《GB5009.257-2016食品安全国家标准食品中反式脂肪酸的测定》
脂肪酸甲酯和脂肪酸甘油三酯标准品如何选择？
国标《GB5009.168-2016食品安全国家标准食品中脂肪酸的测定》按照定量方法分为三个方法，分别是内标法、外标法和归一化法。内标法需要使用37种脂肪酸甲酯混标作为定性外标，十一碳酸甘油三酯作为定量内标；外标法需要使用相应的脂肪酸甘油三酯作为定量外标；归一化法需要使用37种脂肪酸甲酯混标作为定性外标。
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37种脂肪酸甲酯混标如何使用，
内标法如何配置标准曲线？
从国标GB5009.168-2016的截图，可以看出，内标法需要配置5mg/mL十一碳酸甘油三酯的内标溶液；而混合脂肪酸甲酯标液不需要配置标准曲线，仅用于定性和脂肪酸甲酯响应因子的计算。
如果选购37种脂肪酸甲酯混合标液（不同浓度于异辛烷，总计10mg/mL），建议取1.0mL混合标液稀释至5mL或10mL，得到总计2mg/mL或1mg/mL的37种脂肪酸甲酯混合标准使用液。
脂肪酸甲酯混标的作用主要是用来计算脂肪酸甲酯相对十一碳酸甲酯的响应因子，因此进样单点的标准溶液即可；样品中脂肪酸甲酯的含量计算主要取决于样品中添加的十一碳酸甲酯内标的含量和样品中各脂肪酸甲酯的峰面积及其响应因子。样品中脂肪酸的含量需要由脂肪酸甲酯的含量再乘以转换系数得到。
使用CD-2560进样37种脂肪酸甲酯为什么只出了36个峰？
不同品牌、不同规格的色谱柱，色谱柱污染、柱效下降的色谱柱都可能导致37种脂肪酸的分离有所变化，建议可通过调整流速等参数优化色谱条件，以达到最优分离度。
外标法检测有哪些需要注意？
外标法使用脂肪酸甘油三酯作为标准品，但需要将脂肪酸甘油三酯标准溶液经过酯交换转变为脂肪酸甲酯上机检测，不可直接将脂肪酸甘油三酯直接上机检测，也不可使用脂肪酸甲酯作为外标进行定量计算。
外标法是直接计算样品中脂肪酸的含量，不需要计算脂肪酸甲酯的含量。通过脂肪酸甘油三酯的单点外标法进行计算，计算结果主要与脂肪酸甘油三酯标准溶液的浓度、脂肪酸甲酯的峰面积和脂肪酸甘油三酯转化为脂肪酸的系数有关。脂肪酸甘油三酯标准溶液浓度的选择可根据实际样品中脂肪酸的含量进行优化调整，使其尽量接近样品中含量。
二、《GB5009.257-2016食品安全国家标准食品中反式脂肪酸的测定》
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要检测哪些反式脂肪酸，标准品怎么选择？
标准要求检测食品中C16:1t~C22:1t等16种反式脂肪酸。具体目标物信息可参见标准附录A中的“表A.1脂肪酸甲酯化学信息表”。
针对标准要求的反式脂肪酸，推荐的标准品选择见下表，分别是6种反式单不饱和脂肪酸甲酯、4种十八碳二烯酸甲酯、8种十八碳三烯酸甲酯。
反式脂肪酸标品的使用有些什么注意点？
上述推荐的3种反式脂肪酸标准品中十八碳二烯酸甲酯和十八碳三烯酸甲酯均为同分异构体混合物形式，均无准确浓度，这是反式脂肪酸的性质及其生产工艺导致，但这并不影响结果的计算，因为标准中反式脂肪酸的定量方法是面积归一化法，并不需要确定某一个反式脂肪酸的准确浓度，此标准品更重要的作用是目标物的定性。
4种十八碳二烯酸甲酯混标和8种十八碳三烯酸甲酯混标中的目标物信息见下表，可以看出2个混标中分别含有顺-9,12-十八碳二烯酸甲酯（亚油酸甲酯）和顺-9,12,15-十八碳三烯酸甲酯（亚麻酸甲酯）这两种顺式脂肪酸甲酯。因此推荐的3种混标产品中总共含有18个目标物。
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检测食品中反式脂肪酸
还需要检测其他常见脂肪酸吗？
检测食品中的反式脂肪酸需要同时检测其他顺式脂肪酸，反式脂肪酸的定量计算是使用归一化法，从公式可以看出需要计算样品中所有脂肪酸甲酯目标物的校准峰面积。通常建议可以和《GB5009.168-2016食品安全国家标准食品中脂肪酸的测定》同时检测，因此检测食品中反式脂肪酸还需要采购37种脂肪酸甲酯混标进行检测。
需要注意的是“GB5009.168-2016”和“GB5009.257-2016”两个标准中脂肪酸的归一化法的计算公式是并不一样，在实际检测过程中需要分别参照标准要求的公式进行计算。
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标准品中有一些脂肪酸甲酯的CAS号和标准不一样？
因不饱和脂肪酸甲酯存在顺反异构，以及顺反物质的混合物，因此可能设计多个CAS号，所以需要对标准品的CAS号信息特别注意。特别是“GB5009.257-2016”中的CAS号信息情况，详见下表，而在“GB5009.168-2016”中目标物的CAS号信息均正确无误，各位老师可以结合“GB5009.168-2016”进行目标物CAS号信息的确认。