1、生物技术：基因工程、细胞工程、发酵工程、酶
工程
2、生物技术药物：细胞因子、抗体、疫苗、寡核苷
酸药物、基因治疗药物等
3、临床应用：预防、治疗、诊断
肿瘤、心血管疾病、遗传病、神经系统疾病、传
染病、哮喘、伤口愈合等
生物技术药物的特点
1生物技术药物与化学药物性质不同——
化学本质为蛋白质、多肽、核酸等
蛋白质四级结构示意图
2活性由产品的高级结构决定——
质量数不能反映产品的药效学和生物学活性
3影响活性因素：
表达体系——大肠杆菌、酵母、哺乳动物，是否
糖基化
纯化方案——尤其是包含体变性、复性过程
冻干工艺——
生物技术药物质量标准的要求
1保证药物的安全性、有效性和质量可控；
2活性（效力）的测定是保障产品有效性的最重要指标之一，是考察产品全面特征的重要步骤：
重组细胞因子—生物学活性(效价)测定
3在原液和成品检定中，生物学活性测定都是重要指标；
生物学活性测定
——体内和体外均可以进行；
——获得的结果在一定程度上依赖于采用的方法；
——几乎所有的生物活性测定都是比较分析实验，
需要标准品或参考品；
——不一定直接反映产品的临床适应症，但要能够
准确测定产品效价、评价产品稳定性与批间一
致性
生物学活性测定的几种主要方法
1体内测定法----
整体测定，利用动物体内某些指标的变化；
2离体动物器官测定法----
3生化酶促反应测定法----
不依赖于活的生物系统，主要基于产品与某种物质的结合或产品本身的化学反应
4免疫学活性测定法——
利用蛋白对异种动物有相应的免疫原性，制备抗体，然后通过
ELISA测定含量。
5体外细胞培养测定法——
促进细胞生长、抑制细胞生长、间接保护细胞作用
体外细胞培养测定法
1、促进细胞增殖——
a)促进某种细胞的生长，但不依赖：
3T3细胞/EGF、bFGF
b)是某种细胞生长的依赖因子：
TF-1/GM-CSF、NFS-60/G-CSF、CTLL-2/IL-2
2、抑制细胞增殖——L929/TNF
3、间接保护细胞作用——IFN/WISH-VSV
测定方法的选择
1传代细胞（因子依赖细胞>非因子依赖细胞）
>原代细胞>离体器官>体内测定法
2定量方法>半定量方法>定性方法
生物学活性和比活性
●生物学活性——
每ml或每支待测样品中含有的生物学活性单位，
U或IU或AU/ml(支)
●比活性——主要针对原液或原料药
每单位质量(mg)蛋白质中含有的特定生物学活性单位，U/mg或IU/mg或
AU/mg
●比活性(UorIU/mg)=
生物学活性(UorIU/ml)/蛋白质浓度(mg/ml)
生物学活性测定标准范围的确定
不同测定方法的规定标准不同：
1、80-150%——如IFN、GM-CSF、G-CSF等
细胞因子依赖、抑制细胞生长或
直接杀死细胞
2、70-200%——如EGF、bFGF等
剂量-反应曲线不特别陡峭
标准品（参考品）的作用
1、所用试剂或培养基的配制、纯度、灵敏度不同；
3、试验动物的品系和健康状况；
统一尺度、最大限度地消除误差，从而获得一致
的结果；
生物学活性测定需要的条件
（以细胞为基础的活性测定）
1、细胞培养所需要的全部条件
2、活性测定用标准品或参考品
3、酶标仪及软件分析系统
细胞培养的基本概念
1、细胞系和细胞株
2、传代
3、原代培养
取自体内新鲜组织并置于体外条件下生长的细胞在传代之前称为原代培养。
培养细胞的生长方式
1）贴壁生长：3T3，MCF-7，WISH
2）悬浮生长：HL-60，7TD1，TF-1，NFS-60
细胞生长曲线
细胞生长的条件
1、无污染环境
2、细胞生存环境
3、培养基
常用合成培养基
1、MEM(minimumessentialmedium)
2、DMEM（Dulbecco’smodifiedEaglemedium):高糖和低糖之分（1000和4500mg/L的葡萄糖）