前面我们说完了取材和脱水的注意事项,接下来我们说一说包埋。
脱水结束后,我们把组织从脱水机中取出脱水完毕的组织并及时转移至包埋机的热台内进行包埋。
那什么是包埋呢?包埋是指利用包埋剂包裹脱水完成的组织并固定于包埋盒上,方便后续进行切片的一个过程。
图1:组织包埋步骤操作流程图
1、概念
包埋:指用包埋剂支撑组织的过程。
2、种类
石蜡、火棉胶、树脂、OCT、胶水,其中最常用的包埋剂是石蜡和OCT。
3、目的
浸蜡是组织经过脱水、透明后在熔化的石蜡内浸没的过程称浸蜡。包埋是使石蜡变硬并将组织包埋进去以利于切片和观察的过程。目的是去除组织中的透明剂而代之以石蜡,并浸入组织内部,把软组织变为适当硬度的蜡块,以便切成薄片。
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标准化操作
图2:组织包埋分布示意图
样本必需按照正确的方向放置。高质量的取材方式,可以确保样本表面平整。技术员必需经过良好的培训才能进行包埋,并且随时可根据样本情况进行样本描述;
如果样本方向错误,就要重新进行包埋,这有可能导致组织的丢失。样本包埋得不好的话,可能会需要修片多一点,以获得更全的切面。
图3:内窥镜活检组织放置的方向不对,
仅显示了黏膜的表面
针对每一个样本选择大小合适的模具;
一种模具用于所有的样本。有可能样本已经碰到模具的边缘了。
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包埋过程中轻轻地夹取样本;
为了使样本平贴在模具中,样本被强力挤压,这会导致有些组织断裂。
图5:脾脏的H&E染色切片:包埋过程中为了使样本平贴在模具中,强力挤压,导致组织中间断裂
夹取组织之前,热钳加热到蜡刚刚融化的温度;
热钳加热温度超过蜡的熔点,这可能会引起局部过热或者靠近热钳的地方变形。
图6:肝脏的H&E染色切片:局部破坏(组织基本没法辨识),这是由于包埋过程中组织局部过热引起。
定期检查热盘和蜡缸的温度;
从来不检查热盘的温度,导致样本会因局部过热而被破坏。
图7:淋巴结由于热盘过热而被破坏,图中可以看到细胞萎缩、核固缩以及细胞开裂。可能的原因是展片时温度过热或者热盘干燥时没有充分排水。
·模具加蜡适量,不能过多;
·模具加蜡过多,需要刮掉包埋盒边缘的以及底部的石蜡,再进行切片。蜡过多的蜡块可能在切片机上不稳定,由此导致切片过程中对组织的破坏。
图8:包埋过程中包埋模具内加蜡过多的蜡块。
包埋中注意事项
包埋中:一次性只取和开一个盒
要点:
①包埋台上永远只出现一个待包蜡块
②开盒动作要轻
③开盒时注意是否有组织弹出
意义:
①避免因开多个蜡块盒时造成组织弹出,引发相互混
淆的风险
②便于随时清扫包埋台,降低组织间的污染风险
③降低因为来不及包埋而造成组织块因温度下降引起
的凝结,从而引起切片质量风险
④降低在核对组织块数量时,因判断病理号而无形中
包埋中:在热台上摆组织
①根据工作台上待包组织,识别出组织类型
②在热台上做好组织摆放规划、定点定位定向
③平稳移动组织到冷台冷却
①降低因包埋速度过慢,造成组织高低不平,
切片时造成过度修切、损毁组织、组织间出现
裂隙
②蜡液凝固时,组织内有气泡,易造成切片空洞
③组织与蜡液溶合不充分,易切崩,造成组织损
坏,后续工作暂停,返工重包
包埋时组织固定不稳,加蜡液冲散组织(图①);组织包埋时散乱(图②);组织面朝向不一(图③);组织摆放随意(图④)。
包埋时:聚拢
囊肿组织块包埋时聚拢、并排、居中包埋(图⑤);皮肤组织块包埋时皮肤面朝蜡块的病理号方向(图⑥);子宫内膜及肌层组织块包埋时纵列、并排、居中(图⑦);宫颈组织块包埋时纵列、并排、居中(图⑧)。