目前临床生化绝大部分检测已实现自动化分析,其中多数由自动生化分析仪(automaticbiochemicalanalyzer)完成。自动生化分析仪由电脑控制,将生化分析中的取样(sampling)、加试剂、混匀、保温反应、检测(detect)、结果计算、可靠性判断、显示和打印、以及清洗(Cleaning)等步骤组合在一起自动操作。其电脑不但用来控制自动化分析仪,也用来安排测试(test)要求和打印结果。自动生化分析技术提高了临床生化检验质量和速度,可减轻检验人员的劳动强度,节约样品和试剂,增加检验项目,提高检测精密度,减少实验误差,并且有利于临床检验标准化的实现。自动生化分析仪按其工作方式不同分为连续流动式(continuousstreamingmovementstyle)或管道式、分立式(discretestyle)、离心式(centrifugationstyle)和干片式(dryingstyle),其中以分立式应用最为广泛,而干片式由于具备体积小、试剂以每个测试为单位独立使用,且操作简便等优点,多为急诊检验所采纳,样品数量很少的医院也可选用,连续流动式和离心式现已很少使用。本章主要介绍分立式自动生化分析仪及其应用,对干片式分析仪也将作简单介绍。
第一节分立式自动生化分析仪的结构
分立式自动生化分析仪完全模仿手工操作方式设计,自动生化分析仪的各部分结构对应手工操作的每个步骤包括取样、加试剂、混匀、孵育、检测、结果计算、器材清洗等,分述如下:一、基本结构(一)样品盘或样品架样品盘(specimendisc)是放置待测样品的转盘,可放置一定数量的样品杯(specimencup)或不同规格的采血试管,通过样品盘的转动来控制不同样品的进样。另一种方式是样品架(specimenstock),每个样品架可放数只样品杯或采血试管(多为5只或10只)。样品杯或采血试管均可盛载血清、血浆、尿液等样品。样品架的移动通过样品传送带来进行,以样品架上的条形码(barcode)或底部编码孔识别样品架号及样品位置号。有些仪器有专用于急诊样品、校准品和质控品的可识别架(见图7-1),更多仪器通过固定专用位置来区分这些样品架类型。样品杯或采血试管可贴上包含样品性质和编号的条形码,分析仪通过对样品条形码识别不同的样品。
第二节生化自动化分析方法概要
2.两点终点法在被测物反应或指示反应尚未开始时,选择第一个吸光度,在反应到达终点或平衡时选择第二个吸光度,此两点吸光度之差用于计算结果,称为两点终点法(twopointendessay),其反应曲线见图7-4。计算公式为CU=(待测吸光度A2-待测吸光度A1)×K。该法能有效地消除溶血(hemolysis)、黄疸(icterus)和脂浊(lipo-turbid)等样品本身光吸收(见图7-5)造成的干扰。在单试剂分析加入试剂的初期、或双试剂分析中第二试剂加入之初,若指示反应吸光度尚未明显变化,则可在此时选择第一个吸光度,在指示反应终点时选择第二个吸光度,从而设置成两点终点法。但指示反应初期吸光度无明显变化的化学反应较少,如单试剂方式测定总蛋白、白蛋白、钙、磷、镁等的终点法分析项目,及双试剂方式测定葡萄糖、总胆固醇、甘油三酯等的终点法分析项目,因反应初期吸光度已有明显变化,因而均难以用上述方式设置两点终点法。但在双试剂分析中,如果将第一吸光度选择在第二试剂加入前,此时指示反应一般尚未开始,则能容易设置两点终点法。在此要注意必须将两次读吸光度时不同比色液体积进行校正。目前全自动分析仪均具有此自动校正功能,不必手工进行校正。
第三节分析参数设置
分析仪的一些通用操作步骤如取样、冲洗、吸光度检测、数据处理等,其程序均已经固化在存储器里,用户不能修改。各种测定项目的分析参数(analysisparamete)大部分也已设计好,存于磁盘中,供用户使用;目前大多数生化分析仪为开放式,用户可以更改这些参数。生化分析仪一般另外留一些检测项目的空白通道,由用户自己设定分析参数。因此必须理解各参数的确切意义。
6.方法线性范围监测每种待测物分析都有一个可测定的浓度或活性范围,样品结果若超过此范围,分析仪将显示测定结果超过线性范围的提示,多数分析仪会自动将样品减量或增量重新测定。