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2023.06.14浙江
【2】涂抹实验检验标准微生物涂抹实验
微生物检验设备表面涂抹试验手部
我公司之前参考标准的:GB15979-2002_一次性使用卫生用品卫生标准_2006429.pdf;GBt18204.1-2000公共场所空气微生物检验方法细菌总数测定.pdf
有关涂抹的问题：我想问下，涂抹物体表面做大肠的无菌瓶里是放50毫升的生理盐水吗？并且这50毫升是按原液计算的还是按负一倍算的？不知我表达的清楚否，意思就是我从这50毫升里取一毫升放到单料里，那么这一步的稀释倍数我是记做1呢还是负1呢？
顺便再问下如果做菌落，放到试管里的生理盐水是多少毫升？此时稀释倍数是？还有如果即做大肠又做菌落，能不能将三角瓶的生理盐水放多点，这样做大肠的和菌落的一起吸取，（因为我听我一同学说做大肠的放到含50毫升的三角瓶里，菌落的放到含10毫升生理盐水试管里）
2＃1.你在50ml里面取1ml接种，结果乘以50就是原菌落数。
2.样液可以一样，分别接种就可以了。
3.你全部放一起也够的。
菌落1ml*2+接种1ml=3ml。大肠10mL*3+接种1ml=31ml，全部加一起，50ml足够了。
3＃我这么问吧，你从50毫升里面取了10毫升放到做大肠的双料里，此时的稀释倍数是？
4＃送小学进修吧50/10=5
6）这样做稀释对吗？
我们是水饺生产厂家，要对清洁后的水饺机器进行涂抹微生物检验，我们用的是5乘5厘米的涂抹面积，换算成英寸就是四平方英寸，我们为了好计算就用四毫升的盐水稀释，之后取一毫升进行检验，大家帮我讨论一下这样取样是否合理，还是应该用九毫升的盐水稀释呢？
2＃应该用10毫升的盐水稀释。无论你的取样面积是多少，最后出来结果的时候除掉那个面积不就行了。
3＃我认为这样做可行：
1、将脱脂棉与10ml生理盐水放进小型锥形瓶中
2、灭菌，当然所有涉及微生物检测的都要灭菌
3、现场采样时，将酒精棉点燃，擦拭你要用其去瓶内脱脂棉的镊子，取出脱脂棉，在内壁将其内水分按出一部分，否则，滴至外面，结果不准确；在规格板内涂抹
4、快速放进生理盐水中（原瓶子中）
5、保证取样到完成检测在1个半小时内
6、结果：算出的总数除去那个面积，用平方厘米
涂抹用九管法测大肠：哪位大虾做车间的涂抹用九管法(乳糖胆盐)测大肠的指教下，涂抹100平厘米的设备表面，放入100ML盐水中，吸1ML放入第一套(3个)试管，稀释10倍后吸1ML到第二套(3个)试管…类推，这样做出来我读数是应该照表直接读吗单位呢？又该是什么？
4＃使用何种方法来测试大肠菌群，主要需要看看在相应面积上面的细菌数量。如果数量多，平板法就可以。如果数量不多，多管发酵法更合适。
5＃如果数量不多，建议使用平板法。如果数量少，第一套试管必须添加10mL稀释液。不然灵敏度不够。这样，你可以按照10、1、0.1的计算方法来报告结果。最后的单位肯定是CFU/cm2。
4)手部涂抹试验及标准值
车间人员设备涂抹菌落、霉菌标准.txt(2.79KB)
车间手部验证.doc(28.5KB)
3）车间涂抹
刚刚细看了《一次性使用卫生用品卫生标准》里面说做手部和桌面的涂抹要来回10次，我只做了2次，还有那个计算有点怪怪的！~~
2＃生产环境采样与测试方法
工人手表面采样
工人手：被检人五指并拢，用一浸湿生理盐水的棉签在右手指曲面，从指尖到指端来回涂擦10次，然后剪去手接触部分棉棒，将棉签放入含10毫升灭菌生理盐水的采样管内送检。
检验方法按照GB/T4789.2有关章节进行。
工器具及手：涂抹法
可参照GB15979-2002《一次性使用卫生用品卫生标准》
车间空气：空气落下菌
可参照GB/T18204.1-2000《公共场所空气微生物检验方法—细菌总数的测定》
欢迎加入食品检验行列！
生产环境卫生指标
装配与包装车间空气中细菌菌落总数应≤2500cfu/m3。
工作台表面细菌菌落总数≤20cfu/cm2。
工人手表面细菌菌落总数应≤300cfu/只手，并不得检出致病菌。
2＃车间手部验证.doc
一、空气采样及检验方法
1培养基：普通营养琼脂平板，按GB4789.28中3.7条配制
2采样（空气沉降法）
2.1布点：面积小于30平方米的车间，设一对角线，在线上取3点，即中心一点，两端在距墙1米处各取一点；面积大于30平方米的车间，设东、西、南、北、中5个点，其中东、西、南、北点均距墙1米。
2.2采样高度：与地面垂直高度80-150厘米。
2.3采样方法；用直径为9厘米的普通营养琼脂平板在采样点上暴露20分钟盖上送检培养。
3培养：于37℃培养24小时。
4检测频率：每周
空气质量标准：
生车间、熟车间、成品车间：低于100个
半成品库、成品库：低于10个
二、设备的采样与检验方法
根据生产过程所要求的重点卫生部位，实验室对其进行涂抹采样，进行细菌总数检验。
1采样方法
1.1涂抹法（适用于表面平坦的设备和工器具产品接触面）
取经过灭菌的铝片框（框内面积为50平方厘米）放在需检查的部位上，用无菌棉球蘸上无菌生理盐水擦拭铝片中间方框部分，擦完后立即将棉球投入盛有10毫升无菌生理盐水的试管中，此液每毫升代表5平方厘米。
1.2贴纸法（适用于表面不平坦的设备和工器具接处面）
将无菌规格纸（5×5厘米，纸质要薄而软）用无菌生理盐水泡湿后，于需测部分分别贴上两张，两张纸面积共50平方厘米，然后取下放入盛有10毫升无菌生理盐水的试管中，此液每毫升代表5平方厘米。
2检验方法
2.1细菌总数的检验
将上述样液充分振摇，根据卫生情况，相应地做10倍递增稀释，选择其中2-3个合适的稀释度作平皿倾注培养，培养基用普通营养琼脂，每个稀释度作2个平皿，每个平皿注入1毫升样液，于37℃培养24小时后计菌落数。
结果计算
表面细菌总数（cfu/cm2）=平皿上菌落的平均数×样液稀释倍数/30×2
2.2致病菌的检验
沙门氏菌，参照GB4789.4进行
金黄色葡球菌，参照GB7918.5进行
4.检验合格标准：细菌总数10－100个∕cm2，
5.关键点：细菌总数≤10个∕cm2
一般区域：细菌总数≤100个∕cm2
三、人员手表面细菌污染情况的检验
1.采样方法：用一支蘸有无菌生理盐水的棉拭子涂擦被检对象手的全部，反复两次，涂擦的时候棉拭子要相应地转动，擦完后，将手接触部分剪去，将棉拭子放入装有10毫升无菌生理盐水的试管内送检培养。
2.检验方法：同工器具表面细菌总数检验方法。
3.结果计算：每只手表面的细菌总数（cfu/只手）=平皿上菌落的平均数×样液稀释倍数
四、消毒液药效的微生物学鉴定法
1采样对象：正常使用的消毒液，和已知配制好备用的消毒液
2采样及检验方法
在无菌条件下，用无菌吸管吸取1毫升样液，加入9毫升稀释液中混匀，对于醇类与酚类消毒剂，稀释液用普通营养肉汤即可；对于含氯消毒剂、含碘消毒剂，需在肉汤中加入0.1%硫代硫酸钠，对洗必泰、季铵盐类消毒剂，需在肉汤中加入3%（W/V）土温80和0.3%卵磷脂；对醛类消毒剂，需在肉汤中加入0.3%甘氨酸；对于含有表面活性剂的各种复方消毒剂，需在肉汤中加入（W/V）土温80，以中和被检样液中的残效作用，
将注入了样液的稀释液充分摇匀，取1毫升注入平皿，随之倒入普通营养琼脂，待琼脂凝固后，翻转平皿，将平皿于37℃条件下培养24小时后计平板上生长的菌落数。
3结果分析
平板上有菌生长，表明被检样液中有残存活菌，若每个平板菌落数在10个以下，仍可用于消毒，若每个平板菌落数超过10个，说明每毫升被检样液含菌量已超过100个，即不宜在用于消毒。
大肠菌群的测定：
1用10ml灭菌吸管吸取10ml液体，沿管壁缓缓注入装有10ml双料乳糖胆盐发酵管内，接种3个试管；
2用1ml灭菌吸管吸取1ml液体，沿管壁缓缓注入装有10ml单料乳糖胆盐发酵管内，接种3个试管；
3用1ml灭菌吸管吸取1ml液体，沿管壁缓缓注入装有9ml生理盐水的试管内，混匀做成1：10的稀释液；
4用1ml灭菌吸管吸取1ml1：10的稀释液，沿管壁缓缓注入装有10ml单料乳糖胆盐发酵管内，接种3个试管；
5做好标记置于36±1℃温箱内培养24±2h。
该公式是一个经验公式.它的理论模式依据是:100CM2的面积上10MIN降落的菌落数,
等于1升空气中所含的细菌总数.系数50000基于上述假说和单位换算而来.
细菌总数(CFU/M3)=5/10T*100/A*1000*N=50000*N/AT
5/10T:实际放置了5MIN;
100/A:A单一培养皿面积;
1000:1M3=1000L啊,换算成m3
N:平均菌落数
GB15979-2002一次性使用卫生用品卫生标准
消毒环境卫生用品生产环工人手表面细菌菌落总数应≤300cfu/只手，并不得检出致病菌。
消毒环境卫生用品生产环空气：菌落≤2500cfu/m3.
生产环境采样与测试方法
7＃探物体表面采样及检查方法
选择消毒处理后4h内进行采样。
2采样面积
被采表面<100cm2，取全部表面；被采表面≥100cm2,取100cm2。
3采样方法
用5×5cm2的标准灭菌规格板；放在被检物体表面，用浸有无菌生理盐水平样液的棉拭子1支，在规格板内横竖往返各涂抹5次；并随之转动棉拭子。连续采样4个规格板面积；剪去手接触部分，将棉拭子放入装10ml采样液的试管中送检。门把手等小型物体则采用棉拭子直接涂抹物体的方法采样。
物体表面细菌菌落总数（cfu/cm2）=平皿上菌落的平均数×采样液稀释倍数/采样面积(cm2）
E2工作台表面与工人手表面采样与浏试方
8＃
1.空气落菌:杀菌的培养基加热溶化化冷却至45化时，在无菌操作环境要求下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。待培养基凝固后，将培养基平皿倒置于36±1℃恒温培养箱中培养48h，若培养基平皿上确实无菌落生长，即可供采样用。经过确认后准备好的培养基平皿需要在2℃---8℃的环境中存放。将已经制备好的培养皿按照(四个角各一个和中间一个)进行放置，打开培养皿盖，使培养基表面暴露在空气中30min（清洁要求低于10万级水平，空气沉降菌检测只需要暴露5min），再将培养皿盖盖上后倒置保存。
2.食品接触面的采样:设备食品接触表面（包括手套、工作服、空包）：将灭菌之取样钢板（钢板，中空成5cm×5cm正方形）固定于待测设备与食品接触表面，使用用无菌盐水润湿后的无菌棉签（如果待测表面是湿润的则不需要润湿棉签）在规格内往返涂抹10次后，将检测人手接触部分棉棒剪去后，将棉签头置于50ml无菌盐水中。共取两次为50cm2,此液为原液.
3.手部菌落的采样:生理盐水以10毫升分装入试管中连同包好的棉签用高压灭菌器灭菌备用。被检人五指并拢，用一浸湿生理盐水的灭菌棉签在右手指曲面，从指尖到指端来回擦拭10次，然后剪去检测人手接触部分棉棒，将带菌棉签放入有10毫升生理盐水的试管中，充分振荡后备用,此液为10-1
/bbs.foodmate.net/thread-657277-1-1.html
3）为什么有的工厂涂抹大肠菌群是（CFU/100cm2）<30/bbs.foodmate.net/thread-519814-1-1.html
3＃你先用棉签涂抹你要检测的设备或目标，面积为100cm2(10*10cm)。再用涂抹后的棉签做大肠菌群检测。如阴性就可以报大肠菌群是（CFU/100cm2）<30。（这<30是查表所得的。你们应该是用2003版的方法）
5＃很明显。单位是CFU的时候用平板法。MPN才是试管法。楼上的2位给你说的有误。做一个10乘10CM的框，在框内进行涂抹。面积就是100CM^2，然后对涂抹棒用平板法做，就OK了.