BALB/c健康雌性小鼠20只，分别接种乳腺癌4T1细胞1×106个/mL悬液，随机均分为两组。接种成瘤后一周开始腹腔注射ADM100mg/mL，空白组给予同等剂量生理盐水，给药1周后取瘤组织进行TMT标记定量蛋白质组学检测。
盐酸阿霉素、DMSO，北京索莱宝科技有限公司；BALB/c小鼠，许可证号：SCXK(京)2016-0002；BCA试剂盒，碧云天；ELISA试剂盒、白介素-2(IL-2)(批号：B265707)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)(批号：B288663)、白介素-10(IL-10)(批号：B299453)、干扰素-γ(IFN-γ)(批号：B298549)，BioLegend公司；TMT标记试剂盒，Thermo公司；三乙基碳酸氢铵(TEAB)，Sigma公司；DMEM培养基、0.25%Trypsin-EDTA，Gibco公司；FBS，ExCellBio公司；三氟乙酸，Sigma-Aldrich公司；乙腈，FisherChemical公司；二硫苏糖醇，Sigma公司；尿素，Sigma公司；甲酸，Fluka公司；碘代乙酰胺，Sigma公司；胰酶，Promega公司；二甲苯、乙醇等均为国产试剂。
取小鼠癌组织，加入预冷的PBS，制成10%组织匀浆，3000r/min离心20min，取上清液，保存于20℃，按照试剂盒说明书检测组织中IL-2、TNF-α、IFN-γ及IL-10的蛋白表达水平，绘制标准品曲线。在96孔板上加100μL稀释过后的一抗，2–8℃过夜。弃掉一抗，洗板4次。加入1×样品稀释液，室温孵育1h。洗板4次，每孔加入100μL标准品或样品，适当摇晃，充分混匀，密封，室温孵育2h。洗板4次，每孔加入100μL酶标抗体，密封，室温孵育1h。洗板4次，每孔加入100μL稀释后的亲和素-HRP，密封，室温孵育30min。洗板5次。加100μL配制好的显色剂，避光孵育30min，板内颜色变为蓝色。每孔加入100μL终止液，板内溶液由蓝色变为黄色。5min内在酶标仪的450nm读数测定OD450值，根据绘制的标准曲线和样品OD450值，计算样品含量。
小鼠眼眶取血500–600μL置于抗凝管中，旋转抗凝管避免血液凝集，将10倍量的红细胞裂解液加入抗凝管中，轻摇抗凝管后4℃静置15min。抗凝管中血液转入15mL离心管中，1000r/min离心5min。弃上清，再次加入10倍的红细胞裂解液，再次1000r/min离心5min。弃上清，吸至EP管中，加1mLPBS，轻轻吹打避免损伤细胞，1000r/min离心5min。弃上清，加150μLPBS重悬细胞。所有组别的抗凝管分为两部分，一部分加入抗体CD3-BV421、CD4-PE和CD25-FITC，另一部分加入抗体CD3-BV421、CD8-PE，同时所有抗体均设置单染管，避光孵育25–30min。加1mLPBS润洗后1000r/min离心5min。弃上清，加100μLPBS重悬后，上机检测。
在ADM/CON两个样本中以1.2倍变化为差异阈值，两组间比较采用t检验，富集检验使用Fisher's检验。当P<0.05时，以差异表达量变化超过1.2倍或1/1.2倍有统计学差异。FCM和ELISA数据以x±s表示，以P<0.05为差异有统计学意义。