启动制备抗体之前,我们需要搞清楚以下七个问题:
1、这个抗体用来做什么实验(ELISA、IHC、WesternBlot、IF或者IP等)(功能性要求)
2、是否已有商品化的抗体可以满足以上功能需求(便利性要求)
4、需要多抗还是单抗(品质性要求);
5、已具备的抗原信息或材料(抗原信息或材料:CDS序列,重组质粒,重组蛋白、多肽等)(可能性要求);
6、是否可建立抗体质检方法(标准的阳性标本及实施抗体实验验证的标准方法)(可评价要求)
7、是否具备抗体生产平台及经验(可行性要求)
第2个要求-便利性要求:
第3个要求-抗体种属要求:
第4个要求-品质性要求:
第5个要求-可能性要求:
第6个要求-可评价要求:
最后一个要求-可行性要求:
制备抗体前必须要拥有制备流程所必须的平台设备以及专业人员,如果实验室以前没有涉猎这块并且以后也不打算建设此类平台,本着“专业人做专业事最节约成本”的原则,抗体制备的整个流程或者部分环节还是委托给专业公司。
抗体制备方案的核心是抗原制备,好的抗原是制备优质抗体的前提,作为抗原需要具备以下几个基本属性:
多肽作为抗原主要难点在于多肽序列的设计(抗原表位的选取)。专业化的多肽设计团队基于生物信息学的数据库,采用先进的分子对接算法,借助高性能服务器,可以实现百万级多肽的筛选,筛选周期仅需一周。
金属离子的免疫抗原一般是借助于螯合剂来实现的,首先将螯合剂偶联到蛋白载体上,比如BSA和OVA,然后再将离子螯合上去;吉林大学的郝亚明依靠该技术成功制备出镉离子(Cd2+)单克隆抗体。
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