摘要：充分提升玉米加工副产物的经济价值，以玉米加工副产物为原料，以蛋白酶活、纤维素酶活和总酸为检测指标，筛选功能菌种进行混合发酵玉米副产物，探究混合发酵前后原料的营养物质的变化情况。结果发现：地衣芽孢杆菌BL49（CGMCCNo.15012）中性蛋白酶活可达76.8U/mL，纤维素酶活68.7U/mL，植物乳杆菌LP9（CGMCCNo.15013）总酸可达4.4%；将地衣芽孢杆菌BL49、植物乳杆菌LP9和酿酒酵母SC按照2∶2∶1比例混合发酵，接种量为2%，发酵温度30℃，结果发现发酵后粗蛋白质较发酵前提高13.62%（P＜0.05），中性洗涤纤维含量减少13.42%（P＜0.05），酸性洗涤纤维含量减少25.47%（P＜0.05），乳酸含量增加54.83%（P＜0.05），葡萄糖含量增加59.18%（P＜0.05），玉米副产物的营养价值显著提高。
1．材料
（1）原料
原料组成：玉米渣35%（w/w），玉米皮26%（w/w），玉米粉8%（w/w），蒸馏水30%（w/w）。
（2）培养基
MRS培养基：取64g合成培养基加入1L蒸馏水，121℃高压灭菌15min。
LB培养基：胰蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，氯化钠10g/L，葡萄糖0.5g/L，琼脂15g/L，121℃高压灭菌15min。
YPD培养基：酵母粉10g/L，蛋白胨20g/L，葡萄糖20g/L，琼脂15g/L，121℃灭菌15min。
蛋白酶初筛培养基：脱脂乳粉10g/L，琼脂粉10g/L，116℃高压灭菌15min。
纤维素酶初筛培养基：取羧甲基纤维素钠8g/L，硝酸铵1g/L，酵母膏1g/L，七水合硫酸镁0.5g/L，磷酸二氢钾1g/L，琼脂18g/L，121℃高压灭菌15min。
产酸培养基：MRS培养基基础上加1%（w/v）碳酸钙，121℃高压灭菌15min。
以上试剂均为分析纯，均购自于北京陆桥生物技术有限责任公司。
（3）仪器
DL-CJ-2NDI型超净台，北京东联哈尔仪器制造有限公司；封口机，德清拜杰电器有限公司；IMH100-SSS型培养箱，赛默飞世尔科技公司；高效液相色谱仪，安捷伦科技有限公司。
2．实验方法
（1）样品菌悬液制备
将10g玉米渣样品与90g无菌生理盐水震荡混匀，取上清液1mL加入到9mL无菌生理盐水中，形成10-1稀释液，再取1mL加入到9mL无菌生理盐水中，形成10-2稀释液，依次形成10-3，10-4和10-5稀释液，备用。
（2）产蛋白酶菌株筛选
取2.1制备的10-3，10-4和10-5稀释液涂布于蛋白酶初筛培养基上，培养48h后测量水解圈直径和菌落直径，计算比值（H/C值），挑取水解圈较大的菌株接种于LB培养基中，30℃，150rpm培养24h，取芽孢杆菌菌液，5000rpm离心10min，参照GB/T23527-2009蛋白酶制剂的方法测定中性蛋白酶。
（3）产纤维素酶菌株筛选
将2.1制备的10-3，10-4和10-5稀释液涂布于纤维素酶初筛培养基上，培养48h后测量水解圈直径和菌落直径，计算比值（H/C值），挑取水解圈较大的菌株接种于LB培养基中，30℃，150rpm培养24h，取芽孢杆菌菌液，5000rpm离心10min，参照GB/T23881-2009饲用纤维素酶活性的测定中检测方法。
（4）产乳酸菌株筛选
按照2.1分离方法，将10-3，10-4和10-5稀释液涂布于含碳酸钙MRS培养基上，培养48h后测量水解圈直径和菌落直径，计算比值（H/C值），挑取水解圈较大的菌株用MRS液体培养基扩培，参照GB/T12456-2008方法检测总酸。
（5）发酵条件参数
将原料充分混合，碳酸钙调节pH至6.8±0.2，分装成400g/袋，4℃冷藏备用。为避免不同接种量对发酵饲料的影响，统一发酵种子液的菌浓度OD600nm为5.2，取发酵种子液，5000rpm离心10min，弃上清，取菌泥，加入相应无菌水，将菌浓度调至OD600nm为5.2。
将BL49、LP9和SC按2∶2∶1比例混合，菌悬液分别以2%（w/v）接种至分装好的原料中，充分震荡混匀，排出袋内部分空气，然后用封口机封口，置于30℃静置发酵5-7d。
（6）测定指标及方法
①粗蛋白质含量、中性和酸性洗涤纤维含量测定方法
粗蛋白质含量测定参照GB/T6432-1994中检测方法，中性洗涤纤维含量参照GB/T20806-2006中检测方法，酸性洗涤纤维含量参照GB/T20805-2006中检测方法。
②乳酸含量检测方法
样品制备：称取2g样品，加入48mL蒸馏水，震荡混匀30min，经漏斗过滤得到滤液，滤液经0.45μm滤膜过滤，超声30min，备用。
流动相制备：硫酸0.98g，去离子水定容至2L，0.45μm滤膜抽滤2次，超声30min，备用。
检测条件：柱子型号AminexHPX-87H，流速0.5mL/min，柱温55℃，进样量20μL。
（7）数据统计分析
实验数据采用SPSS19.0软件进行统计，实验数据采用平均值±标准差表示，采用单因子方差分析（one-wayANOVA,LSD）。
3．结果与分析
（1）产蛋白酶菌株筛选
（2）产纤维素酶菌株筛选
（3）产酸乳酸菌筛选
（4）复配菌种发酵饲料指标测定
4．讨论
（1）复配菌种发酵对饲料粗蛋白质的影响
（2）复配菌种发酵对饲料粗纤维的影响
微生物代谢产生的纤维素酶能够降解玉米副产物中的纤维素，形成动物能利用的糖，提高动物消化利用率，因此，粗纤维含量是评价发酵饲料品质的重要指标。刘纪成等人利用绿色木霉、黄孢原毛平革菌、产朊假丝酵母等5种复合菌种发酵花生秸秆，发酵后花生秸秆中粗纤维、中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维分别减少了57.97%、14.66%和21.53%。闫亚婷等利用枯草芽孢杆菌发酵玉米粉，中性洗涤纤维比对照组下降了4.76%，酸性洗涤纤维比对照组下降了41.63%。而本研究中，中性洗涤纤维下降了13.42%，酸性洗涤纤维下降了25.47%，说明微生物在发酵过程中具有降解纤维素的作用，而本研究中，地衣芽孢杆菌BL49的纤维素酶活性为68.7U/mL，在发酵过程中，地衣芽孢杆菌分泌的纤维素酶可以将玉米皮中纤维素降解转化成小分子的葡萄糖，纤维素是植物细胞壁的主要成分之一，细胞壁的破坏使释放出植物细胞中其他营养物质，一方面为酵母菌和乳酸菌生长提供碳源，另一方面，纤维素被分解成葡萄糖更易被动物消化利用，提高饲料消化率，降低料肉比。
（3）复配菌种发酵对饲料乳酸的影响
乳酸菌和酵母在发酵过程中产生乳酸等有机酸能显著降低饲料pH，能有效抑制有害微生物生长，研究表明，酵母菌与乳酸菌之间存在共生作用，酵母菌的代谢产物能促进乳酸菌的生长代谢，从而产生更多乳酸，酸化的饲料能刺激畜禽的食欲，增加饲料的适口性，提高动物采食量，减少抗营养因子。
5．结论
99多功能饲料发酵剂产品简介
我公司酶菌结合固态饲料发酵剂中的佼佼者，本产品采用以高浓度乳酸菌（300亿/g）为主要原料的复合益生菌+复合酶制剂组合而成，在2019年10月再次升级，效果更好更直观，产品畅销国内所有省份及多个国家。
【原料组成】酿酒酵母、乳酸菌、枯草芽孢杆菌、植物乳杆菌、产朊假丝酵母菌、副干酪乳杆菌、丁酸梭菌、曲霉菌、木霉菌、米曲霉、糖化酶等复合酶制剂、载体等。
【产品成分分析保证值】酿酒酵母等合计≥100亿cfu/g，水分＜9.0%，净重：500克/袋。
主要作用是：自我低成本生产益生菌、生产制作生物饲料；发酵处理各种饲料、青绿黄秸秆、糠麸、豆渣、果渣、菌渣、薯渣等糟渣，发酵餐厨剩饭、牧草、中草药、蔬菜下脚料、青贮饲料等，分解粗纤维和发酵速度快，含水量要求比较广泛都可以直接发酵快速成为香甜可口营养丰富的饲料；是降低饲养成本、改善动物肉质、改善养殖场环境的有效措施。
1包本品约相当于本公司的2包活力99生酵剂+2包粗饲料降解剂、或3-5瓶EM菌的发酵力等，制作的出来的益生菌液或发酵饲料饲喂动物后养殖环境形成的益生菌环境，臭味氨气显著降低，对动物特别是肠道健康有好的保健作用降低死亡淘汰率，甚至在很多环节可以替代抗生素的使用。
（南宁微瑞生物科技有限公司是广西助农畜牧科技有限公司的直属下属公司）
【产品特点】
1.本产品采用以高浓度乳酸菌（300亿/g）为主要原料，结合了复合益生菌、口味改良剂、酸化剂和免疫促进剂的诸多优点，能够发酵处理各种饲料、青绿饲料、秸秆、各类糟渣等，是降低饲养成本、改善动物肉品质、改善养殖场环境的更佳方案，使用后养殖环境形成益生菌环境，对动物健康有很好的保健作用。
3.对霉变饲料及饲料原料具有脱霉作用，霉菌在厌氧发酵环境中无法生存，达到脱霉效果；对棉菜粕具有脱毒作用，通过酶制剂对抗营养因子的分解，并在发酵的过程中产生小肽。
4.产品中另外添加了新型口味改良剂，明显改善发酵料的适口性，使得处理后的发酵料增香增甜，动物对发酵料更爱吃（欢迎对比其他饲料发酵剂香甜度就知道我们这个产品超越多少了）。
5.客户鉴别本产品真假和同类产品比较效果的简单方法：500~600毫升的空塑料瓶装入50克大米，倒入200毫升不超过40℃的干净温水，加入本品2-5克，盖上盖子摇动一下后放在温度30℃左右环境中每天几次小心放气，2～3天大米基本溶解成乳状。劣质或假冒产品、EM菌等几乎不能溶解大米（也就是分解粗纤维效果差等），无大气体产生、发酵速度慢和香甜度差等，效果对比一目了然。
【产品使用方法】
一、制作液体菌液（保健菌液与EM菌液）
1.制作益生保健菌液：本品500克、含淀粉类的饲料（玉米、大米、面粉、全价饲料等均可）20公斤、清水100-120公斤（低温季节用温水），另外加入1-2公斤红糖效果更好。混合在陶瓷或塑料容器中密封发酵，每天放气几次，3-7天有甜甜酒香味浓郁时就成为益生保健菌液，家畜按照饲料重量的5-15%、家禽按照2-10%拌入饲料中饲喂，或按照2%比例放入动物饮水中自由饮用，动物会疯狂抢吃。
2.制作EM菌：本品500克，红糖10公斤，干净的清水50公斤，放入塑料桶中密封发酵，3-7天就成为功能相似甚至运用效果更好的EM菌。
二、处理全价或自配饲料成无抗饲料
三、发酵木薯渣、豆渣
四、发酵潲水（泔水）成为家禽饲料
五、发酵青牧草秸秆、红薯藤等青饲料
六、发酵统糠、菌糠、酒糟等粗纤维含量较高的糟渣
七、对轻微霉变的饲料及饲料原料脱霉
八、对棉粕、茶粕、菜粕、棕榈粕的脱毒与生成小肽
九、中草药及中药渣发酵方法
1.中草药发酵：将100公斤中草药粉碎，越细越好放入150公斤的35℃左右的温水中，加入玉米粉10公斤、本品1包、红糖1公斤放入塑料容器内密封发酵72小时以上后使用，要求在15天内使用完成。发酵过程中会产生气体，可以缓慢开盖放气并搅动1次。将上述发酵完成的中草药每吨饲料使用3-10公斤，每吨饮水中使用2-3公斤。
2.中药渣发酵：未明显霉变的新鲜中药渣1立方，“99多功能饲料发酵剂”1包玉米粉150公斤、豆粕50公斤（花生粕、菜粕、茶粕等均可），食盐3公斤，混合含水量调节在65%左右，装入大容器中压实密封发酵（容器容量不低于100公斤），一般一周左右有浓郁的甜酒香味即可使用。
【视频】肉猪养殖饲料中添加部分发酵饲料或发酵中药效果好
十、轻度全量发酵饲料及水料上的运用
本品500-1000克、全价或自配饲料1000公斤、清水600公斤混合发酵6-24小时后饲喂，形成轻度全量发酵预消化模式；或者在水料中发酵24小时内饲喂，两种模式能够达到更好的消化吸收率。
【配料说明和注意事项】
1、在发酵糟渣时一定要将物料压实密封，密封好不开封的情况下发酵料可以保存半年以上不变质。密封效果不好会导致发酵料表面霉变，饲喂时要铲除表面霉变的发酵料。
2、发酵料如果酸度过大，动物适口性差时可以在发酵后添加1-2%小苏打中和发酵料的酸度，改善动物适口性。
3、发酵料开封进行饲喂后，建议7天内使用完，每次取料后要注意继续进行密封保存。
4、发酵料由于营养比较单一，建议在饲喂前添加适当的能量饲料和蛋白饲料、预混料来调节营养配比，使动物达到更佳的饲喂效果和生长速度。
5、动物第一次饲喂发酵料必须遵循先少量饲喂然后逐步加量的原则，一般小动物最大添加量10%-20%，中等动物20%-30%，大动物30%-40%。在实际饲养中行适当的调整。
7、饲喂本产品及发酵饲料不影响正常的动物免疫，动物发生疾病使用大剂量抗生素药物时，继续使用本品和发酵饲料无副作用。
8、对于一些发酵的原料有一定的霉变杂菌多（如超过3天以上的豆渣、酒渣、薯渣等）、发酵缓慢、环境温度低、需要发酵的饲料更快更香醇质量更高等，只需要将本产品提高2-4倍的使用量即可。
【包装规格】500克/包，综合每克≥100亿cfu/g，30包/箱。另还可以根据客户需要提供产品的核心料、灵活定制各种规格的产品或者散装产品，具体请与我们的客服进行联系。（请注意，目前市场上已经假冒产品，本产品市场售价一般在25元左右，低于这个价格可能购买到的是假冒产品）
【贮存】阴凉、干燥保存。
【保质期】12个月（于通风、阴凉、干燥处存放）
联系地址：广西南宁市安吉路35号A栋26号（南宁市饲料兽药禽苗市场内）
假冒仿冒产品成堆，只要做以下试验比较马上识别，实力与效果证明一切
客户鉴别本产品真假和同类产品比较效果的简单方法：500~600毫升的空塑料瓶装入50克大米，倒入200毫升不超过40℃的干净温水，加入本品2克，盖上盖子摇动一下后放在温度30℃左右环境中，2～5小时后开始不断产生大量的气体，每天需要小心地放气3次以上（缓慢地拧开瓶盖），2～3天大米基本溶解成乳状（说明强大的粗纤维分解能力，恒温30℃的情况下一般只需要24-48小时），最后成为浓郁甜酒香味的活性乳酸菌为主的复合益生菌菌液（PH值4.5以下）。劣质或假冒产品、EM菌等几乎不能溶解大米（也就是分解粗纤维效果差等），无大气体产生、发酵速度慢和香甜度差等，效果对比一目了然。
规模养殖场客户使用“99多功能饲料发酵剂”后的效果总结供参考
一、在母猪上的使用效果
二、在生猪上的使用效果1.促进仔猪肠道发育，维护肠道微生态平衡，防治猪群黄白痢，腹泻，增强免疫力和抗病力，降低死亡率，有效率可达90%以上2.改善饲料适口性，让仔猪更适合应饲料，调理僵猪，光吃不长帮助消化吸收，提高饲料转化率，改善圈舍环境，降低氨气，硫化氢等70%左右，减少蚊蝇滋生3.育肥猪提前（10-15）天出栏节省更多饲料，改善猪肉品质，肉质鲜美，风味浓厚，营养丰富，是生产绿色或有机食品的理想产品4.入产出比高，（综合1:3-5）花防病的钱还能创效益,是生产绿色无公害，无药残，安全食品理想选择，早用早受益。
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【视频】采用半放养+99多功能饲料发酵剂进行发酵饲料的订单式年猪土猪肉供不应求养殖效益高
广西助农推广的采用99多功能饲料发酵剂发酵木薯渣，在阉鸡肉鸡饲料中添加20%的发酵木薯渣饲养，毛利润能够提高了25%以上，明显提高了经济效益。
部分发酵饲料养鸡效果好，节约饲料鸡场不臭肉质好
使用发酵饲料后鸡肉品质一流，土味知足。
【视频】采用部分发酵饲料或发酵中药能够养出高品质猪肉来
广西助农畜牧科技有限公司有7个专业现代生态养殖技术实战型团队，为全国养殖场进行非洲猪瘟防控技术、现代循环生态养殖场的规划、设计、建设、整改等服务；养殖场环保问题低成本解决方案（养殖场恶臭、氨气，苍蝇、污水、粪污资源化、病死动物无害化处理）与专业配套产品。帮助政府部门完成现代生态养殖、粪污资源化、病死动物无害化处理、粮改饲、秸秆综合利用、牧草产业等达标工作、培训工作（免费且有专业资料等），针对您当地制定专业方案，做出示范样板后确定效果再进行推广。
2020年已全面禁抗，我们之前经常在饲料中添加的抗生素进行促生长行为将是违法，否则面临巨额罚单。如何既能够促进动物生长又能够形成无抗养殖呢？其实中草药在促进畜禽养殖健康和生长、改善肉蛋奶品质大有可为，特别是将中草药发酵后效果提升4-28倍等好处，这个实施方案比你想象中效果更好，运用的没有不被效果折服的，值得尝试验证
规模养殖场养殖公司我们提供产品样品、验证效果和通过检测后您再放心地规模化运用。