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特点：
●比DCFH-DA更高的灵敏度
●可多种仪器上机
试剂盒内含
产品概述
ROSReactiveOxygenSpecies主要是在线粒体中合成ATP时所产生的高活性氧簇。ROS对细胞内的信号传导和吞噬作用等免疫机能起着重要的作用。另一方面，ROS对DNA和蛋白质的氧化作用也是各种疾病和细胞衰老的原因之一。
荧光特性
技术信息
与市面现有试剂的比较
高灵敏度DCFH-DA与常规DCFH-DA对活性氧（ROS）的反应性相同。另外，由于具有与DCFH-DA相同的荧光特性（λex：505nm，λem：525nm），因此能够以相同的激发/荧光波长进行检测。
用DCFH-DA和ROS检测试剂盒-高灵敏度DCFH-DA-分别对过氧化氢（1×104细胞/ml）处理的HeLa细胞进行染色，并比较细胞内ROS的荧光结果。结果显示，在任何检测仪器中，同仁化学ROS检测试剂盒-高灵敏度DCFH-DA都以比DCFH-DA拥有更高的灵敏度。
（1）荧光显微镜检测
<检测条件>Ex.488nm/Em.500-560nm细胞种类：HeLa细胞
（2）使用荧光酶标仪检测
<检测条件>Ex.490-520nm/Em.510-540nm细胞种类：HeLa细胞
（3）使用流式细胞仪检测
<检测条件>FITC激发电压：215V细胞种类：HeLa细胞
实验例
一.Erastin处理的A549细胞的内在性ROS的检测
1.向ibidi8-wellplate中接种A549细胞(1××104cells/ml,DMEM,10%fetalbovineserum,1%penicillin-37°C、5%CO2培养箱内过夜培养。
2.去除培养基，加入用DMEM培养基稀释好的50μμmol/l的Erastin溶液，37°C、5%CO2培养箱过夜培养。
3.去除上清，HBSS清洗2次，加入HighlySensitiveDCFH-DADyeworkingsolution37°C、5%CO2培养箱培养30min。
4.去除WorkingsolutionHBSS清洗2次，再次加入HBSS，用荧光显微镜观察。
二.LPS处理的巨噬细胞内源性ROS的检测
用LPS（脂多糖）处理的RAW264.7细胞中细胞内ROS的变化的荧光成像结果显示，LPS处理可增加细胞内ROS。
<检测条件>细胞内ROS（高灵敏度DCFH-DA染料）：Ex.488nm/Em.500-560nm
<实验操作>1.在ibidi8孔板中接种RAW264.7细胞（3×104细胞，DMEM，10％胎牛血清，1％青霉素-链霉素）2.培养箱（37℃，5％）过夜培养3.除去培养基，用HBSS洗涤细胞两次，然后添加用DMEM培养基稀释的500ng/mlLPS4.培养箱（37°C，5％CO2）孵育20小时5.除去上清液，用HBSS洗涤细胞两次，然后添加高灵敏度DCFH-DA染料工作液。6.培养箱（37°C，5％CO2）培养30分钟7.培养30分钟后除去工作溶，用HBSS洗涤细胞两次后再添加HBSS并用荧光显微镜观察。
三.柳氮磺吡啶(SSZ)引起的细胞内代谢变化
向A549细胞添加已知抑制胱氨酸/谷氨酸转运蛋白（xCT）的柳氮磺吡啶（SSZ）之后，确认了细胞内的ROS、ATP、α-谷氨酸（α-KG）、谷胱甘肽（GSH）的变化和谷氨酸释放量的变化。
结果显示，由于SSZ的添加，细胞内的ATP、谷胱甘肽（GSH）以及谷氨酸的释放量减少，细胞内的α-谷氨酸和ROS增加。
参考文献
9、HaoGu,YuhuiZhu,JiaweiYang,RuixueJiang,YuweiDeng,AnshuoLi,YingjingFang,QianjuWu,HonghuanTu,HaishuangChang,JinWen,XinquanJiang,”Liver-InspiredPolyetherketoneketoneScaffoldsSimulateRegenerativeSignalsandMobilizeAnti-InflammatoryReservestoReprogramMacrophageMetabolismforBoostedOsteoporoticOsseointegration.AdvancedScience”，2023,AdvancedScience,doi：10.1002/advs.202302136
10、ZixuanYuan,ORCID,XiaomingZhou,YanZou,BingtaoZhang,YaoJian,QiWu,ShujuanChenandXinZhang“HypoxiaAggravatesNeuronFerroptosisinEarlyBrainInjuryFollowingSubarachnoidHemorrhageviaNCOA4-MeditatedFerritinophagy”，Antioxidants，2023，doi.org/10.3390/antiox12122097