试剂
60mm培养皿
100mm培养皿
DNA(μg)无菌水(ml)
6~120.263
10~200.438
2mol/L氯化钙(μl)2×HBS(ml)
370.3
620.5
缓冲液
电容(μF)
电压(V)
PBS缓冲液磷酸盐蔗糖缓冲液
2525
100~1600100~1000
Hamm’sF12培养基
960
250~450
标志基因
筛选药物
所适用的细胞
胸腺核苷激酶基因二氢叶酸还原酶基因
HAT氨甲蝶呤
tkˉ细胞dhfrˉ细胞
氯霉素乙酰转移酶基因新氯霉素磷酸转移酶基因
G418
所有真核细胞所有真核细胞
基质材料
类型
直径大小（μm）
形状
表面积
交联葡聚糖DEAE-纤维塑料基质玻璃
Cytodexl1Cytodexl2Cytodexl3DE-52DE-53聚苯乙烯固定培养悬浮培养
131~220114~198133~215径40~50长80~400径40~50长80~400160~3003000100~150
球形球形球形圆柱形圆柱形球形球形球形
600055004600
疫苗种类
主要疫苗
制备方法
动物疫苗(1930年前)鸡胚疫苗(1930年后)细胞培养疫苗(1950年后)基因工程疫苗(1980年)
疫苗(牛、羊淋巴液)狂犬病(兔、羊脑)黄热病乙型脑炎腮腺炎流感斑疹伤寒灰质炎麻疹风疹水痘乙型肝炎艾滋病（研制中）
鸡胚、细胞培养鸭胚、鸡胚、细胞培养鼠脑鼠脑、细胞培养鼠肺二倍体二倍体血源（人血浆）
在疫苗制备上，细胞培养相对于动物培养、鸡胚培养仍有许多得天独厚的优点。1．细胞没有特异性的免疫力。细胞在离体组织培养后，不存在免疫作用，易被病毒感染。2．病毒敏感范围广泛，有些病毒具有严格的宿主及组织特异性，但离体的细胞培养，对病毒的敏感范围就比较广泛。如脊髓灰质炎病毒可以在非神经细胞上生长，对原始人羊膜细胞不敏感，但在原代培养的羊膜细胞则敏感，并有细胞病变。肠道病毒、呼吸道鼻病毒等大都能在猴肾细胞培养上生长。3．在分离病毒时，细胞培养可大量接种标本，从而增加了分离几率。4．提高了收获物的纯度，易于加工处理。5．细胞培养瓶间的差异比较小，大大地提高厂实验的准确性、重复性。目前常用的细胞培养的细胞类型及所制备的疫苗类型如表13-7所示。#p#分页标题#e#表13-7细胞培养制备疫苗所用的细胞类型和疫苗类型
细胞类型
疫苗
人成纤维细胞CHO细胞(中G仓鼠卵巢胞株)原代地鼠肾细胞人二倍体细胞WI—38非洲绿猴(Vero)细胞
HAV(甲型肝炎病毒)HBV(乙型肝炎病毒)乙型脑炎病毒、狂犬病病毒狂犬病病毒狂犬病病毒、灰质炎病毒、流行性出血热病毒
原代细胞
细胞系
细胞株
数小时–数天优异不致瘤二倍体高不增殖或有限
数月–无限期变异常不致瘤二倍体或非整倍体比较低通常有限
常为无限期有限致瘤常为非整倍体比较低经常无限
细胞坏死细胞凋亡
细胞形态变化HE染色吖啶橙染色DNA琼脂糖电泳电镜观察流式细胞仪检测
细胞肿胀，细胞质内出现颗粒，核膜破细胞皱缩，染色质凝聚，质膜小泡，凋亡裂，染色质消失小体均质红染无结构物质，核染色消失核染色质致密浓缩，核碎裂细胞质内黄绿色或橙色公荧光弱或无细胞质内可见致密浓染的黄绿色染色，或见黄绿色碎片弥散膜状条带梯状条带胞浆肿胀，细胞器被破坏，核膜消失，细胞质可见完整的细胞器，胞浆浓缩，染染色质分布於规律色质固缩，呈块状，有质膜包裹的碎片亚二倍体峰细胞量多少不等，前向光散亚二倍体峰，前向光散射低于正常，侧向