导语:如何才能写好一篇肾细胞癌,这就需要搜集整理更多的资料和文献,欢迎阅读由公务员之家整理的十篇范文,供你借鉴。
[关键词]肾细胞癌;组织芯片;免疫组织化学;CD147;E-cadherin
1材料与方法
82例肾细胞癌与26例癌旁正常肾组织标本均选自我院病理科存档蜡块,为1990年1月~2007年12月间收集的肾癌手术切除标本。其中女25例,男57例,男女比例2.28∶1。年龄最大78岁,最小17岁,平均51.2岁。标本按WHO肾癌病理组织学分型:透明细胞癌50例;嫌色细胞癌19例;集合管癌6例,囊性肾细胞癌6例;状肾细胞癌1例。核分级按Thoenes标准:1级核30例,2级核29例,3级核14例,Ⅳ级核9例。肿瘤大小:大于7cm28例;5~7cm24例;小于5cm30例;。临床分期:RobsonⅠ期54例,Ⅱ期20例,Ⅲ期7例,Ⅳ期1例。其中术后随访1年以上76例。
1.2免疫组织化学染色
CD147多克隆抗体、鼠抗人E-cadherin试剂及免疫组化试剂盒为美国santcru公司产品,均购自上海DAKO公司。
1.3结果判定
阳性细胞:胞浆或胞膜出现棕黄色颗粒。CD147阳性颗粒定位于细胞浆和细胞膜;E-cadherin主要定位于细胞膜;结果判定根据:参照Sulzers分级法,阴性(-);阳性细胞数50%以上为(+++)。
1.4统计学处理
采用SPSS11.0统计学分析软件包。计数资料比较用χ2检验。P
2结果
2.1组织芯片
共制备了肾癌组织芯片3个,每个组织芯片含41个位点,剔除切片不全,图象不良者,分别含31、37、38个位点,包含26例癌旁正常肾组织及82例肾癌组织。分别进行HE染色,胶体铁染色及免疫组织化学染色。
2.2免疫组化结果
肾癌中CD147的表达率为70.7%(58/82),主要在癌细胞膜与细胞浆表达,染色较强(图1、2)。癌旁正常肾组织仅7例弱阳性表达,阳性率26.9(7/26),显著高于正常肾组织(P
2.3CD147和E-cadherin阳性表达与肾癌患者的预后分析
82例中由于各种原因失访10例,其中76例随访5年以上,因肿瘤复发、转移而死亡20例,存活56例,总的5年生存率为73.7.6%。死亡组中CD147阳性表达率为85.0%(17/20),生存组中CD147阳性表达率为58.9%(33/56),两组之间的差异有统计学意义(P
表2CD147和E-cadherin阳性表达与患者预后的关系[n(%)]
3讨论
钙黏蛋白E-cadherin是钙离子依赖的细胞黏附分子,在细胞分化、游走、归位、形态发生、免疫等方面有重要作用。有研究证明E-cadherin丢失或功能缺失在促进上皮细胞恶变和获得侵袭力中起关键作用[7]。本实验82例肾癌组织E-cadherin的阳性表达率低于正常肾组织(P
肾细胞癌的发生发展的机制是一个十分复杂的过程,本实验提示可能与肾癌细胞中CD147、E-cadherin基因失调有关,表现为CD147表达升高,E-cadherin表达下调,并且具有反向协同作用,共同参与肾癌的发生发展过程,提示肾癌的恶性度越高,侵袭转移能力越强,生存率越低。CD147的表达越强,相反E-cadherin的表达率越高肿瘤的恶性度越低,生存率越高[11]。提示检测肾癌中的CD147和E-cadherin水平可作为评估预后的重要分子指标,也可能是今后肿瘤治疗的一个靶点。
[参考文献]
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作者:王浦刘勇王世平马炎
【摘要】目的探讨Smac和Livin在肾细胞癌(肾癌)组织中的表达及两者在肾癌细胞凋亡中的作用和关系。方法应用半定量RT-PCR技术检测49例肾癌组织和20例正常肾组织Smac和LivinmRNA表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测Smac和Livin蛋白表达情况。结果SmacmRNA及其蛋白在肾癌组织中的表达显著低于正常肾组织(χ2=5.929、6.538,P
【关键词】癌,肾细胞;Smac;Livin;细胞凋亡
[ABSTRACT]Objective[ToinvestigatetheexpressionsofSmacandLivinandtheirassociationwithapoptosisinrenalcellcarcinoma(RCC).MethodsTheexpressionsofLivinandSmacmRNAweredetectedusingreversetranscription-polymerasechainreaction(RT-PCR)andELISAfortissuesof49RCCand20normalkidneys.ResultsExpressionsofSmacmRNAandproteininRCCtissueweresignificantlylowerthanthatinnormalrenaltissue(χ2=5.929,6.538;P
[KEYWORDS]Carcinoma,renalcell;Smac;Livin;Apoptosis
细胞凋亡是机体维持内环境稳定的重要机制之一,如果细胞凋亡受抑,细胞死亡率下降,将导致细胞数目不断增加,表现出生长优势,这是肿瘤形成的一个重要基础。细胞凋亡是基因表达的结果,受促凋亡基因和抑凋亡基因的调控[1]。许多与凋亡和增殖有关的基因如p53、Fas/FasL、Smac、Bcl-2、IAP等都与肾细胞癌(简称肾癌)的发生发展有关,Smac和Cyt-C是一起由线粒体释放到细胞质的重要的凋亡调节子,Smac存在于哺乳动物细胞中,能直接与凋亡抑制蛋白(IAP)结合,使其丧失抑制Caspase活性的作用,因此Smac在细胞凋亡的途径中有着极其重要的作用[2]。Livin属于IAP家族新成员,是具有抑制细胞凋亡和调节细胞分裂的双功能蛋白。本研究旨在探讨Smac和Livin在肾癌组织和正常肾组织中的表达及两者的关系。
1.1材料
1.1.1标本
2007年10月~2008年3月,收集青岛大学医学院附属医院泌尿外科手术切除的肾癌标本49例,男30例,女19例,年龄29~82岁,平均42.7岁。均经病理学检查证实为肾透明细胞癌,其中高分化12例,中分化26例,低(未)分化11例;Ⅰ期21例,Ⅱ期13例,Ⅲ期10例,Ⅳ期5例。正常肾组织20例,取自肾结石或重度肾积水病人并经病理学证实,其中男12例,女8例,年龄34~67岁,平均52.0岁。所有病人术前均未行放疗、化疗或介入栓塞治疗。术后立即切取标本,用无菌生理盐水冲净血液后迅速置于液氮中,后转移至-70℃冰箱保存备用。
1.1.2主要试剂
RNA提取液Trizol、PrimeScriptRT-PCR试剂盒均购自大连宝生物工程有限公司,ELISA试剂盒购自美国Invitrogen公司。
1.2方法
1.2.1RT-PCR检测Smac和Livin基因mRNA表达
1.2.2ELISA检测Smac和Livin蛋白的表达具体步骤参照试剂盒说明书进行操作。
1.2.3统计学处理方法
2.1RT-PCR检测
Smac和Livin基因mRNA表达见图1。肾癌组织中SmacmRNA的阳性表达率为79.6%(39/49),正常肾组织中均检测到SmacmRNA的表达;LivinmRNA在肾癌组织和正常肾组织阳性表达率分别为85.7%(42/49)和20.0%(4/20)。Smac和LivinmRNA在肾癌和正常肾组织阳性表达率差别均有统计学意义(χ2=5.929、27.600,P
2.2ELISA检测
Smac蛋白在肾癌组织中阳性表达率为75.5%(37/49),正常肾组织中均检测到Smac蛋白表达;Livin蛋白在肾癌组织和正常肾组织中阳性表达率分别为81.6%(40/49)和20.0%(4/20)。Smac和Livin蛋白在肾癌组织和正常肾组织阳性表达率差别均有统计学意义(χ2=6.538、23.351,P
2.3肾癌组织中Smac、LivinmRNA表达与临床病理参数关系
SmacmRNA表达与肾癌组织的分化程度、临床分期和淋巴结转移均有关(χ2=16.318、14.428、14.072,P
2.4肾癌组织中Smac与Livin表达的关系
肾癌是常见的泌尿系肿瘤,约占成人肿瘤的2%~3%。肾癌的发病率以平均每年2.5%的速度增加,早期症状多不明显,20%~30%的病人就诊时已有远处转移,早期病人行肾癌根治术后有20%~40%会发生远处转移。伴有转移的肾癌5年生存率只有0~13%,肾癌对放疗或者化疗均不敏感[4]。一旦肿瘤发生了转移,治疗方法就变得十分有限。因此,对肾癌的早期诊断和探索特异性治疗方法显得尤为重要。
本研究结果显示,Smac在正常肾组织、肾癌组织中阳性表达率差异具有统计学意义(P
综上所述,Smac在肾癌组织中表达明显下降,它的降低通过直接或间接影响Livin的活性从而降低肾癌细胞凋亡,并最终促进肾癌细胞的恶性增殖。MCNEISH等[9]曾构建了Smac基因的腺病毒载体AdCMV-Smac,并用该病毒去转染卵巢癌细胞,结果显示,癌细胞的凋亡也增加。上述结果进一步表明,Smac在肿瘤细胞的表达水平与肿瘤细胞的凋亡有关,因此Smac可作为肿瘤治疗的一个新靶点。
参考文献
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【关键词】肾细胞癌CT影像特点
肾细胞癌(renalcellcarcinoma,RCC)又被称作肾癌,是临床上较为常见的泌尿系统恶性肿瘤,约占成人肾脏恶性肿瘤的85%,又分为状细胞癌、透明细胞癌和嫌色细胞癌等,其中以透明细胞癌最为常见[1]。肾细胞癌的早期症状并不明显,因此常难以引起患者注意,当患者发现腰痛、腹部肿痛和血尿等症状时,肾细胞癌便已可能发展至中晚期,而且手术治疗效果并不理想,预后相对较差[2]。基于肾细胞癌早期常无明显症状的特点,影像学检查则对肾细胞癌的诊断有较大益处,尤其是随着CT技术的发展与普及,肾细胞癌的发现率大大提高。我院立足于多年的CT影像检查经验,对肾细胞癌的CT影像特点加以总结,现汇报如下。
1资料与方法
1.1一般资料:资料选自2012年7月~2013年6月于我院接受手术治疗,后经病理证实为肾细胞癌的29例患者,其中男性患者18例,女性患者11例,年龄为29~68岁,平均年龄为43.7岁,所有患者术前均接受CT检查。患者术前症状包括腰痛、血尿、水肿和乏力等,透明细胞癌患者19例,状癌患者4例,颗粒癌患者1例,集合管癌患者1例,嫌色细胞癌患者3例,多房囊性肾细胞癌患者1例。患者病灶直径范围为1.6cm~7.8cm,平均为4.3cm。
1.2CT检查方法:所有患者均采用螺旋CT扫描仪加以检查,患者检查前需空腹,12h内不得进食,并喝800~1000ml的水。首先进行平扫,随后对患者静脉注射20mL优维显,流速为3ml/s,并于注射后20s开始皮质扫描,45~60s行髓质扫描,60~90s行实质扫描,180~360s行排泄扫描。
2.1CT影像特点:对CT检查结果进行分析,发现透明细胞癌患者,CT平扫呈低密度的14例,而且血流丰富,经增强扫描,则呈不均匀强化。此外,平扫低密度灶内,见更低密度的肾透明癌患者3例,增强扫描发现,更低密度区不强化。平扫低密度灶内,见高密度患者2例,经增强扫描呈高密度区不强化。所有患者皮质强化程度均较实质为高,并有快进快出的特点。
状癌患者CT平扫结果,呈均匀低密度患者3例,且血流丰富,增强扫描呈现均匀强化。呈不均匀低密度患者1例,增强扫描呈持续性强化。
颗粒细胞癌患者1例,平扫呈低密度,增强扫描呈不均匀强化,并有快进快出表现。
集合管癌患者1例,平扫呈均匀稍低密度,并向外膨出,增强扫描则表现为轻度强化。
嫌色细胞癌患者平扫显示为均匀低密度,增强扫描为均匀轻中度持续性强化。
多房囊性肾细胞癌患者1例,平扫囊壁薄厚不均匀,且局部呈结节状,增强扫描后囊壁实性部分强化明显,强化程度较肾皮质为弱。
2.2病理分型结果:透明细胞癌及颗粒细胞癌,肿瘤切面均呈灰黄色或灰红色,显微镜下观察发现,肿瘤细胞体积相对较大,并呈圆形,亦有少数为多边形。胞质较为丰富,而且呈透明或颗粒状,间质则为丰富的毛细血管。状癌呈实体肿块状,镜下观察可见细胞多为立方及矮柱状,并呈状排列,间质可见丰富的嗜酸性胞浆或嗜碱性胞浆。集合管癌,肿瘤体积相对较小,镜下显示肿瘤细胞呈腺管样排列,并有弥漫浸润性生长。嫌色细胞癌,呈实体肿块,显微镜下可见大小不一的细胞,并能明显的观察到细胞膜,胞质淡染或略嗜酸性,细胞核周则有空晕。多囊房性肾细胞癌,切面可见大小不一或互不相通的囊腔,并呈蜂窝状,囊壁灰白或灰黄。镜检发现囊腔内衬为单层透明细胞,并呈多层或微状排列,囊腔内有淡红色液体物质。
针对肾细胞癌的分类,2004年WHO对1997版分类标准进行修订,保留透明细胞癌、状癌、嫌色细胞癌及未分类肾细胞癌等4个分型,将集合管癌分为Bellini集合管癌和髓样癌,并增加多房囊性肾细胞癌、神经母细胞瘤伴发的癌、Xp11易位性肾癌、黏液性管状和梭形细胞癌等分型,颗粒细胞癌则被归为低分化的透明细胞癌,多房囊性肾细胞癌由于VHL基因突变,也常被归为透明细胞癌[3]。
透明细胞癌发生率呈较高,CT平扫多呈不均匀低密度或等密度,而且病灶血供丰富,增强扫描则能发现明显强化,肾皮质的强化程度较肾髓质高。状癌,平扫多呈低密度,且血供较少,并常出现出血和坏死。皮髓质扫描多为轻度强化,实质扫描则可呈中度强化。嫌色细胞癌皮质强化程度明显高于髓质,且呈持续性强化。集合管癌的CT检查血供较少,平扫为低密度,增强扫描为中度强化。本研究发现,掌握不同肾细胞癌分型的CT影像特点,并将其病理分型相结合,将极大地提高对肾细胞癌不同分型诊断的准确率,为临床治疗提供有效依据。
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[关键词]肾细胞癌;计算机体层摄影术;动态增强
[中图分类号]R445.3
[文献标识码]A
肾细胞癌,是肾脏最常见的恶性肿瘤,占肾脏原发恶性肿瘤的75%-85%[1]。CT是目前肾脏病变影像诊断的首先方法之一,对肿瘤大小、范围、病变性质以及有无转移的判断等有重要作用。我们通过分析76例肾细胞癌患者的CT表现,以期探讨CT在肾癌诊断中的应用价值。
1材料方法
1.1一般资料:本组搜集1997年5月~2007年4月共76例肾细胞癌,其中男53例,女23例,年龄20-82岁,平均42岁。左肾35例,右肾41例。透明细胞癌61例,状癌4例,混合型8例,肉瘤样癌3例。肉眼血尿12例,腹部肿块5例,腰痛12例,体检发现47例。
1.2CT检查方法:41例行平扫加三期增强扫描。20例行平扫加实质期增强扫描。15例仅行平扫。造影剂使用优维显。使用高压注射器将优维显90~120ml自肘静脉注入,速率3ml/s,动态增强扫描分别于注射造影剂后25s、75s及220s三期进行图像采集。检查前均服500~1000ml的水充盈胃肠道。
2.1CT表现:
形态上呈圆形或椭圆形70例,形态不规则6例;最大径1.2cm~13.0cm,平均4.1cm;部分突出肾轮廓外61例,位于肾实质内12例,靠近肾窦3例;边界较清楚58例,不清18例;有假包膜41例;密度呈较均匀稍低密度54例,等密度8例,混杂密度6例,其中钙化者3例,较均匀高密度2例,6例呈囊性。
2.2增强特点:61例行增强扫描,其中50例(82%)肿瘤呈重度强化,5例(8%)呈中度强化,6(10%)例呈轻度强化。53例(87%)强化不均匀。41例行动态增强扫描,其中36例(88%)的病灶强化呈“快进快退”表现,即皮质期显著强化,实质期及排泄期强化明显减低。
2.3肿瘤CT及临床分期(TNM分期):
CT分期:I期49例(64%);II期11例(14%);III期10例(13%);IV期6例(8%)。临床分期:I期53例(70%);II期8例(10.5%);III期9例(12%);IV期6例(8%)。本组CT分期准确率为95%(72/76)。病理上:局限于肾内53例(70%);突破肾包膜侵犯肾周筋膜9例(12%),其中1例伴腹膜后淋巴结转移及静脉瘤栓;侵犯腰大肌及肾周筋膜外结构4例(5%),3例伴肾门或后腹膜淋巴结转移,其中2例伴肾静脉下腔静脉瘤栓;肾盂受侵5例(6.5%);1例单纯肾静脉癌栓(1%);远处转移(肺转移)2例(3%)。
肾癌,又称肾细胞癌(renalcellcarcinoma,RCC),是肾最常见的恶性肿瘤,其发现主要依靠影像学方法。随着现代断层影像医学(CT、MRI及超声)的飞速发展和广泛应用,以及人们健康意识的逐渐提高,肾脏肿物已经越来越多的被捡出。这些病变的进一步定性是非常重要的,因为其中部分病变可能是早期肾恶性肿瘤[2]。由于目前肾癌在治疗上仍以手术治疗为主,对放疗、化疗及生物治疗均不敏感,所以早期发现对提高患者的生存率尤其重要。这就要求影像诊断医师对肾癌的诊断必须有个全面的认识。肾癌的主要诊断方法是超声、CT及MRI,肾癌的超声回声复杂多样[3],MRI由于其费用高不普及而限制了两者的应用价值。而螺旋CT价格适中,又具有扫描速度快的优点,其增强扫描可反映肾肿瘤的血液动力学特点,大大提高了诊断准确率。螺旋CT成为目前肾癌诊断的首选方法。
3.1CT平扫特点:肾癌CT平扫时多表现为等或低密度,圆形或椭圆形,较大时多呈不规则形,常使肾的外形扩大或局部隆起。部分肾癌有假包膜,使病灶边界较为清楚,我们这组54%的病例出现假包膜。部分病灶呈浸润性生长,边界不清。癌灶内可囊变,出血、坏死、钙化。
3.2增强扫描特点:肾细胞癌血供丰富,螺旋CT增强扫描能够反映肾癌的血供,对其诊断具有较高价值。郭燕等[4]认为肾癌皮质期强化明显,实质期强化迅速减退,呈“快进快退”表现,这一强化形式有定性意义。我们这组41病例进行了皮质期、实质期及排泄期的三期动态增强研究,病灶强化表现及特点与上述文献相符,88%的病例呈“快进快退”表现,即皮质期肿瘤明显不均匀强化,部分强化程度与正常肾皮质相仿,而实质期与排泄期肿瘤强化程度快速减低,与正常肾实质之间反差明显。对肾癌的CT诊断,应该进行三期动态扫描,皮质期易于显示肿瘤组织的供血程度,实质期能较好显示正常组织与瘤灶的密度对比,有利于确定肿瘤与正常组织分界,排泄期利于显示集合系统受侵情况及静脉血栓等,对肾癌的诊断均有一定意义。
肾嫌色细胞癌(chromophoberenalcellcarcinoma,CRCC)因具有独特的形态特征及较好的预后,1998年世界卫生组织(WHO)新分类将其作为肾细胞癌的一种新类型独立分出,约占肾肿瘤的2%~5%。尽管其有特征性的病理表现,但由于术前对其认识不足而导致误诊率高。笔者回顾性复习了本院2001―2007年期间资料基本完整的9例CRCC病例,对其影像学特点、临床表现及病理结果进行分析,以提高放射科医师对本病的诊断水平。
1.2仪器和方法
1.2.1B超使用彩色多普勒超声检查仪HPImagePoint或ATLHDI5000型,探头频率3-3.5MHz。按常规方法检查肾脏。超声征象记录包括:肿块部位、大小、形态、边缘和回声以及CDPI表现,肿块中心有无出血坏死、钙化,有无静脉内癌栓、肾门淋巴结肿大。
1.2.2CT6例行多层螺旋CT检查(GELightspeed16及GEHightspeed4),除例行平扫和髓质期增强扫描外,其余例均行平扫、皮质期及髓质期动态增强扫描。扫描前常规口服清水500~1000ml,60min后先行CT平扫。后经肘静脉采用高压注射器(MCTplus,Medmd,Pittsburgh,EDU700)注射非离子型对比剂碘帕醇80~100ml(300mgL/ml),注射流率为1.8-3mL/s,延迟35-45s行皮质期扫描,70~90S行髓质期扫描。扫描参数:管电压120kV,管电流220~280mAs,螺距1.5或1,扫描范围自膈顶至髂骨翼水平(包括全肾)。
2.1病理结果本组9例病理诊断均为:肾嫌色细胞癌。其中8例为单发病灶(其中1例伴对侧肾门区巨大囊肿),1例伴同侧肝转移。肿瘤细胞呈多角形或圆形,胞质丰富,淡红染色或嗜酸性,内可见絮状物,部分可见空泡结构,胞膜界限清楚;细胞核小,圆形或多角形,居于中央或偏位,核周空晕,瘤细胞排列呈巢状、片状或腺管状,其间有间质。Hale胶体铁染色例不同程度阳性。免疫组化染色EMA于4例肿瘤细胞上有阳性表达。
2.2影像学表现
2.2.1B超肿物直径平均3.4cm。4例病灶位于右肾实质,3例呈等回声,1例呈低回声,回声欠均匀,均位于肾中部并突出肾包膜。2例病灶位于左肾实质,1例位于肾中部,1例为位于肾中下部。回声均为低回声,其中2例内回声不均匀,近中心部见不规则透声差的无回声。CDFI:3例肿块外周部见少量血流信号,测其频谱为动脉血流,R10.72。1例病灶位于左肾孟肾盏,该病例所见:整个肾盂肾盏内充满低回声,似云雾状,近下极肾盂内见粗大的环样钙化。该患者以无痛肉眼血尿就诊,超声误诊为肾结核。本组6例下腔静脉及肾静脉内均未发现瘤栓,肾门淋巴结未见肿大。
2.2.2CT表现6例CT检查中,7个病灶平扫密度均匀,其中5个表现为等密度,1个表现为稍高密度;另外1个表现为以低密度为主的混杂密度。3个病灶中出现钙化。6例动态增强扫描中,病灶在皮质期均有强化,强化程度均高于髓质,2例明显高于髓质,但均低于皮质,1例稍高于髓质。3个病灶在髓质期的强化程度均明显低于髓质,其中2个病灶内可见较明显的无强化区例皮质期病灶周围可见环形低密度影,髓质期显示不清。另外,在1例体积较大的病灶内见星状低密度影(瘢痕),且纤维瘢痕内见粗大的血管走行。
[关键词]肾透明细胞癌(RCCC);miR-218;侵袭;转移
[Abstract]ObjectiveToinvestigatetheexpressionofmiR-218inrenalclearcellcarcinomaanditsrelationshipwithclinicalpathology.MethodsTherenalclearcellcarcinomatissueof46casesofpatientsdiagnosedwithrenalclearcellcarcinomainourhospitalfromMarch,2012toMay,2013wereselectedand30casesofnormalrenaltissues≥3.0cmadjacenttocarcinomaasthecontrolgroup.RealtimePCRmethodwasusedtodetecttheexpressionofmicroRNA-218inrenalclearcellcarcinomatissueandnormalrenaltissue≥3.0cmadjacenttocarcinoma.TherelationshipbetweentheexpressionofmicroRNA-218andrenalclearcellcarcinomaclinicopathologicalparameterswasanalyzed.ResultsComparedwiththecontroltissues,miR-218expressionintheRCCCtissueswassignificantlylower(P
1.1标本收集
收集河南科技大学第一附属医院的46例肾细胞癌癌组织及30例癌旁≥3.0cm正常肾组织作为对照组。所有组织标本均经病理学诊断确认为肾细胞癌。其中肾细胞癌中,低分化11例,中分化17例,高分化18例,根据TNM分期,临床Ⅰ期21例,临床Ⅱ期13例,临床Ⅲ期8例临床Ⅳ期4例,有淋巴结转移的14例,无淋巴结转移的32例,患者年龄28~80岁,平均年龄53.6岁,其中男性31例,女性15例。
1.2RNA提取和qRT-PCR
选用美国Invotrogen公司的RNA提取试剂盒,抽提组织总RNA。用紫外分光光度计于260和280nm波长处测定RNA提取液的吸光度(D)值,检测RNA纯度和浓度。用Invitrogen公司NCodemiRNAFirst-StrandcDNASynthesis和qRT-PCRKits进行加PolyA尾巴和反转录。操作程序为将消化后RNA10μL、5×反转录缓冲液4μL、25mmol/LMnCl22μL、2mmol/LATP1μL、PolyAPolymerase0.4μL、用DEPC处理后的无酶水补至20μL,放置37℃15min,再取加PolyA后RNA8μL、AnnealingBuffer1μL、UniversalRTPrimer(25uM)3μL,65℃孵育5min,迅速冰浴2~10min,短暂离心,继续向以上反应液中加入2xFirstStrandBuffer10μL、SuperScriptⅢRT/RNaseOutEnzymemix2μL轻轻吸打混匀,50℃孵育50min。反应结束后85℃保温5min。
使用罗氏公司的7500型荧光定量PCR仪,采用2-CT法进行数据的相对定量分析。RealTime反应体系为:2xREALSYBRMixture10uL、10umol/Lmir-218上游引物0.4μL、10umol/Lmir-218下游引物0.4μL、反转录产物2μL,加入灭菌蒸馏水至20μL。扩增程序为:95℃10min,(95℃15sec,60℃60sec)×40个循环。以U6基因表达作为内参。miR-218的相对表达量通过公式2-CT计算,其中ΔCt=miR-218Ct值-U6Ct值。
1.3统计方法
采用SPSS17.0软件进行统计学分析。miR-218在肾细胞癌癌组织与癌旁正常肾组织的表达差异采用独立样本的t检验。miR-218的表达与肾细胞癌临床病理学特征的关联采用非参数MannWhitneyU检验。
与对照组癌旁正常肾组织相比,miR-218在肾透明细胞癌组织的的表达明显降低,差异有统计学意义(P
肿瘤的侵袭和转移仍是肿瘤高死亡率的主要原因。在最新的一些研究报告中,MiR-218可以抑制肿瘤的进展和侵袭,可以明显降低人类恶性肿瘤发生[3]。然而,miR-218在肾癌中的作用尚未进一步的研究。
该研究发现,MiR-218在肾透明细胞癌组织中的表达是减少的,明显低于对照组(P
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[关键词]肾脏;嫌色细胞癌;体层摄影术;X线计算机
肾嫌色细胞癌(chromophoberenalcellcarcinoma,CRCC)是肾癌中相对少见的恶性肿瘤,恶性程度较其他肾细胞癌亚型都低。近年来随着影像学的发展,人群体检数量的增多,很多病例在出现临床症状前被B超检查发现,肿瘤尚处在的早期阶段,对于瘤体较小,预后较好的早期CRCC临床可采用肾脏部分切除术、肿瘤挖除术或射频消融术等相对保守治疗,因此术前准确的诊断尤为重要,本文收集2004年5月~2012年11月经手术病理证实的12例CRCC病例,对其动态增强CT表现进行回顾性分析,并复习文献,进一步探讨动态增强CT对CRCC的诊断价值。
1.1临床资料
12例肾嫌色细胞癌患者,其中男7例,女5例,发现瘤体时年龄35~82岁,平均约52岁。其中5例患者为体检发现肾脏占位而进一步行动态增强CT扫描发现,3例因腰部不适行腹部CT扫描后发现,2例因腰背部疼痛来院就诊发现,2例在其他医院B超发现肾占位来我院进一步治疗,所有病例均有动态增强CT资料,实验室尿液常规检查3例有镜下血尿,其余患者正常。
[关键词]氧化苦参碱;维生素C;胃癌细胞
[Abstract]GastriccancerisacommonmalignanttumorofdigestivetractinChina,whichisaccountedforthethirdoccurrenceofmalignanttumorinChina,andithasgreatlythreatenedpeople'shealth.OxymatrineisextractedfromChineseherbalmedicineSophoraalopecuroidesL.andSophoraeFlavescentisRadix,whichisakindofmatridine-15-ketonecompound,andithassignificantinhibitoryeffectfortumorcells.VitaminCisakindofwater-solublehexosederivativewithvariousbiologicalfunction,anditisanaturalantioxidant,whichhaspreventiveeffectfortheoccurrenceoftumor.ThispapermakesareviewofoxymatrineandvitaminCininhibitingtheproliferationofgastriccarcinomacells.
[Keywords]Oxymatrine;VitaminC;Gastriccarcinomacells
1氧化苦参碱
氧化苦参碱(oxymatrine)是从中草药苦豆子及苦参根中提取的,同苦参碱(matrin)、槐啶碱(sophoridine)、槐胺碱(sophoramine)、槐果碱(sophocarpine)等属于苦参性生物碱,是一类苦参碱-15-酮化合物的一种基本结构。依据《本草纲目》中记录:苦参性寒、味苦,无毒,主治黄疸、溺有余沥等,有补中明目、清热、祛风燥湿、解毒等功效。目前通过基础实验、临床研究表明[5-6],氧化苦参碱具有抗肿瘤、抗哮喘、抗炎镇痛镇静、抗溃疡及免疫调节等作用。氧化苦参碱的抗肿瘤作用主要表现在诱导癌细胞的凋亡与分化、抑制癌细胞的增殖与转移、抑制癌细胞形成新生血管、抑制端粒酶活性、抑制癌细胞耐药性的产生、促进宿主抗癌免疫反应等。
1.1氧化苦参碱抑制胃癌细胞增殖的机制
1.1.2抗癌细胞新生血管的生成血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)是拥有高度特异性的细胞因子,能促使血管内皮细胞分裂,增进血管通透性,促进血管形成[9]。癌细胞的生长与发展和癌细胞新生血管的形成非常密切。对肿瘤血管生成的研究表明:VEGF基因全长为14×103bp,位于染色体6p21.3上,编码VEGFA121等5种转录产物[10]。刘益均等[11]科研组探讨氧化苦参碱能阻滞SGC-7901细胞对肿瘤VEGF的转录和表达,研究说明氧化苦参碱能抑制肿瘤新生血管的生成。氧化苦参碱可下调乳腺癌4T1细胞模型小鼠VEGFR-2和VEGF表达[12],也可降低MDA-MB-231细胞、A549细胞基因VEGF分泌[13-14],提示氧化苦参碱有抗新生血管生成的作用,达到阻滞肿瘤血管生成、抗肿瘤的目的。
1.1.3调控癌细胞周期细胞周期的调控触及许多蛋白和基因的参与,从而形成复杂的分子信号网络系统,而恶性肿瘤和细胞周期紊乱的基本生物学特性是肿瘤细胞失控的增殖[15]。肿瘤的发生与细胞周期失调之间有着非常密切的关系。研究发现氧化苦参碱能杀伤人胃癌细胞,与细胞周期的调控有关,氧化苦参碱可阻止细胞在G0/G1期,减少S期细胞的数量[16]。究其原因可能是通过影响hTERT及上游基因调控的表达(如mad1及p53增强的表达)来抵制癌细胞端粒酶的活性,发挥杀伤肿瘤的作用。李顺等[17]研究在体外将氧化苦参碱作用于膀胱癌株,结果发现,氧化苦参碱能明显抑制T24细胞的增殖,其细胞周期抑制出现在G0/G1期,S期同阴性对照组相比,呈下降,而G1期出现特征性的凋亡峰。综上所述,氧化苦参碱对细胞周期的影响是通过多因素、多基因的调控来实现的。
2维生素C
2.1维生素理化特性
2.2维生素C抗肿瘤的作用
近年来研究发现,维生素C对多数肿瘤细胞具有抑制及杀伤等功效。李能等[27]研究发现,通过体外实验将维生素C作用宫颈癌Hela细胞,可明显抑制细胞周期生长。维生素C应用于25株人肿瘤细胞、18株小鼠肿瘤细胞和5株正常细胞的抗肿瘤活性的研究表明,维生素C对25株人肿瘤细胞敏感性最差,对18株小鼠肿瘤细胞有程度不等的细胞毒作用,但对正常细胞没有杀伤作用[28]。王新保等[29]报道维生素C可抑制各种类型胃癌细胞的生长。对于维生素C抗肿瘤在体内的研究,Padayatty等[30]报道将大剂量维生素C注射给B细胞淋巴瘤、晚期膀胱癌及肾癌患者,结果发现患者肿瘤减退。王晓红等[31]报道,通过给晚期非小细胞肺癌患者口服大剂量维生素C和电磁波联合化疗发现,维生素C可提高疗效且无并发症发生。
3氧化苦参碱联合维生素C作用于胃癌细胞
4小结
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【关键词】肾透明细胞癌;高密度肾囊肿;CT诊断
肾透明细胞癌是在镜下显示主要为透明细胞的病体[1],一部分患者在早期并无明显的临床症状,采用CT检查显示为低密度占位,很难和高密度肾囊肿进行鉴别。本次研究通过回顾分析18例肾透明细胞癌和32例高密度肾囊肿的影像学资料,对鉴别诊断水平进行改进。现分析报告如下:
1.1一般资料对我院18例肾透明细胞癌和32例高密度肾囊肿的影像学资料进行回顾分析。18例肾透明细胞癌患者中,男12例,女6例,年龄18-65岁,平均39.8岁;32例高密度肾囊肿患者中,男21例,女11例,年龄19-63岁,平均40.1岁。
1.2检查方法对50例患者均进行CT检查诊断,对45例患者进行增强CT检查,将100ml的碘佛醇利用高压注射液通过静脉进行注射,进行三期增强扫描,检测厚度、螺距为5mm;采用核磁共振检查(MR检查)21例。
32例高密度肾囊肿有12例通过穿刺证实,有20例通过临床随访证实。采用CT检测呈现出均匀水样密度,有14例囊肿并发感染或钙化,CT检测呈现出不均匀高密度影。影像诊断肾囊肿29例,有3例误诊为肾癌。18例肾透明细胞癌患者均通过手术病理证实,采用CT扫描诊断为低密度灶,有9例边缘清楚,考虑为肾囊肿,13例均采用CT增强扫描,显示均出现密度不均匀性强化,选择静脉期做主要诊断判定为透明细胞癌。高密度肾囊肿MR检查10例,肾透明细胞癌MR检查11例,情况对比如表1所示
高密度肾囊肿是一种较小的肾囊肿基于CT平扫下呈现出来的相对较高或与肾脏相等的囊状病灶,与常见的单纯肾囊肿表现不相同,极易和肾脏小肿瘤混淆[2]。产生高密度的主要原因是由于含血液成分和(或)含高蛋白成分的囊液。高密度肾囊肿在进行CT增强扫描的时候并不会出现密度改变。依据肾囊肿CT增强扫描下形态可划分为Ⅰ-Ⅳ不同的4级[3],Ⅰ级为良性单纯肾囊肿,Ⅳ级为已经确定的囊性恶性肿瘤。Ⅱf级(f=follow,随访的意思)[4]是一种中等的复杂肾囊肿,介于Ⅱ级和Ⅲ级之间,无法明确其良恶性,暂时并不需要及进行手术,需进行定期复诊,对病情进行随访,一旦发现显著的恶性表现需立刻进行治疗。高密度肾囊肿是较少见的一种临床疾病,因伴有囊壁增厚,CT扫描诊断时容易被误诊,而且极容易混淆为边界清晰的实质性肿瘤。高密度肾囊肿在进行CT检查时通常情况下囊中密度会比肾实质要高或相类似,CT值一般为30-90Hu[4]。区别于实质性肿瘤的主要表现为高密度。通常情况下不强化,但实质性肿瘤因为富有血管所以通常可被强化。不过一些肿瘤内部如果出现坏死和出血等现象时,将缺乏血管,同样不会被强化,就会造成临床上的混淆。
肾癌在西医上分为透明细胞型肾癌、颗粒细胞型肾癌、未分化细胞型肾癌和混合细胞型肾癌4类型,通常大多数为肾透明细胞癌,占据了肾癌的70%-80%,一般情况下为条索状、片状、管状或腺泡状癌细胞排列,与肾小管十分相像。早期并无明显的临床症状,或有乏力、发热等症状,而肿瘤体积逐渐增大之后才会被发现。肾区痛、肿块和血尿是主要临床表现。肾透明细胞癌的病灶相对较小,位于肾皮质多见,通常没有侵及肾盂肾盏,临床上无显著的症状表现,采用CT扫描诊断显示为低密度灶,相对较难和肾囊肿进行鉴别。采用增强CT检查及核磁共振检查(MR检查)更有利于肾透明细胞癌和高密度肾囊肿的鉴别诊断。本组研究患者中,18例肾透明细胞癌患者采用CT扫描诊断为低密度灶,有9例边缘清楚,考虑为肾囊肿,用CT增强扫描和MR诊断,并通过手术病理证实为肾透明细胞。
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