高分文献爆款产品——ROS活性氧检测攻略大全

活性氧(Reactiveoxygenspecies,ROS)是细胞代谢的正常产物——一种含氧的生物活性分子,包括过氧化物、超氧化物、羟基自由基、单线态氧和α-氧等,在细胞信号通路、转录等方面发挥重要的调控功能,如细胞凋亡、自噬、衰老、癌症等都与活性氧有关。

ROS浓度高低对细胞的影响

——为什么要测ROS?

在活性氧水平较低时,ROS作为“氧化还原信使”参与细胞内的信号传递和调节。然而,在环境压力下(例如电离辐射、热暴露、紫外线、缺氧等),ROS水平会急剧增加,可能引起DNA损伤,抑制基因表达,导致蛋白质错误折叠甚至影响蛋白质合成,对细胞结构造成严重损害,这被称为氧化应激。

ROS水平一旦超过内源性抗氧化防御的能力,氧化还原平衡被破坏,就会导致DNA、脂质、蛋白质的结构或构像改变,最终导致细胞死亡。

ROS水平是细胞正常生理功能和环境因素导致细胞损伤的重要信号,检测细胞内ROS水平对于理解一些药物作用的信号通路和潜在作用机制具有重要意义。因此选择合适的探针检测ROS对于疾病机理研究以及药物筛选具有重要的作用。

ROS检测的原理——

检测的机理是什么?

DCFH-DA本身没有荧光,可以自由穿过细胞膜,进入细胞内后,可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能透过细胞膜,从而使探针很容易被标记聚集在细胞内。细胞内的活性氧能够氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF。DCF绿色荧光强度与细胞内活性氧水平成正比,检测DCF的荧光就可以知道细胞内活性氧水平。

在激发波长488nm,发射波长525nm条件下,使用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、荧光分光光度计、荧光酶标仪、流式细胞仪等检测DCF荧光,从而测定细胞内活性氧水平。

客户使用本产品发表的文献(部分举例)

截止2022年9月,ROS活性氧检测试剂盒(50101ES01)已累计发表文献164篇,总影响因子913.72。

常见FAQ

A1:一般用于哺乳动物细胞的检测,只适合活细胞或活体的活性氧检测。

A2:不适合用于血清或组织匀浆液ROS的检测。新鲜组织制备的单细胞悬液可以尝试。

A3:只适合活细胞或活体的活性氧检测,因为氧的羟基自由基和超氧自由基的半衰期极短,只适合活细胞的检测。植物或细菌,可以在制备原生质体后进行检测使用,该试剂盒不能检测体内的ROS。

A4:探针孵育后,一定要洗净残余的未进入细胞内的探针。

A5:正常细胞中活性氧含量很低,检测效果可能不会很好。

A9:荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、荧光分光光度计、荧光酶标仪、流式细胞仪等都可以检测荧光值。

客户使用本产品发表的科研文献(部分)

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