犬瘟热病毒（CDV）荧光PCR核酸检测试剂盒说明书
【产品名称】
商品名称：犬瘟热病毒（CDV）核酸检测试剂盒(RT-PCR荧光探针法)
Name：DiagnosticKitforCanineDistemperVirusRNA(RT-PCRFluorescenceProbing)
【包装规格】48份/盒
【预期用途】
本试剂盒适用于检测的犬肝、脾、肺等组织、泪液、鼻液、唾液、粪便。等标
本中犬瘟热病毒RNA，适用于犬瘟热病毒感染的辅助诊断。其检测结果仅供参考。
【检验原理】
本试剂盒用一对犬瘟热病毒特异性引物，结合一条特异性荧光探针，用一步法
荧光RT-PCR技术对犬瘟热病毒RNA进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染
者的病原学诊断。
【试剂组成】
名称规格
酶液50μl×1管
CDV反应液1.0ml×1管
CDV阳性质控品50μl×1管
阴性质控品250μl×1管
说明：不同批号的试剂盒组分不可交互使用。
【储存条件及有效期】
-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融少于5次，
有效期12个月。
【适用仪器】
ABI7300、7500、ABIstepone/steponeplus、安捷伦MX3000P/3005P、MJ
Opticon2等其他荧光定量PCR检测仪。
【标本采集】
病死犬可采集肝、脾、肺、等组织；活犬可采集泪液、鼻液、唾液、粪便。
【保存和运输】
上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过6个月，标
本运送应采用2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。
【使用方法】
1.样品处理（样本处理区）
1.1样本前处理
每份组织分别从3个不同的位置称取样品约1g，手术剪剪碎混匀后取0.05g于
研磨器中研磨，加入1.5mL生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至1.5mL灭菌离心管
中，8000rpm离心2min，取上清液100uL于1.5mL灭菌离心管中。
1.2RNA提取
推荐采用上海晅科生物科技有限公司生产的RNA提取试剂盒（离心柱提取
法），请按照试剂盒说明书进行操作。
2.试剂配制（试剂准备区）
根据待检测样本总数，设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性
对照+1管阳性对照；样品每满7份，多配制1份)，每测试反应体系配制如下表：
试剂CDV反应液酶液
用量20μl1μl
3.加样（样本处理区）
将步骤1提取的RNA、阳性质控品、阴性质控品各取4μl，分别加入相应的反
应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心。
4.PCR扩增（核酸扩增区）
4.1将待检测反应管置于荧光定量PCR仪反应槽内；
4.2设置好通道、样品信息，反应体系设置为25ul；荧光通道选择：
检测通道（ReporterDye）FAM，淬灭通道（QuencherDye）NONE，请勿
选择ROX参比荧光。
4.3推荐循环参数设置：
11cycle42℃20min否
21cycle95℃10min否
340cycle
94℃15sec否
55℃30sec是
5.结果分析判定
5.1结果分析条件设定
设置Baseline和Threshold：一般直接按机器自动分析的结果分析，当曲
线出现整体倾斜时，根据分析后图像调节Baseline的start值(一般可在3~15
范围内调节)、stop值(一般可在5~20范围内调节)，以及Threshold的Value
值(上下拖动阈值线至高于阴性对照)，重新分析结果。
5.2结果判断
阳性：检测通道Ct值≤35.0，且曲线有明显的指数增长曲线；
可疑：检测通道35.0 值≤37，且曲线有明显的增长曲线，判定为阳性，否则为阴性； 阴性：样本检测结果Ct值>37或无Ct值。 7.质控标准 阴性质控品：无明显扩增曲线或无Ct值显示； 阳性质控品：扩增曲线有明显指数生长期，且Ct值≤32； 以上条件应同时满足，否则实验视为无效。 8.产品性能指标 阴阳性参考品符合率：5份阳性参考品符合率为100％；10份阴性参考品符合率 为100％。 低检测限：5.0×102copies/ml。 精密度：批内、批间精密度检测Ct值的变异系数（CV）均小于等于3%。