末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）与荧光素（FITC）标记的dUTP反应，在DNA链断裂中将尿苷连接到3′-羟基（3′OH）末端。双链DNA通过DAPI复染，DAPI嵌入双链DNA链之间。
2.三种主要的DNA片段化检测对比
三种主要的DNA片段化检测：DNAladder、Cometassay、TUNEL。
DNAladder：BP彼此分开，所得的双链DNA片段在琼脂糖凝胶中被视为核小体200bp分子量标准。
彗星测定：Cometassay是相同方法的单细胞变体，其中彗星状图像代表死细胞中降解的DNA，而没有彗星的点是由活细胞的DNA形成的。
TUNEL标记整个和片段化细胞核内DNA中的3′OHDNA末端。
与DNA片段化测量的其他两种主要方法（DNA分子量标准和彗星测定）相比，TUNEL的优势在于基于DNA末端而不是片段的鉴定。
3.不同TUNEL检测模式的说明
通过以上区分几种TUNEL模式。
仅细胞核类型的TUNEL模式由轻度损伤产生，而更强的损伤（即暴露升高）会导致细胞核或细胞更强的染色和崩解。
举例：在肾损伤期间，由于AP核酸内切酶的作用，DNA修复也可能导致错误的TUNEL阳性信号。化学（过氧化氢、博来霉素）或物理（伽马辐照）损伤诱导的大量氧化性肾损伤可能会增加3′OH末端的数量，除了核酸内切酶介导的DNA片段化外，还会增加假阳性TUNEL读数。
3.某些细胞类型（例如内皮细胞）或肾脏区室（例如肾小球）或病理组织（例如肿瘤）中的DNaseI活性低。预计这些细胞会显示出低TUNEL阳性，不是因为它们具有抗损伤性，而是因为没有足够的核酸内切酶活性来在TUNEL中产生可测量的信号。
4.当DNA片段化量过高时，例如，在细胞死亡的晚期或高强度损伤中，由于双螺旋的分解，剩余的DNA无法用DAPI正确复染，因此会出现TUNEL染色的定量问题。
5.使用荧光素标记的TUNEL时，存在将组织中的背景自发荧光识别为TUNEL阳性的危险。在这些情况下，建议改用红色谱TUNEL。
TUNELAssay:APowerfulToolforKidneyInjuryEvaluation.ChristopherL.Moore,AlenaV.Savenka，AlexeiG.Basnakian.Int.J.Mol.Sci.2021,22.
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