携带污染（carry-over或carryover）是指由测量系统将一个检测样品反应携带到另一个检测样品反应的分析物不连续量，由此错误地影响了另一个检测样品的表现量。某一生化检测从加样开始至反应结束、清洗完成的任意过程中残留的任一物质（可以为生物样本，也可以为试剂或混合反应液）通过仪器硬件（包括但不限于试剂针、样品针、反应杯、搅拌杆、管路等）被携带到下一个生化检测反应中，参与反应和/或影响反应进程，并导致检测结果显著偏差的过程。生化分析仪的携带污染不可能完全避免，只有当这些反应残留物对下一个反应结果的影响非常显著，超过实验室预设的分析质量标准或影响患者临床结局时，才被定义为携带污染，需要采取必要的措施。当这样的携带污染发生在两个特定的检测项目（试剂）之间时，也被称交叉污染（crosscontamination）。
二
1.试剂成分间的直接影响：前一个测定试剂中直接含有后一个测试试剂所要测定的项目,例如：AMY的试剂1（R1）试剂中含有Ca离子（酶活化剂），当某样品检测AMY和Ca项目时，顺序是先AMY，后测Ca。因吸取过AMY的R1试剂针上可能沾有残留的R1试剂，当R1试剂针再吸取Ca试剂时，会引入AMY的R1试剂中含有的Ca离子，这样对Ca项目的检测结果可能造成正误差。常见试剂成分间的直接影响有：（1）GLU（氧化酶法）、TP与ACP试剂中含有较高浓度的钾（K+）；（2）ChE、CHOL、GLU（GOD法）、UA（尿酸酶法）、LD（IFCC法）、HBDH（DGKC法）等试剂中含有磷酸盐缓冲液；（3）CHOL、TG试剂及HDL-C试剂中含有胆酸钠；（4）ALT（IFCC法）、（AST）（IFCC法）试剂中含有高活性的LD。以上试剂的成分分别会对K+（紫外酶法）、磷（P）、总胆汁酸（TBA）及LD的测定结果形成干扰，造成交叉污染。
2.试剂成分间的间接影响：试剂成分参与反应，上一个试剂中含有的某种试剂成分与下一反应所要测定的底物相互作用，因而干扰下一反应的测定结果。例如：Mg2+测定试剂的络合剂也能与铁（Fe）结合，影响铁与铁络合剂的结合；直接胆红素（D-Bil）重氮法试剂与Mg2+试剂中含有EDTA，均能与Ca结合，从而影响Ca的测定；以甘油作为酶保护剂的试剂，会对TG的测定带来干扰；钙（MTB法）试剂对K+有负干扰；CHOL试剂中含有胆固醇酯酶，可水解胆固醇酯形成游离胆固醇，对游离胆固醇测定造成干扰。
3.反应产物的影响：上一个试剂所引导的反应对下一个项目的反应进程带来间接的干扰，下一项目所测定的是前后两个项目反应的综合作用结果。当上一反应产物为H2O2时，则对以Trinder反应产生颜色的测定结果造成干扰，如UA对CHOL结果的影响，CHOL对CREA（酶法）测定结果的影响，GLU（氧化酶法）对CREA测定结果的影响。CK（NAC法）、CK-MB（NAC法）试剂中含有GLU成分，其分析方法的原理中包含GLU的己糖激酶（HK）反应过程，因此可能对GLU的测定带来干扰，尤其对GLU的HK法测定可能带来严重干扰。
4.影响反应条件：上一试剂缓冲液成分改变了下一反应的pH环境，从而改变反应速率。例如：TP（双缩脲法）测定需在pH8～9时，蛋白肽键才都能与碱性铜溶液作用生成紫色反应，若pH＜8，则会导致TP结果偏低，还直接影响球蛋白、白蛋白/球蛋白结果；酶活性测定有最适pH，大多数酶反应pH在6.0～7.5之间，ALP、GGT、LDH则在碱性条件下最适宜；CREA（苦味酸速率法）反应条件为碱性，果糖胺（动力学法）反应条件为酸性，受到污染后反应速率会减慢。CREA（酶法）试剂中含有抗坏血酸氧化酶，影响了氧化还原反应的进程，会对TBA（酶循环法）测定结果有影响；D-Bil（钒酸盐氧化法）试剂中的酒石酸盐缓冲液会影响ALT活性，对测定结果有负干扰。
三
携带污染的途径
1.试剂针污染：一般高速全自动生化分析仪都采用双试剂针，即所有项目的第一试剂都共用试剂针R1，所有项目的第二试剂都共用试剂针R2。试剂针R1或R2在每吸取一次试剂后都会进行一次清洗，之后会立即吸取下一个项目的试剂。如果仪器清洗能力下降或没有定期进行维护，试剂针在吸取试剂时会将部分残留的前一项目试剂成分带入到后一项目反应杯中，对后一项目检测结果造成影响。从各个项目设置的参数可知，试剂体积量远大于样本体积量，因此试剂针携带污染影响程度会高于样本针携带污染。
2.搅拌棒污染：试剂与样本、第一试剂与第二试剂的混匀需要搅拌棒，而搅拌棒如果清洗不完全或黏附力增加时，残留试剂可能会对下一检测结果造成影响。
3.比色杯污染：生化分析仪的比色杯大体分为两种，一种是循环使用的（如石英比色杯等），另一种是需要定期更换的（如塑料比色杯等），每个比色杯检测完毕后，进行自动清洗，然后继续下一个检测项目的检测。当由于各种原因导致某个比色杯清洗不完全或该比色杯老化时，吸附在比色杯上的上一个项目的残留试剂或者反应物可能会对在这个比色杯中进行的下一个项目的检测结果造成影响。根据经验，比色杯的污染对结果影响最大，因为比色杯最难以清洗干净，且在实际工作中难以判断在该比色杯中检测的前后测试项目。
4.样本针污染：目前大多数全自动生化分析仪采用注射器或定量泵产生负压，通过样本针吸取样本，吸样后通过一定压力的清洗水清洁样本针。当样本针在清洗不完全或黏附力增加时，样本残留可能会对下一相邻样本的检测结果造成影响。
5.清洗系统：目前大多数全自动生化分析仪采用多阶清洗剂和清洗水清洁比色杯，当清洗针或干燥针上有试剂、样本或反应物残留，可能会对下一个被清洗比色杯的测定结果造成影响，一般来说清洗系统带来的携带污染很少，可以忽略。
四
配套检测系统解决携带污染之道
1.从机理上尽可能去除污染之源：TC试剂配方中一般含有一种物料（具有提高试剂稳定性和抗脂血干扰的作用）是TBA的检测底物；而TBA是循环酶法试剂，可将底物信号循环放大（图1），因此只要有微量的底物残留，就会对结果产生很大影响，并且从反应曲线上无法看出是否存在污染。深圳迈瑞公司的TC项目试剂盒，通过优化配方，从根本上解决了交叉污染问题。
图1TBA检测原理示意图
2.提高仪器清洗能力阻断污染之路：从仪器系统设计到关键器部件设计再到清洗时序设计，步步精细化控制交叉污染，如图2。不同清洗水温度对试剂针携带污染的影响不同，随着清洗水温度增高，携带污染物残留体积会降低，且对新旧试剂针的影响程度不同。
图2生化分析系统清洗流程
图3清洗水温度对新旧试剂针携带污染的影响
3.完整的项目全遍历交叉污染评估：在构建封闭检测系统时，要对所有开展的项目进行全遍历交叉污染筛查，在理论分析的指导下，使用添加法做覆盖性筛选，再全遍历实测，一般取偏差<5%，或<1.6SD作为指标，也可以参考临床指标。这是一项系统性的工作，通常在新检测系统构建、增加新试剂、仪器试剂变更等情况下进行。
交叉污染评估中SD的含义与指标定义：评价项目间的交叉污染时，评估被污染项目的浓度一般取该项目的医学决定水平点浓度中的最低浓度点左右的值作为测试浓度（譬如：ALT医学决定水平点为20U/L、60U/L、300U/L，那么评估交叉污染选取样本浓度为20U/L左右），污染源项目则取该项目的线性上限浓度值。评估项目交叉污染时的SD选取被污染项目基准浓度的批内精密度SD（譬如，ALT为被污染项目，那么20U/L左右的浓度值测量10次或20次，计算SD），指标取1.6SD。因Westgard质控规则一般取2SD作为评判结果是否失控的警告限或离群标准，选取2SD的80%作为评估标准，即当被污染结果小于1.6SD，认为结果与正确值无显著偏差；我们取偏差小于5%或小于1.6SD，这个指标是比较严格的，一般评估交叉污染的文献上取10%作为可接受指标[1]。
生化分析系统中其他试剂对镁离子检测的携带污染较难控制。各品牌生化仪为降低携带污染对镁离子测定的影响，设计了多种控制方法。例如：罗氏COBASc701设有12组镁离子试剂针污染对，贝克曼同时设有试剂针和搅拌杆的镁离子污染对,迈瑞BS-2000M机型通过提升仪器清洗试剂针、搅拌杆和反应杯的能力，将试剂针、搅拌杆和反应杯对镁离子的总系统污染率控制在0.04mmol/L以下，见图4。
图4BS2000生化分析系统镁被污染的评估
4.仪器防交叉污染功能设计与测试流程优化：仪器强大的防交叉污染功能可以有效避免项目间交叉污染的发生。在同一样本内，测试项目根据项目间污染的情况优化测试顺序；在不同样本间，则可通过设置强化清洗，并且根据项目污染的特性，智能选择酸、碱或去离子水作为清洗剂。罗氏交叉污染对设置以及清洗剂选择情况见表1，迈瑞BS-2000M交叉污染对设置以及清洗剂选择情况见表2。
五
自建检测系统携带污分析策略
2.自建检测系统携带污分析策略：根据生化分析仪携带污染的分析评估及处理方法专家共识[2]试剂携带污染分析思路如下：收集现有的项目交叉污染的资料，包括但不限于制造商手册、制造商通告、文献等，寻找被污染项目可能受哪些项目的试剂污染；研究被污染项目所在的检测单元的试剂分布、检测程序，是否存在已知的“配对”交叉污染；分析被污染项目使用相同试剂针、搅拌杆、冲洗头、比色杯等仪器原件，紧邻的前一个项目是何项目，分析是否存在污染的可能；如已有的资料信息和结果信息无法提示到底被哪一个项目的试剂污染，则可以设计试验评估与被污染项目处于相同检测单元中的所有其他项目试剂是否发生携带污染。
3.自建检测系统交叉污染评价方案：以雅培公司AbbottArchitectc8000临床生化分析仪对32个生化项目的交叉污染评估为例[3]，实验方案设计见表3。实验室结果显示以下项目配对之间不存在交叉污染：糖-铁,铁-糖；血红蛋白-ALT,ALT-血红蛋白；胆碱酯酶-Urea，Urea-胆碱酯酶；C4-肌酐，肌酐-C4；锂-胆固醇，胆固醇-锂；铁-血红蛋白，血红蛋白-铁。以下项目配对之间存在交叉污染（携带污染率%）：铁蛋白-碱性磷酸酶（-10.7%），铁蛋白-CK（-10.5%）,铁蛋白-铁（-10.7%），CRP-IgM（-15.8%），胆碱脂酶-总胆红素（＋15.4%），乳酸-铁蛋白（-22.9%），尿素-铁（-10.8%），HDL-二氧化碳（-7.2%），IgA-二氧化碳（-35.4%）。实验室通过设置额外的水、酸或者碱清洗后，试剂间的交叉污染满足要求。
六
交叉污染案例分析
某患者曾出现左脚大脚趾关节红肿及剧烈疼痛，怀疑是痛风的表现，随即到医院检查。与导医沟通后，得知自己的症状可能是痛风也可能是风湿免疫系统疾病。在肾内科就诊后，心存疑虑的患者又就诊于风湿免疫科，医院当时未开通一卡通，因此患者就拿着两个科室主诊医生开具的两份检测申请又分别在两个不同的采血窗口进行了采血登记，于是同一病人同时就有了两份检测结果，样本1尿酸（UA）647μmol/L，样本2UA299μmol/L，两份样本结果差距巨大，于是实验室对两个不同的测试结果进行验证。（1）重测两份样本，样本1重测结果644μmol/L，样本2重测结果升高至660μmol/L；（2）样本2（UA299μmol/L）在科室另外一台仪器上重测，结果652μmol/L；（3）重测部分其他病人UA样本，重测结果与第一次测试结果没有明显偏差。实验室判断样本2第一次测试结果不正确。实验室查看两个样本的反应曲线，发现样本2反应监测点13点后出现了一个明显的负向反应，样本1没有，显然这个反应受到了干扰。检查试剂、质控结果均正常，其他样本测试结果正常，因此怀疑在检测过程中发生了携带污染。
引起携带污染的原因可能为搅拌棒、试剂针、比色杯以及样本针等残留前一个项目的物质，对下一个测试项目造成了干扰。首先怀疑试剂针的携带污染，查阅仪器检测记录，可见受干扰的UA测试前进行了LDL-C及CHE测试。实验室的生化分析仪有两个测试单元，LDL-C测试被安排在2号测试单元，而UA和CHE同在1号测试单元，可见测试单元1发生了CHE对UA的交叉污染。实验室进一步做了交叉污染确认试验验证，随机选择了两个测试样本，每个样本分成4管，两个样本的测试设置均为先进行一个CHE测试，再按管1~4进行四个尿酸测试，结果见表4。验证结果显示CHE对尿酸检测存在明显的负干扰。实验室将UA和CHE两个项目分开放置，一个放置于内圈，一个放置于外圈，使用不同的试剂针加样，有效避免了两个项目之间的交叉污染。