碧云天生物技术

-20℃保存,一年有效。酶溶液需注意避免反复冻融。INT溶液(10X)需避光保存。试剂盒解冻后可以短期4oC存放,2-3天内有效。注意事项:冷冻会使样品中部分乳酸脱氢酶失活,4℃可放置2-3天。建议样品准备好后尽量当天完成测定。在检测细胞培养液中的乳酸脱氢酶时,由于血清含有乳酸脱氢酶,使用含血清的培养液会增加背景读数,在检测时一定要设置没有细胞,但加入了相同体积培养液的对照孔,以用于消除背景。血清含量越高,背景值越高。如果对于实验无明显影响,建议使用灭活血清,这样血清中的乳酸脱氢酶会被很大程度上失活,大幅降低背景。如果对于实验无明显影响,实验时可以使用无血清培养液或血清浓度较低的培养液,这样能有效降低血清中乳酸脱氢酶的本底活性。细胞过度生长、密度过高、离心速度过大、培养箱内外温差过大,都会造成细胞释放乳酸脱氢酶增加。此外,不同的细胞乳酸脱氢酶的含量也存在一定差异。如果希望进行乳酸脱氢酶活性的绝对定量,用户需自备乳酸脱氢酶标准品。本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

附录1:可同时测定一已知浓度的LDH酶标准品对应的吸光度值,参考以下公式粗略计算出样品中LDH酶活力:待测样品中LDH活力单位(mU/ml)=(样品孔吸光度-背景空白对照孔吸光度)/(标准管吸光度-标准空白管吸光度)×标准品浓度(mU/ml);根据计算结果可以比较不同样品处理组间有无统计学差异等。

附录2:若需准确计算出LDH酶活性的绝对活性,可通过一系列LDH标准品及相应测得的吸光度值绘制标准曲线,通过标准曲线相应公式计算出样品中LDH的酶活性。各孔数值减去空白对照后,以检测的吸光度(OD490)为纵坐标,LDH酶活力(mU)为横坐标,绘制LDH标准曲线(如图2所示)。同时计算出该趋势线的公式。

A490nm=k×LDH酶活力单位(mU)+b,通过Excel等软件计算出趋势线的斜率k和截距b。根据上述公式计算样品中LDH活力。样品实际吸光度(OD490)=样品孔测得的吸光度-背景空白对照孔吸光度检测体系中LDH酶活力单位(mU)=(OD490-b)/k样品中LDH酶活力(mU/ml)=检测体系中LDH酶活力单位(mU)/检测样品体积

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