高脂高糖饮食对小型猪肠道微生物的影响

根据E.Z.N.A.soilDNAkit(OmegaBio-tek,Norcross,GA,U.S.)说明书进行粪便样品微生物群落总DNA抽提，使用1%的琼脂糖凝胶电泳检测DNA的质量;使用338F(5′-ACTCCTACGGGAGGCAGCAG-3′)和806R(5′-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3′)对16SrRNA基因V3-V4可变区进行PCR扩增，扩增程序如下：95℃预变性3min，27个循环(95℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸30s)，然后72℃稳定延伸10min，最后在4℃进行保存(PCR仪：ABIGeneAmp9700型)。PCR反应体系为：5×TransStartFastPfu缓冲液4μL，2.5mmol·L－1dNTPs2μL，上游引物(5μmol·L－1)0.8μL，下游引物(5μmol·L－1)0.8μL，TransStartFastPfuDNA聚合酶0.4μL，模板DNA10ng，ddH2O补足至20μL。每个样本3个重复。扩增产物经凝胶电泳检测后，送上海美吉生物医药科技有限责任公司使用Illumina公司的MiseqPE300平台进行测序。

基于微生物16SrRNA基因测序结果，对不同干预时期HFD组和CN组进行多样性分析。Beta多样性分析发现，饮食干预7d时导致微生物组成发生了较小程度的变化，但在第30天时，HFD组相比CN组的变化却很显著，这表明高脂高糖饮食可能导致肠道菌群的组成逐步累积改变。而Alpha多样性分析发现，HFD组肠道微生物的多样性普遍低于CN组，但两组间并没有达到显著性的差异，表明饮食诱导的肠道微生物群组成的变化可能是由较低水平细菌种类的丰度变化引起的。

总而言之，本研究结果表明，由高脂高糖饮食组(HFD组)和普通饮食组(CN组)的肠道微生物组成与结构在不同干预时期呈现动态的变化和差异，表明特定的细菌物种或物种组合可能直接或间接影响肥胖的发生。这些结果增加了对肠道微生物菌群与宿主的相互作用的认识，并将促进通过综合因素调控肠道微生物来治疗肥胖及其并发症方法的研究与应用。