动物模型构建与评估丨孤养动物模型评估实验皮层神经元

《动物模型构建与行为评估》pdf电子版V1.0

建立孤养动物模型

Fig1行为测试流程图

图A展示的是孤养建模示意图,图B、C、D、E、F、G分别展示的为旷场实验、强迫游泳实验、高架十字迷宫实验、悬尾实验、糖水实验和社交实验。

行为学鉴别

①一般状态观察

30天建模完成后,称量小鼠体重,并观察记录小鼠的毛发、状态、有无异常进食行为等。如有小鼠因牙齿发育不良引起的体重过轻或有体态异常(如因肿瘤原因身体有较大隆起),则剔除小鼠,不进行后续实验。其余全部小鼠进行行为学实验。

②旷场实验

VisuTrack丨专为动物行为实验开发的先进分析工具

③强迫游泳实验

④高架十字迷宫实验

高架十字迷宫,型号:XR-XG201,上海欣软

⑤悬尾实验

⑥糖水偏好实验

进行糖水实验。进行糖水实验前首先需要适应期。在适应期的第一天,使用有标尺的仓鼠喂水瓶装满50ml纯水,并放置在小鼠笼子左右各一侧。在适应期的第二至四天,给小鼠放置两瓶50ml浓度为1%的糖水,糖水由国产蔗糖和纯水按1:100的比例制成。在三天的适应期中,要每天调换两个水瓶的位置。适应期的第五天取走水瓶,将小鼠禁水24h。第六天进行正式实验。实验开始前,将孤养和群养小鼠均放置为单笼一只。并且在鼠笼的左右侧分别给小鼠放置一瓶50ml的纯水和一瓶50ml浓度为1%的糖水,在正式记录开始前分别对纯水和糖水进行称重。要注意水瓶在放入鼠笼时应避免过度用力而泄漏液体,并且保证水瓶放入后不因重力而漏水。实验开始后,总体在黑暗环境中记录2小时,其中在实验进行到1小时时,人为更换两水瓶左右位置。实验结束后,将液体轻轻从笼盖上取下,使用电子秤称量2小时内纯水和糖水的消耗量。统计糖水偏好指数,计算方法为(糖水消耗量/糖水消耗量+纯水消耗量)%。

⑦社交实验

Fig2孤养和群养小鼠社交能力表现

图A是孤养小鼠在社交能力测试中的一个示例。图B是对10分钟社交能力测试中孤养小鼠分别在小鼠一侧还有物体一侧花费所时长做出的统计柱状图。结果显示孤养小鼠对物体或同类伙伴的探索没有表现出差异性。图C是群养小鼠在社交能力测试中的一个示例。图D是对10分钟社交能力测试中群养小鼠分别在小鼠一侧还有物体一侧花费所时长做出的统计柱状图。

Fig2对前联合皮层进行双光子成像

图A展示的是小鼠在前联合皮层的双光子成像示意图,图B展示的是实验中的一个样例,在成像实验结束后,为确定成像位置的准确性对成像小鼠的脑组织进行形态学连续切片,根据共聚焦显微镜的结果对应脑图谱位置证明成像位置是前联合皮层,因此后续实验结果可信。图C是图B中第三张图片的放大图,展示的是染料扩散的中心位置,一般为实验中的主成像区。

孤养小鼠在前联合皮层放电活动增强:

使用LabVIEW将双光子成像得到的8只孤养和4只群养小鼠分别623和913个神经元自发放电活动的钙信号计算出来,使用Matlab进行钙信号的识别,将神经元细胞在每分钟内发放的次数以及频率百分比作为指标,在Matlab中画取频率分布图。

Fig3孤养小鼠前联合皮层中不同的放电信号样例展示

图A展示的是使用双光子钙成像技术分别在孤养小鼠和群养小鼠前联合皮层采集到的单个神经元钙信号,其中孤养或群养组的10个胞体信号来自一个成像面,钙信号由LabVIEW、IgorPro和AdobeIllustrator软件处理而来。图B、C、D、E分别是对其中一些特别的连续放电信号的放大,这些异常活跃的钙信号代表了神经元的异常状态。

文献引用:

李瞳.基于孤养动物模型的前联合皮层神经元异常放电研究[D].西南大学,2021.

用钙离子指示剂Cal-520研究小鼠听皮层神经元反应特性[D].张健雄.第三军医大学,2017

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