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【关键词】乙肝病毒性肝炎;两对半临床检验;分析
1资料和方法
1.1一般资料选取2017年1月至2019年2月的30例疑似患有乙肝病毒性肝炎的患者,并对他们进行全面的两对半临床检验,在确诊为阳性之后,对这些患者进行及时的治疗。在这些疑似患病的患者当中,。男性患者16人,女性患者14人。
1.2方法对这30为患者进行全方位的两对半临床检验,以得出一个准确的结果。具体来讲,我们需要观察患者的各项指标,如果患者出现常见症状为乏力、全身不适、食欲减退的情况[1],我们就需要对这类患者进行进一步的检查。然后,我们需要了解患者的病史,了解他是否患过肝炎,以及家族是否有乙肝病毒性肝炎的遗传病史。对于那些已经确诊为阳性了的患者,我们应当采用中西结合的方法进行治疗。实际上,在进行乙肝病毒性肝炎的治疗过程当中,药物治疗是最有效的。当然,手术治疗也是一种良好的补充。除此之外,为了确保患者的康复状况良好,我们还需要对他们进行及时的心理疏导,尽可能的减轻患者的心理压力。
1.3观察指标在进行患者的治疗时,我们主要是通过患者的两对半指标进行确定的。当然,为了确认我们的治疗结果,我们还需要对患者进行指标分析[2]当发现患者的肝两对半指标出现严重异常之后,我们就可以确诊了。在治疗的过程当中,我们应当观察好患者的身体情况,并时常与患者进行交流,了解他们的精神状况。
2.结果
通过对于这些患者的两对半临床检验,我们确定出21位患者患有乙肝病毒性肝炎,其余9例都是由于其他病症而引起的现象。我们对着21例确诊的患者进行了及时有效的针对性治疗,通过治疗之后,有20名患者有明显的好转,1名患者的病情没有明显的改善。
3讨论
目前,我国的各大医院已经开始对这种病加大了重视程度,很多医院都开始主动的对这种病的症状和治疗方法进行了宣传,也起到了不错的效果。很多人都已经不再害怕乙肝会出轻易的传染了,乙肝患者的处境也变得好了很多。但是,相比于实际的发病人数,我们能够做的其实还有很多。我国目前对于这种疾病的诊断主要是采用临床检验阶段。通过对于患者两对半指标的分析,我们可以大致的判断出患者是否患有乙肝病毒性肝炎。如果患者的检验结果为阳性,那么则需要接受进一步的检查和治疗。
运用两对半检验的方式,可以很好的确认病人是否患上了乙肝,并且这项技术已经比较成熟了。只需要抽取yulu.cc血液,通过化验和分析就可以得到一个准确的结果,这对于我们控制乙肝病毒的传播来讲是一个很好的突破。相信随着技术的不断进步,乙肝病毒性肝炎的完全治愈也近在眼前了。
一、班主任具有调控干预情境的优势
这是从态度和行为的关系来分析的。
二、班主任具有监控干预的过程的优势
这是从态度的心理功能来分析的。
三、班主任更容易取得学生的依从和认同
这是从态度的形成过程来分析的。
美国社会心理学家凯尔曼提出,态度形成包括依从、认同和内化三个阶段。依从是态度形成的开始,是个体按照社会规范和社会期待或他人意志,在外显行为方面表现与他人一致,用来获得奖励,避免惩罚;认同是个体自愿接受他人观点,信息或群体规范,使自己与他人一致;认同受情感因素的作用;内化是态度形成的最后阶段,个体真正从内心相信并接受他人的观点,并将他人观点纳入自己的价值体系,是原有态度与认知态度协调的结果,是以理智、认知成分为基础的。个体态度的形成,从依从到认同,再到内化,最后成为不易转移的稳定性的心理倾向。
四、班主任威信高,传递信息的途径多
这是从态度转变的过程来分析的。霍夫兰德等人提出一个态度转变的模型,该理论认为,信息传递者的威信越高,与预者的相似性越大,干预的效果越好。显然,班主任比心理咨询工作者具有更高的威信,在同样的环境中生活,相似性往往更大,所以由班主任作为干预者,效果会更好。该理论还认为,干预者的立场很重要,这会直接影响他们的干预效果,因为很多时候,预者往往会怀疑干预者的动机。作为班主任,我们的孩子从小的教育就是老师像妈妈一样,知道班主任最终的目的是为了自己好。而心理工作者和预者的关系,是简单的咨询与被咨询的关系,有利益在里面。显然,如果班主任和咨询师具有一样的咨询技能,班主任自然会取得更好的干预效果。
【关键词】银黄冻干粉针;中枢神经系统;动物模型
abstract:objectivetoobservetheeffectofyinhuangfreeze-driedpowderinjectiononnervoussystemofratsandmice,andtoprobeitssafety.methodsafterinjectedyinghuangfreeze-driedpowderinjectionnervesystemandgeneralbehaviorofratormousewereobserved.resultsyinghuangfreeze-driedpowderdidn’taffectrat’sormouse’sgeneralbehavior,buthadcertaincentralnevoussystemsuppressionfunctioninratsandmice.conclusionyinghuangfreeze-driedpowderhavecertaincentralnevoussystemsuppressionfunctioninratsandmice.
keywords:yinhuangfreeze-driedpowderinjection;centralnevoussystem;animalmodel
银黄冻干粉针主要由金银花、黄芩等组成,具有清热解毒、消炎等功效,有明显的抗病毒、抗菌、抗炎、镇痛和解热作用,用于病毒或细菌感染引起的上呼吸道感染者。本实验观察了银黄冻干粉针对小鼠、大鼠中枢神经系统的影响,探讨其用药安全性,结果表明,银黄冻干粉针对中枢神经系统有一定的抑制作用。现将结果报道如下。
1实验材料
1.1药物与试剂
注射用银黄冻干粉针由天津市轩宏医药技术有限公司提供,批号040607,实验前用生理盐水配成所需浓度。戊巴比妥钠:北京化学试剂公司(德国进口分装),批号020402。
1.2动物
昆明种小鼠,体重18~22g;sd大鼠,体重180~210g;检疫2周后用于实验,均由南京中医药大学实验动物中心提供,合格证号:syxk(苏)2002-0053。
1.3仪器
xzc4b型小动物测定仪,无锡前洲飞龙电子仪器厂产品;大鼠转棒(自制),直径为2.5cm,薄圆板分成2隔,转速8r/min。
2方法和结果
2.1对小鼠睡眠的影响[1]
取小鼠40只,雌雄各半,随机均分为4组,即正常对照组(生理盐水10ml/kg)及注射用银黄冻干粉针低、中、高剂量组。各组均按10ml/kg分别静脉注射给药。30min后各组腹腔注射阈下睡眠剂量的戊巴比妥钠28mg/kg,观察并记录注射戊巴比妥钠30min内每组入睡小鼠的个数(以小鼠翻正反射消失达1min以上者作为入睡指标)。数据处理质反应资料采用χ2检验,量反应资料采用student’st检验(下同)。结果见表1。表1注射用银黄冻干粉针对小鼠睡眠的影响(略)
2.2对小鼠自发活动的影响[2]
取小鼠40只,雌雄各半,分组同“2.1”项。各组等容(10ml/kg)分别静脉注射给药。用小动物测定仪观察小鼠给药后30、45、60、90、120min自发活动情况,记录小鼠活动次数。结果见表2。表2注射用银黄冻干粉针对小鼠自发活动次数的影响(略)注:与正常对照组比较,*p<0.05(下同)。
2.3对大鼠在转棒上掉落次数的影响[3]
筛选合格的sd大鼠(经1次适应后,大鼠在转棒上至少停留5min者作为合格大鼠)40只,雌雄各半,随机均分为4组,即正常对照组(生理盐水10ml/kg)及注射用银黄冻干粉针低(13mg/kg)、中(25mg/kg)、高(50mg/kg)剂量组。各组等容(10ml/kg)静脉注射给药。分别在给药后30、45、60、90、120min时,观察大鼠5min内的掉落次数。结果表明,注射用银黄冻干粉针低、高两个剂量组的大鼠转棒掉落次数有所增加,与正常对照组比较有显著差异(p<0.05)。结果见表3。表3注射用银黄冻干粉针对大鼠在转棒上掉落次数的影响(略)
本研究结果表明,注射用银黄冻干粉针给药后,不影响动物睡眠,对自发活动和平衡能力有一定的影响。提示注射用银黄冻干粉针对动物中枢神经系统有一定抑制作用。
【参考文献】
[1]陈奇.中药药理研究方法学[m].北京:人民卫生出版社,1993.672.
【关键词】半干法;玉米;淀粉;生产;技术
利用玉米为原材料进行淀粉糖的制备是当前较为常见的一种制糖方法,这是因为玉米中含有大量的淀粉,可以通过一定的工艺手段将其转化并提取出淀粉糖。、以下本文主要介绍了在利用半干法进行玉米淀粉糖的制备生产时需要注意的关键技术。
1、半干法玉米淀粉糖工艺流程
工艺流程为:玉米粉润料挤出(糊化、液化)晾干磨粉测挤出物成分。
2、操作要点
2.3晾干。挤出的物料呈宽带状,把待测的样品分成小段,铺开自然晾干。
2.4磨粉。把晾干的待测样品册成更小的碎块便于粉碎。使用粉碎粒度60-200目筛的粉碎机进行粉碎,粉碎后的物料过100目筛,装袋编号待测。
2.5测挤出物成分。测原料玉米粉和挤出样品的水分含量、脂肪含量、蛋白含量、还原糖含量、淀粉含量。
2.6原料玉米粉各成分含量的测定。经测定,原料玉米粉的各成分含量分别为:水分14.7%,灰分0.48%,脂肪0.56%,蛋白质7.8%,淀粉35.5%。
3、淀粉与还原糖的测定
3.2淀粉的测定:测定:同还原糖的测定方法。在对样品进行处理时需要用乙醚,这种试剂能够起到脱脂的作用,添加乙醇试剂可以脱去淀粉当中的可溶性糖分,将这些操作完成之后要用清水将其清洗干净,。在对淀粉质进行过滤时,每一个流程的速度都要进行严格的控制。然后要进行式样处理,选择经过脂肪提取后的样品,先不进行脱脂,将其直接脱糖和水系,这个时候的过滤速度较之前有所提高,但是整体速度还是比较慢。回流后的水解液呈深棕褐色,用盐酸和氢氧化钠调节,用广泛pH试纸调试使水解液pH约为7。加入乙酸铅溶液后,有浅棕色沉淀生成。过滤后,滤液为浅黄色待用。
4、半干法技术应用的关键点
4.3温度对挤出试验效果的影响。温度对淀粉降解程度的影响与流量相比要明显很多,经过实验可知,当温度达到120℃时,淀粉降解达到最佳状态。温度也同样受到物料含水量的影响。一般情况下,物料含水量比较高时,淀粉链的形态是伸展的,在酶切分时相对来说要均匀很多,淀粉也比较容易降解,而反之则不同。
4.4酶用量对挤出试验效果的影响。酶含量是影响挤出效果的主要参数,它直接影响到淀粉的液化程度。本试验采用的耐高温α一淀粉酶酶活为4万单位/g,最适温度范围为90-150℃。酶用量越大,淀粉降解程度越低,出现这种情况的原因是酶用量超过0.2%后,酶趋于饱和,酶用量的增加对淀粉的水解速率影响减弱。
5、结语
参考文献
关键词血小板减少症乙型肝炎病毒
IFNα-2b糖皮质激素
doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2011.04.061
资料与方法
方法:均应用IFNα-2b3MU皮下注射,隔日1次,持续≥3个月;同时口服强的松片15mg/日,共3周。并定期检测血小板计数。
疗效判断标准:①完全反应(CR):血小板计数≥100×10【sup】9【/sup】/L;部分反应(PR):血小板计数(50~100)×10【sup】9【/sup】/L,或较前增加30×10【sup】9【/sup】/L;②次要反应(MR):血小板计数≥30×10【sup】9【/sup】/L,或较前增加20×10【sup】9【/sup】/L;③无效(NR):治疗2个月后血小板计数未改善,需进一步治疗。
结果
实验室结果:21例骨髓巨核细胞数量增多,5例正常;14例谷丙转氨酶(ALT)和(或)谷草转氨酶(AST)轻中度升高;腹部超声提示所有患者均没有肝硬化或门静脉高压证据;除血小板减少外,所有患者白细胞和血红蛋白均正常;病毒拷贝数9例升高,余患者正常。没有发现其他方面如系统性红斑狼疮、类风湿等疾患。
不良反应:大多患者存在流感样症状,如发热、肌肉酸痛等,多较轻微,均可耐受,部分患者给予对症处理。5例患者出现白细胞计数减低,范围在2.3~3.8×10【sup】9【/sup】/L,患者无特殊不适,不影响治疗。
讨论
[关键词]肺炎支原体;血小板减少性紫癜;临床表现
肺炎支原体感染(MP)是小儿呼吸道感染的主要病原体之一,经呼吸道飞沫传播,四季均有感染,其感染率有逐年上升的趋势[1]。MP不仅能引起肺炎,损害呼吸系统,还能损害多种脏器,引起多种肺外表现,如脑炎、心肌炎、肝炎,与小儿哮喘发病关系已引起临床医师的高度重视[2]。本文对我院2003年1月~2008年8月收治的20例MP感染引起的血小板减少性紫癜的患儿进行分析,现报道如下:
1资料与方法
1.1一般资料
本组男11例,女9例。1~3岁2例;4~6岁3例;7~10岁6例;11~14岁9例。20例患儿均有血小板不同程度减少,不同程度出现皮肤出血点、牙龈出血、鼻血、肉眼血尿等症状。血清学肺炎支原体抗体均阳性;血常规外周血小板计数均减少,其中PLT(21~50)×109/L8例,PLT(10~20)×109/L7例,PLT
1.2实验室检查
患儿静脉血3ml分离血清备用。
用被动凝聚法检测血清中MP-Ab。20例患儿中抗体滴度1∶804例、1∶1606例、1∶32010例。同时进行血常规测定,取患儿1ml经枸橼酸抗凝的静脉血测定。
被动凝集法测定血清中肺炎支原体抗体滴度1∶40为阳性。其外周血常规检测结果:WBC(4~10)×109/L9例,WBC10×109/L7例,PLT均
胸部X线检查:局灶片状阴影者6例,弥漫性间质改变4例,肺门周围模糊占5例,肺部无改变5例。
1.3治疗
在急性期尽量减少活动,避免外伤,避免服用影响血小板功能的药物。20例患儿均予红霉素治疗30mg/(kgd)静脉滴注,疗程2~3周后改口服1~2周。应用地塞米松0.5~1.0mg/(kgd)静脉滴注来改善血小板减少,至血小板数正常后逐渐减量,或用丙种球蛋白400mg/(kgd)静脉滴注,连用3d。
2结果
经治疗后20例患儿临床症状改善,实验室指标恢复正常,病情无反复。本组20例患儿,其中12例红霉素联合激素及丙种球蛋白治疗,5~7d后血小板正常,继续静滴1周红霉素,之后改口服红霉素1~2周;8例红霉素联合激素治疗,7~10d后血小板升至正常,继续静滴1周,之后改为口服红霉素1~2周,病情均无反复。
[参考文献]
[1]胡亚美,江载芳,申昆玲,等.实用儿科学[M].第7版.北京:人民卫生出版社,2002.1204-1205.
[2]王茂贵.儿科医师进修必读[M].北京:人民军医出版社,1999.190-194.
1.2方法
1.2.1对照组疗法对照组对患者采取三联治疗方法进行治疗,奥美拉唑20mg,阿莫西林500mg,甲硝唑400mg,2次/d,采取口服方式,一共治疗14d。
1.2.2治疗组疗法治疗组在上述治疗的基础之上采取(加用)半夏泻心汤治疗,方药如下:乳香8g、制半夏10个g、黄连6g、黄芩10g、、蒲公英15g、百合15g、连翘15g、白及20g。对湿重的患者加入藿香;气滞患者加入枳壳、厚朴;肝胃不和患者加入佛手、柴胡;脾虚的患者加入党参、白术。采取沸水煎服,2次/d,早晚服用,一共治疗14d。
1.4临床统计学处理采取SPSS15.0统计学软件进行分析。计量资料以(x±s)表示,组间比较行t检验。计数资料以(%)表示。用?字2检验,P
2.1治疗组与对照组治疗总体有效率对比,见表1。
2.2治疗组与对照组HP消除率以及根除率对比,见表2。
慢性胃炎在中医辩证理论当中属于"胃脘痛"范畴,其主要是胃受纳腐熟功能紊乱,胃失和降,气虚血淤以及气机受阻等造成胃脘胀痛。
半夏泻心汤来自《伤寒论》,半夏具有升散宣通之功效;黄芩以及黄连具有燥湿清热和沉降通泄之功效;乳香具有活血定痛之功效;蒲公英具有泻火解毒之功效;连翘具有清热解毒之功效;百合具有滋阴润肺之功效。根据现代临床药理学研究证实[3],以上诸药联合应用,可对HP进行良好抑制,对胃部黏膜进行保护,对黏膜病理变化组织修复起到良好的促进作用。因此,半夏泻心汤联合三联疗法治疗,可以取得显著的治疗效果。本文结果显示,治疗组治疗总体有效率明显要比对照组高(P
参考文献:
【关键词】盐酸替罗非班;肝素;急性冠状动脉综合征
急性冠状动脉综合征是以冠状动脉粥样硬化斑块破溃,继发完全或不完全闭塞性血栓为基础的临床综合征[1],主要包括不稳定型心绞痛、急性心肌梗死、心源性猝死[2],严重影响患者身体健康,甚至威胁生命安全。现阶段临床治疗药物种类较多,其中盐酸替罗非班是一种非肽类的血小板糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂,肝素通过戊糖序列激活抗凝血酶进而发挥抗凝疗效,本研究通过探讨盐酸替罗非班联合肝素治疗急性冠状动脉综合征的疗效及安全性,旨在为提高治疗有效性和安全性提供理论依据。现报告如下。
1.1一般资料选择2014年1月~2015年1月在本院接受治疗的急性冠状动脉综合征患者166例,随机分成研究组和对照组,每组83例。研究组男46例,女37例,年龄49~78岁,平均年龄(58.94±7.04)岁,病程3个月~5年,平均病程(10.73±16.43)个月;对照组男44例,女39例,年龄48~80岁,平均年龄(59.10±6.07)岁,病程6个月~5年,平均病程(10.88±16.26)个月。两组患者性别、年龄、病程等一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性。
1.3出血判定标准重度出血:血红蛋白降低>50g/L,血细胞比容下降>15%;中度出血:血红蛋白下降30~50g/L,血细胞比容下降9%~15%;轻度出血:血红蛋白下降
1.4统计学方法采用SPSS16.0统计学软件进行统计分析。计量资料以均数±标准差(x-±s)表示,采用t检验;计数资料以率(%)表示,采用χ2检验。P
2.1两组出血情况比较研究组患者无出血率及轻度出血率均显著优于对照组,差异有统计学意义(P
2.2两组并发症情况比较研究组患者心肌梗死率为3.61%、顽固心肌缺血率为6.02%、血小板减少率为7.23%,均显著低于对照组,差异有统计学意义(P
急性冠状动脉综合征的发病机制主要是因冠状动脉内粥样形成、斑块破裂、血小板活化聚集、血栓形成等[3],同时血小板活化聚集在血栓形成中发挥关键作用,因此临床治疗以抗血小板聚集为主。盐酸替罗非班是一种非肽类的血小板糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体的可逆性拮抗剂,药物通过阻断血小板聚集最后共同通路,达到有效抑制血小板粘附聚集的作用,进而起到抗凝、防止血小板血栓形成的目的,促进形成血管再通,减少患者临床缺血发生率[4]。低分子肝素是通过化学或酶学解聚方法产生的肝素片段,通过戊糖序列激活抗凝血酶而发挥抗凝作用,对抗凝血酶亲和性较高,且对Ⅹa因子抑制作用显著高于对凝血酶抑制作用,但是其生物半衰期较长且易出现肝素反弹现象[5]。
本研究通过探讨盐酸替罗非班联合肝素治疗急性冠状动脉综合征,数据结果表明研究组患者治疗后无出血率及轻度出血率均显著优于对照组,同时心肌梗死、顽固心肌缺血、血小板减少等并发症显著少于对照组,差异均有统计学意义(P
[1]邱炜炜.盐酸替罗非班治疗急性冠状动脉综合征疗效观察.山东医药,2010,50(41):71-72.
[2]郑轶,尚树忠,郭三强,等.急性冠脉综合征患者介入应用替罗非班对冠脉血流和心肌灌注的影响.医药论坛杂志,2012,33(5):49-50.
[3]张红雨,王佩显,曹艳君,等.冠状动脉内注射替罗非班对急性心肌梗死患者介入治疗中无复流现象的疗效研究.临床心血管病杂志,2011,27(1):25-29.
[4]吴彦.盐酸替罗非班治疗急性冠状动脉综合征的临床观察.中外医学研究,2015,13(12):130-131.
【关键词】补阳还五汤;生物碱;苷;三七总皂苷;血浆药理学;血管平滑肌细胞;细胞增殖
Objective:ToexploretheeffectsofplasmacontainingBuyangHuanwuDecoction(BYHWD),acompoundoftraditionalChinesemedicine,anditseffectivecomponents(alkaloidsandglycosides)andtotalPanaxnotoginsengsaponins(TSPN)onvascularsmoothmusclecell(VSMC)proliferationinducedbyplateletderivedgrowthfactor(PDGF)invitro.
Methods:VSMCproliferationwasinducedbyincubatingVSMCswithPDGFBB.EffectsofdifferentconcentrationsofblankplasmaontheVSMCproliferationand50%inhibitoryconcentrationsofplasmacontainingBYHWD,itsalkaloidsandglycosides,TSPNandatorvastatinweredetectedbyusingmethylthiazolyltetrazolium(MTT)methodtodeterminetheconcentrationsofplasmacontainingdrugsforthefollowingexperiments.Then,MTTandflowcytometrymethodswereusedtodetecttheeffectsofplasmacontainingBYHWD,itsalkaloidsandglycosides,TSPNandatorvastatinonVSMCproliferativeactivityandcellcycles.
Results:VSMCproliferativeactivitywasenhancedobviouslyafterPDGFBBstimulation.ThecellnumberinG0/G1phasewasdecreasedandthecellquantityinG2/MandSphaseswasincreasedfollowingPDGFBBstimulation.ComparedwithPDGFBBstimulationgroup,VSMCproliferationinducedbyPDGFBBinplasmacontainingBYHWD,itsalkaloidsandglycosides,TSPNandatorvastatingroupswasinhibited.Inallplasmacontainingdrugcomponentsgroups,thecellnumberofG0/G1phasewashigherandthecellquantityofG2/MandSphaseswaslowerthanthoseinthePDGFBBstimulationgroup.
Conclusion:BYHWDanditsalkaloidsandglycosideshavesimilarrolesofresistingVSMCproliferationtoTSPNandatorvastatin.AlkaloidsandglycosidesmaybethemajoreffectivesubstancesofantiVSMCproliferationinBYHWD.
Keywords:BuyangHuanwuDecoction;alkaloids;glycoside;totalPanaxnotoginsengsaponins;plasmapharmacology;vascularsmoothmusclecell;cellproliferation
1材料与方法
1.1实验材料
1.1.1实验动物SpragueDawley大鼠,由湖南省卫生防疫站实验动物中心提供,体质量120~150g,雌雄各半,合格证号为医动字第20010号。饲养在室温18~20℃,湿度65%~70%的环境中,自由饮水进食。
1.1.2实验试剂达尔伯克改良伊格尔培养基(Dulbecco’smodifiedEagle’smedium,DMEM)和胰蛋白酶(1︰250)购自美国Gibico公司。DMEM培养基以超纯水配制,过滤除菌,-20℃保存。胰蛋白酶以超纯水配成0.25%溶液,过滤除菌后分装,-20℃保存。胎牛血清(fetalbovineserum,FBS),购自杭州四季青试剂公司,56℃灭活补体30min,过滤除菌后分装,-20℃保存。甲基噻唑基四唑(methylthiazolyltetrazolium,MTT)、PDGFBB和二甲基亚砜(dimethylsulfoxide,DMSO),均购自Sigma公司。碘化丙啶(propidiumiodide,PI)和RNA酶抑制剂(RNaseinhibitor),均购自北京鼎国生物科技有限公司。其余试剂均为分析纯。
1.1.3实验药物补阳还五汤由黄芪60g、赤芍9g、川芎6g、当归9g、地龙9g、红花9g、桃仁9g组成。按我们以往的方法[4]提取原方水提取物和其有效组分生物碱、苷。补阳还五汤生药浓度为1g/mL。以高效液相色谱法测定各提取物中有效物质的含量。苷类组分中黄芪甲苷含量为1.40mg/g,芍药苷为19.11mg/g,苦杏仁苷为17.92mg/g;补阳还五汤中含黄芪甲苷0.38mg/g,芍药苷1.16mg/g,苦杏仁苷0.90mg/g;生物碱类组分中川芎嗪含量为6.00mg/g;补阳还五汤中川芎嗪含量为0.01mg/g。以去离子蒸馏水将苷类有效组分配成苷含量为0.71g/mL的溶液,将生物碱类有效组分配成生物碱含量为0.08g/mL的溶液待用。
TSPN,购自广西梧州制药(集团)股份有限公司,批号为071119。经检验,TSPN为淡黄色无定形粉末,味苦微甜,易溶于水。用薄层色谱鉴别,具有人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1的特征性斑点,水溶液pH6.1。以高效液相色谱法测定其主要有效成分[6],可见到人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1的特征性色谱峰,含人参皂苷Rg150.4%,人参皂苷Rb130.9%,三七皂苷R112.5%。
阿托伐他汀(atorvastatin),10mg/片,GodeckeGmbH生产,辉瑞制药有限公司分装,批号为080117。临用时以去离子蒸馏水配成2mg/mL混悬液。
1.2实验方法
1.2.1大鼠主动脉VSMC的培养和鉴定
1.2.1.1原代细胞培养采用组织贴块法培养原代细胞。每次取大鼠2~3只,处死,75%酒精消毒,切开胸腹部,无菌条件下分离胸腹主动脉,以Hank’s液洗净,剪去血管外小分支。移入含20%FBS的DMEM中,剪开血管腔,以镊子轻轻擦拭内膜层3~5次去除内皮细胞。然后将血管放入DMEM中(含20%FBS),剪碎血管至1mm2左右大小。将组织块转入培养瓶中,均匀贴壁,组织块间距为0.5cm。盖好瓶盖,轻轻翻转培养瓶使瓶底朝上,并向瓶内注入适量含20%FBS的DMEM液,于37℃、5%CO2培养箱内放置4~5h,使组织块干涸,并与瓶底贴附。然后将培养瓶慢慢翻转平放,使组织块完全浸入培养液中,继续静置3~5d。待有细胞从组织块周围游离出后,采用半量换液方式换液,2~3d换液1次,待原代培养2~3周至细胞长成致密单层即可传代。
1.2.1.2细胞传代及培养取原代生长的VSMC,以Hank’s液洗涤后,加入0.25%胰蛋白酶消化,以FBS终止反应,DMEM洗涤后,以含20%FBS的DMEM制成106/mL细胞悬液进行传代培养,以1︰2的比例传代。
1.2.1.3细胞鉴定实验用4~6代VSMC。用免疫细胞化学法测定VSMCα平滑肌肌动蛋白的表达,进行细胞鉴定。
1.2.2含药血浆的制备按文献方法[7]将大鼠随机分为空白组、阿托伐他汀组、补阳还五汤组、生物碱组、苷组和TSPN组,每组10~12只。空白组灌胃等量蒸馏水(给药体积为10mL/kg),补阳还五汤组灌胃补阳还五汤(生药量22.2g/kg),生物碱组灌胃生物碱类有效组分(1.66g/kg),苷组灌胃苷类有效组分(14.2g/kg),TSPN组灌胃TSPN(200mg/kg),阿托伐他汀组灌胃阿托伐他汀(20mg/kg)。每天给药两次,分别在上午9时和下午4时。连续灌胃7次后,于末次给药后2h,腹腔注射10%水合氯醛麻醉,颈总动脉取血,以1.5%EDTANa2抗凝(血液︰抗凝剂=9︰1),4℃、3000r/min离心15min取血浆。将各给药组各鼠血浆等量混合即为含药血浆,空白组各鼠血浆等量混合即为空白血浆。过滤除菌后分装,-70℃保存。
1.2.3空白血浆对VSMC生长的影响采用MTT法测定。VSMC培养于96孔培养板,然后以无血清DMEM培养24h使细胞生长同步化于G0期,分别加入不同浓度空白血浆(终浓度为0%、1%、5%、10%、15%、20%、25%),每孔总体积200μL。培养24h后,加入MTT(5mg/mL)20μL,4h后倾去培养液加入DMSO200μL,振荡10min后酶标仪上检测490nm处光密度值(opticaldensity,OD),计算空白血浆对VSMC生长的抑制率(inhibitoryrate,IR):IR=[1-(实验组OD值/空白组OD值)]×100%。空白血浆的每个浓度在同一培养板上重复5次。取IR<20%的血浆浓度作为对细胞正常生长无影响的浓度。
1.2.4含药血浆对PDGFBB诱导的VSMC增殖的半数抑制浓度测定采用MTT法测定各含药血浆对VSMC增殖抑制的半数抑制浓度(50%inhibitoryconcentration,IC50)。各含药血浆分为无血浆空白对照组,PDGFBB刺激组,终浓度分别为1%、5%、10%和15%的血浆组。VSMC培养于96孔培养板,然后用无血清培养基培养24h使细胞生长同步化于G0期,再分别加入不同终浓度的各含药血浆。3h后加入PDGFBB(终浓度10ng/mL),总体积为200μL。培养24h后,加入MTT(5mg/mL)20μL,4h后倾去培养液加入DMSO200μL,振荡10min后检测490nm处OD值。各含药血浆的每个浓度重复5次,IR=[(PDGFBB刺激组OD值-含药血浆组OD值)/(PDGFBB刺激组OD值-无血浆空白对照组OD值)]×100%。以含药血浆浓度为自变量,IR为因变量进行logistic回归分析,求出各含药血浆抑制50%VSMC增殖的浓度(IC50)。
1.2.5PDGFBB诱导的VSMC生长曲线的测定采用MTT法。VSMC培养于96孔培养板,然后用无血清培养基培养24h使细胞生长同步化于G0期。实验设为无血浆空白对照组、PDGFBB刺激组、空白血浆组、阿托伐他汀含药血浆组、补阳还五汤含药血浆组、生物碱含药血浆组、苷含药血浆组和TSPN含药血浆组。无血浆空白对照组每孔加入200μL培养液。PDGFBB剌激组加入180μL培养液,3h后加入PDGFBB(终浓度10ng/mL)20μL。空白血浆组和各含药血浆组分别加入160μL培养液、20μL空白血浆或含药血浆(终浓度为10%,各含药血浆终浓度约为各含药血浆的IC50),3h后加入PDGFBB20μL。37℃、5%CO2继续培养。分别于0、12、24、48h后取出培养板,每孔加入20μLMTT(5mg/mL),继续37℃、5%CO2孵育4h。吸除培养板各孔液体,每孔加入200μLDMSO并震荡10min,测定各孔490nmOD值,以OD值反映VSMC的增殖活性。
1.2.6VSMC细胞周期的测定将培养细胞分为无血浆空白对照组、PDGFBB刺激组、10%空白血浆组、10%阿托伐他汀含药血浆组、10%补阳还五汤含药血浆组、10%生物碱含药血浆组、10%苷含药血浆组和10%TSPN含药血浆组。用无血清培养基培养24h使细胞同步化于G0期,然后分别加入各含药血浆,3h后除无血浆空白对照组外各组均加入PDGFBB(终浓度10ng/mL),培养24h后用流式细胞分选术测定VSMC细胞周期。取约1×106个细胞/mL,用75%酒精固定后用PBS洗一遍,室温、避光下PI染色(含PI50μg/mL,RNaseinhibitor100μg/mL,0.1%TritonX100),至少30min后上机测定,流式细胞仪(型号FACSCalibur,美国BD公司生产)上检测各细胞周期的百分率,CellQuest软件分析结果。
1.3统计学方法应用SPSS16.0统计学软件进行分析。实验结果数据采用x±s表示。多组间均数比较用单因素方差分析,组间两两比较方差齐者用LSD法检验,方差不齐者用Dunnet’sT3法检验。检验水准α=0.05。
2.1VSMC鉴定倒置显微镜下,培养的VSMC贴壁生长,细胞呈长梭形,放射性生长,细胞胞质透明,相互融合在一起。成束的细胞平行排列,呈铺路石样“峰谷”状生长。可见到VSMC胞浆中α平滑肌肌动蛋白呈阳性表达,纯度达90%以上。表明培养的细胞为VSMC。
2.2空白血浆对VSMC生长的影响随着浓度的增加,空白血浆对VSMC增殖的抑制作用逐渐增强,当空白血浆浓度达20%时,其对VSMC增殖的抑制率为39.41%,表明空白血浆对VSMC生长具有一定的抑制作用。而空白血浆浓度为15%时,对VSMC增殖的抑制率为16.99%。故在实验中所用血浆的浓度不超过15%。见图1。
图1空白血浆抑制VSMC生长的抑制曲线(略)
Figure1VSMCgrowthinhibitorycurveofblankplasma
2.3各含药血浆对PDGFBB诱导的VSMC增殖的IC50各含药血浆可以显著抑制由PDGFBB诱导的VSMC增殖,随着浓度的增高,抑制作用增强,各含药血浆的IC50均为10%~15%,各含药血浆IC50比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。由此确定各含药血浆的加入浓度均取10%。见表1和图2。
2.5各含药血浆对PDGFBB诱导的VSMC增殖细胞周期的影响PDGFBB刺激组与无血浆空白对照组比较,G0/G1期细胞数显著减少(P
表1各含药血浆抑制PDGFBB诱导的VSMC增殖的IC50(略)
Table1IC50ofplasmacontainingvariouscomponentsonVSMCproliferationinducedbyPDGFBB
图2各含药血浆对PDGFBB诱导的VSMC增殖的抑制曲线(略)
Figure2VSMCgrowthinhibitorycurvesofplasmacontainingvariouscomponentsinducedbyPDGFBB
A:Plasmacontainingalkaloids;B:Plasmacontainingglycosides;C:PlasmacontainingBYHWD;D:PlasmacontainingTSPN;E:Plasmacontainingatorvastatin.
表2各含药血浆对PDGFBB诱导的VSMC增殖的影响(略)
Table2EffectsofplasmacontainingvariouscomponentsonVSMCproliferationinducedbyPDGFBB
*P
表3各含药血浆对PDGFBB诱导的VSMC增殖细胞周期的影响(略)
Table3EffectsofplasmacontainingvariouscomponentsonVSMCproliferativecycle
(1)给动物灌服中药后,被胃肠道吸收的中药成分首先进入血液,更确切地说,是进入血浆。但血浆并不等同于血清,血清是血液凝固后去除纤维蛋白与血细胞后留下的液体。在血液凝固过程中,除凝血系统激活外,同时还伴有抗凝系统、纤溶系统、抗纤溶系统、补体系统以及激肽系统发生不同程度活化,故血清不能简单地理解为去纤维蛋白的血浆。由于血液凝固的影响,可能会导致吸收入血的某些中药成分降解,或使某些本无活性的中药成分水解成有活性或毒性的成分,故含药血清中的药物成分并不一定反映的是中药进入血液中的成分。因此血清药理学方法不能视为符合中药在体内的真实过程。
(2)凝血过程有一系列酶生成,这些酶可能降解某些中药成分,也可能使某些本无作用的原形成分经过降解而产生一定的活性。同时,在制备血清的过程中,有些成分可能与血细胞和血浆蛋白结合或吸附,在去除纤维蛋白和血细胞以及灭活血清时,必然导致部分中药成分和中药引起体内释放的某些生物活性物质损失。因此,血清药理学方法可能并不能正确反映中药的有效成分。
(3)凝血过程中产生的凝血酶可刺激血小板与白细胞释放大量生物活性物质,所以正常血清具有明显生物活性。因此,血清药理学方法可能并不能正确排除正常血清对实验结果的影响。
药理研究的理想方法是使用单体化合物进行实验。但在当前条件下,大多数中药及复方难以做到这一点。因此半体内实验在中药药理研究中占有重要地位。由于血清药理学方法存在一些弊病,而血浆是血液在抗凝条件下去除血细胞的液体,吸收入血的中药成分就在其中。采用HPLCMS指纹图谱分析方法,观察到含药血清丧失了大部分中药极性成分,但含药血浆却保留了大部分中药成分[2]。由于它未发生凝血反应,可以避免由此带来的对中药作用的干扰效应。因此,血浆药理学方法有可能成为中药药理研究的重要方法之一。
本研究采用血浆药理学方法研究了补阳还五汤和其有效组分及TSPN对体外培养的VSMC增殖的影响。结果表明,空白血浆对VSMC生长和细胞周期具有轻微抑制作用。其原因可能是在制备血浆时,由于使用EDTANa2作为抗凝剂,而EDTANa2具有较强的络合Ca2+的作用,从而影响VSMC生长。这提示在制备含药血浆时,应进行抗凝剂选择的研究,以尽可能排除血浆制备过程中的各种影响。各含药血浆与空白血浆比较,均可显著抑制VSMC生长,表明采用含药血浆进行体外实验对于评价中药或复方的作用是可行的。
3.2补阳还五汤和其有效组分及TSPN对VSMC增殖的影响中膜VSMC迁移到内膜下层并异常增殖是动脉粥样硬化、冠状动脉球囊扩张术(percutaneouscoronaryintervention,PCI)后血管再狭窄等血管增殖性病变的共同细胞病理基础,抑制VSMC的异常迁移、增殖,阻抑血管损伤后内膜增生是治疗血管增生性疾病的关键[9]。已有的研究表明,血管紧张素受体拮抗剂、降血脂药羟甲基戊二酰辅酶A还原酶抑制剂等可对抗VSMC增殖,从而延缓血管增生性病变的发生[10,11]。因而,进一步寻找可以从多环节、多靶点影响VSMC增殖的药物,具有重要的意义。中药及复方具有多成分、多效应的特点,对于复杂疾病的成因和发展可以进行多环节、多靶点的调节,这种作用特点符合VSMC异常增殖的原因和病理生理机制。研究显示[12,13],多种植物药及有效成分具有抑制VSMC增殖的作用,对PCI后血管再狭窄可进行有效的防治。但目前中药的研究还存在制剂较粗糙、质量不稳定、作用机制不明确等缺点。因此,进一步开展中药及其有效成分抗血管再狭窄的研究,对寻找作用明确、成分相对清楚、质量可控的中药及其复方制剂,提高中医药疗效具有重要的意义。
本研究表明,PDGFBB剌激后,VSMC增殖活性显著增强,G0/G1期细胞数减少,G2/M期和S期细胞数增多。表明在PDGFBB剌激后,VSMC细胞周期启动,细胞增殖增快。与PDGFBB剌激组比较,空白血浆可使G0/G1期细胞数增多,G2/M期和S期细胞数减少。这可能是血浆中含有的抗凝剂EDTANa2对细胞生长的影响所致。阳性对照药阿托伐他汀含药血浆可抑制PDGFBB诱导的VSMC增殖,增加G0/G1期细胞数,减少G2/M期和S期细胞数。表明阿托伐他汀对PDGFBB诱导的VSMC增殖具有抑制作用。补阳还五汤含药血浆、有效组分生物碱含药血浆、苷含药血浆和TSPN含药血浆均可抑制PDGFBB诱导的VSMC增殖,增加G0/G1期细胞数,减少G2/M期和S期细胞数。表明补阳还五汤及其有效组分生物碱和苷均可抑制PDGFBB诱导的VSMC增殖。前期研究表明,补阳还五汤及其有效组分和TSPN可抑制大鼠主动脉球囊损伤后血管内膜增生,延缓血管再狭窄的发生[4,6],因而,抗VSMC增殖作用是补阳还五汤和TSPN延缓血管再狭窄病变的主要作用机制,生物碱和苷可能为补阳还五汤中抗VSMC增殖的主要药效物质,补阳还五汤及其有效组分生物碱和苷具有与阿托伐他汀、TSPN相似的抗VSMC增殖的作用。
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他们认识的时候,还是小学二年级,只是同班的同学而已。
男孩叫枫,长得还算帅,和他的名字一样很有个性。
不知道是因为男孩的名字好听还算因为他长得还不错,女孩对枫有一点好感,还谈不上喜欢。可是女孩一直都只是默默注视他,偶尔打声招呼,就像朋友那样。
女孩成绩挺好的,热情、开朗,属于慢热型。那时候的她,很善良,也很单纯。
女孩对那份感情隐藏的很好,不过,那一天——
现在的孩子都早熟,即使是小学二年级,女生们也会谈论帅哥之类的话题。一个女生说,学校里根本没有什么帅哥。
女孩想都没有想,说有,脱口而出男孩的名字。
女孩说的也是事实,只是其他女生都口是心非。
八卦新闻就此掀起,都说女孩喜欢枫,可女孩只是有一点在意而已。茶前饭后都有人在议论是非。
女孩很尴尬,从此就不再打算接触枫,只是偶尔默默地看着他。
之后————————————————
到六年级的每一次分班,女孩都没有和枫在一起,女孩渐渐地遗忘了男孩,毕竟是四年再未交谈,也极少碰面。而谁又会记得,以前有这样一个绯闻呢?
直到——
那天,校篮球队切磋,女孩的班级刚好是体育课,体育老师要计分,所以让他们班在旁观看。
女孩的朋友问女孩,你觉得篮球场上哪个比较帅?一点点也行。
女孩看见了枫的身影,总感觉,有那么一丝熟悉,却又想不起是谁。
这时的女孩已经不再是以前那个女孩了,她变了,学会了防备,不喜欢招摇。可是对朋友,她还是那样的真诚。
又一次,女孩指着枫,说,那个,还可以吧。
可是女孩信错人了。
女孩的朋友到处宣传,还是那句——女孩喜欢枫,绯闻又一次来袭。
女孩还是想不起他是谁,那抹身影一直在脑海里挥之不去。
女孩喜欢枫的绯闻传到了枫的朋友那里,他是和女孩同班的,和枫一样,成绩一般,也是篮球队的。
枫的朋友也不知道跟枫说了些什么,也不知道枫跟他说了些什么。
枫的朋友还说,枫以前喜欢过她,只是现在不喜欢了。
女孩愕然,她不知道她自己原来已经错过了,错过了那个曾经,错过了那个他,也错过了那段情。为什么自己从来没有注意过,她后悔了。原来,女孩对枫的,不只是那一点点好感,她自己也才发现。
女孩开始忘我地学习,想再次淡忘。
女孩的死党觉得奇怪,就问了她。女孩还说如实地告诉了她,曾经的一切,除了枫的朋友的那些话。
女孩的死党,不知从什么时候起,不知道为什么,就开始认识枫了。好像和他很熟的样子。女孩总是和她的死党在一起,看着死党和男孩的谈话,女孩没什么话说,是怕尴尬?还是加重绯闻?她不知道。她只知道,他们之间一句再也没有任何话可以说了。
现在————————————————
转眼又到了初中,又是分班,可为什么上天如此的捉弄人?明明已经过去了,明明已经是曾经了,可又为什么让他们再一个班?让他们成为陌生人不好么?当他们从未相识不好么?为什么……
现在,还说如同以前那样,即使是一个班,也没有太多的交汇,只是女孩知道,枫他心里已经有人了。
传闻枫喜欢的人叫颖,颖是个很酷很拽的女生,很个性,据说有很多男生喜欢,可是女孩不了解,还成了颖的朋友。
女孩也不清楚颖喜欢谁,枫是不是真的喜欢颖。或许,她还没有放弃一点点的希望。
是的,女孩变了,开始不轻易相信人,她再也不会轻易说出自己的真实想法。她也会个性、张扬,如果知道自己还有希望,她一定会争取。女孩的热情没变,只是多了一丝的虚伪。
最后————————————————
剧幕还没有落下,故事还没有完结,谁也不知道是什么结局,谁也不懂。
只是女孩也看开了许多,呵呵,最后,可能还是会遗忘吧,谁都不会记得。
感言========================================
爱情,何必轻信?曾经,何必在意?遗憾,何必挽回?
月落乌啼霜满天,江枫渔火对愁眠。
谁会懂这句诗?
互动=========================================
大家可以猜一下。
问题1:枫喜欢女孩还是颖,或者是别人?
问题2:女孩知道枫喜欢别人会有什么反应,或者女孩知道枫喜欢自己,会有什么举动?