1、阳性判断值或参考区间确定的总体要求
体外诊断试剂的阳性判断值或参考区间研究是临床前研究的重要组成部分之一。生产企业应当在主要原材料和生产工艺经过选择和确认、质量管理体系得到有效控制并且保证产品质量稳定的基础上，制订方案并相应的开展研究。试验人员应经过必要的培训，熟悉检测系统的操作程序、样本制备方式和试验方案，严格执行校准和质量控制方法,定期对设备进行维护和保养。建议使用多批产品，采用科学合理的试验方法确定产品的阳性判断值或参考区间。在对结果进行数据检查后，选择适当的统计方法进行检验或分析，并形成报告。样本数量需符合统计学要求。
2、阳性判断值或参考区间确定的方案和采用的样本
2.1阳性判断值或参考区间的特点
阳性判断值或参考区间反映了体外诊断试剂区分受试者目标状态特征（如健康或疾病）的性能,在鉴别良性与恶性疾病、确定疾病进程、监测治疗效果、判定预后情况、指导临床处置或者影响医疗决策制定等方面具有重要意义。阳性判断值或参考区间的正确制定能够充分体现产品的临床表现，如区分正常/异常的能力或诊断准确性。
2.2阳性判断值或参考区间确定的方案和采用的样本
另外，建议充分考虑建立阳性判断值时使用的受试者样本对于目标人群的代表性，在临床试验阶段进一步确认阳性判断值的准确性。对于定量检测试剂，如为具有相同的地理区域以及人口统计学特征（包括种族）的目标人群，在方法学比较研究结果一致的前提下，可考虑转移同类产品的参考区间。
3、阳性判断值或参考区间确定推荐的研究方法
3.1定性检测试剂
3.2定量检测试剂
可根据数据的分布形式，采用非参数统计法或者参数统计法。方法可使用至少120个来自目标人群的受试者样本，采用非参数统计方法建立参考区间（如适用，包括90%或95%置信区间）。建议基于严格的人群人选标准，排除检测项目潜在异常的人群，入选健康正常人样本建立参考区间。可使用调查问卷评估各受试者的健康状况。在实验室、分析系统（方法和仪器）、地理区域或人群存在一个变量的情况下，可考虑转移分析物的参考区间。转移参考区间的方法可使用至少20个受试者样本进行评价，并在多于2个样本超出参考区间范围的情况下纳入更多的样本进行验证。如无法转移，建议建立参考区间。
4、不同方法学产品的举例说明
4.1采用酶联免疫分析技术的检测试剂
(1)确定临界值中的n数值以及阴性样品A值的标准差（临界值=阴性样品平均A值+nx标准偏差）；
（2)使用临床样本验证临界值，包括阴性样本和阳性样本。推荐采用ROC曲线法,纳入一定数量的弱阳性样本进行验证。
4.2基于实时荧光PCR等方法的沙眼衣原体和/或淋病奈瑟菌核酸检测试剂
4.3基于免疫化学发光等方法的人细小病毒B19IgM/IgG抗体检测试剂
4.4基于荧光原位杂交法的HER2基因扩增检测试剂
可参考最新版临床指南性文件建立阳性判断值，并采用具有统计学意义数量的样本对判读规则以及预设阳性判断值进行确认。应包含HER2扩增、HKR2无扩增以及一定数量阳性判断值附近的组织样本，包括HER2/CEP17荧光信号总数比值在2附近（1.82.2),或者每个细胞的平均HER2拷贝数在46附近的样本。首先设定检测结果重复性较好的目标，即HER2平均拷贝数或者HER2平均拷贝数/CEP17平均拷贝数的标准差/变异系数范围验收标准，确定初始统计细胞区域和数量，并在结果不确定时纳入更多区域或数量进行统计。然后建议参照组织病理学特征或者1HC结果确定可能存在扩增的浸润性乳腺癌/胃癌区域，选择细胞核大小一致、胞核边界完整、DAP染色均一、细胞核无重叠、荧光信号清晰的细胞，随机计数2个区域中的至少20个细胞，并对结果进行统计分析。
4.5基于免疫组织化学法的雌激素受体、孕激素受体抗体试剂
在大样本量以及数据符合正态分布的情况下，可采用Z-值（Z-sc〇re)算法确定孕妇外周血血浆中胎儿游离t)NA的数量，其中Z-值反应的是当前数值距离平均数的相对标准距离，Z-值的应用条件为大样本量以及数据符合正态分布。