随着非小细胞肺癌（NSCLC）分子生物学研究的不断深入，基于分子标志物的个体化治疗已从实验室走到了临床，并在晚期NSCLC患者靶向治疗上取得了显著进展。作为基因检测工作者，如何实现准确的靶向基因分子检测，为临床医生制定安全、可靠、有效的方案，规范化检测，则成为亟待解决的问题。
2013年4月3日，美国病理医师学会（CAP）/国际肺癌研究学会（IASLC）/美国分子病理医师学会（AMP）发布《肺癌患者EGFR/ALK-酪氨酸激酶抑制剂（TKI）治疗分子检测指南》（以下简称《指南》）；2014年10月13日，美国临床肿瘤学会（ASCO）专家小组将《指南》正式签署，该《指南》针对5大方面问题提出了37条建议，标志着针对EGFR突变及ALK融合基因阳性肺癌全球化检测规范正式形成。我们在此将《指南》进行分析解读，以便与国内同行交流。
EGFR/ALK检测人群及检测时机
对于检测时机以及EGFR/ALK检测能否形成常规（或称“reflextesting”），需要临床与实验室的良好合作和沟通。在我国，很多大型医院已经开始对肺癌可手术切除患者实行常规EGFR及ALK检测，以获得全面治疗的靶点信息。
如何进行EGFR检测
《指南》没有明确指出，最少需要多少肿瘤细胞可继续后续检测，结合其他共识，建议无论哪种类型标本，尽量保证包含至少200个肿瘤细胞（这不是绝对下限），活检和穿刺组织切片10张及以上。需要注意的是，由于小标本检测可能由于有正常细胞混杂，或是由于标本细胞数量少及聚合酶链式反应（PCR）扩增等其他原因产生假阴性，所以是否对小标本取舍或重新取材，分子病理医生应考虑可能出现的所有问题，与临床医生及患者全面沟通，做出正确判断及处理。
检测方法《指南》不推荐具体使用某种方法，但必需都进行严格的验证及质控。在我国，EGFR检测主要有基于实时定量PCR（RT-PCR）基础上的方法[突变扩增阻滞系统（ARMS）]、飞行质谱技术、Sanger直接测序法。检测试剂须使用经国家食品药品监督管理总局（CFDA）批准的检测试剂盒或是经实验室内部严格验证的自配试剂，这些方法及试剂各有优势和劣势，对于哪种方法更具优势，国际或国内学界均未达成共识。
另外，该《指南》不推荐以免疫组化（IHC）检测EGFR总蛋白及EGFR拷贝数[例如荧光原位杂交（FISH）或显色原位杂交（CISH）法]的检测结果作为EGFR-TKI用药的参考。而EGFRT790M作为继发性耐药突变，其检测灵敏度至少应达到5%，以精准检测。不少实验室已经开始使用包括深度测序或数字PCR等高敏感技术，对血液标本进行T790M耐药位点的实时监控。相对罕见的EGFR其他继发性耐药位点及其他机制如MET、人表皮生长因子受体2（HER2）基因扩增等，则没有被常规推荐检测。
对于KRAS基因突变检测，不再被推荐作为EGFR-TKI治疗的唯一决定因素；因为与EGFR突变相斥，KRAS分析在西方可先作为EGFR检测的筛查，但在亚洲人群不建议。
如何进行ALK检测
ALK的检测人群应当与EGFR检测的推荐人群及肿瘤类型一致，在方法选择上，《指南》认为作为伴随诊断出现的双标记ALK分离探针FISH检测是筛选ALK-TKI用药的“金标准”。在CSCO提出的中国ALK检测共识中，提出按照送检标本类型、临床实践中的可操作性和患者可接受性，来选择以上列举的检测方法。但需要注意的是，所有指南在指出不同方法初筛作用的同时，均强调FISH的验证及确定作用。
报告模板
其他基因是否应常规检测
对肺癌患者的分子检测，该《指南》推荐EGFR突变检测为首选，其次为ALK融合基因检测。但在临床实践工作中，在患者有意愿行ALK抑制剂治疗的情况下，建议对EGFR及ALK进行同时检测，减少多次切片对标本的浪费。
但随着对肺腺癌、鳞状细胞癌、小细胞癌甚至大细胞癌的基因突变谱的深入研究，新的分子标志物层出不穷，相应的靶向药物已问世或正在临床研究中，对这些没有进入指南的分子标志物，甚至更广泛的分子标志物检测及相应靶向药物的使用，在一定程度上，可以使部分患者受益，也可以作为科学研究和临床实践的有益补充。
实验室认证及质量控制
总结
2014年接近尾声之际，国内外针对分子标志物的检测指南密集出台，临床实践中分子检测的标准化和检测流程的建立，对于提高临床实践能力及形成个体化医学的诊疗模式起关键作用；建设分子靶点标准化检测平台，包括尽快建立国家检测标准和监察体系，设立国家标准实验室和区域实验室等，是一项意义重大的紧迫任务。