198.7,2207.3,2168.92206.1226.0111.184.3本方法的回收率在以上鱼粉、血球蛋白粉中，按一定浓度的（nh4）2so4溶液，按本方法进行测试，每个梯度重复测定五次，结果见表3
18、别取鱼粉、血球蛋白粉、血浆蛋白粉、血粉、膨化血粉等样品，根据各方法的适用范围采用相应的方法测定挥发性盐基氮（tvbn）含量，测定结果见表5。表3方法的回收率（n=5）加入量测得均值平均回收率（%）鱼粉50.0267.399.20100.0315.998.20血球蛋白粉2#50.0153.6100.20100.0203.399.80表4本方法与gb/t5009.44-2021肉与肉制品卫生标准的分析方法适用范围的比较方法适用范围不适用范围本方法鱼粉、肉粉、血粉、血球蛋白粉、血浆蛋白粉、膨化血粉等无gb/t5009.44-2021半微量定