为避免因序列差异造成对后期实验结果的影响，需要对客户提供的原始克隆pGBKT7-GRX进行测序和比对分析。
1.1诱饵验证结果
诱饵克隆pGBKT7-GRX序列正确，可继续进行后续实验。
2、自激活和毒性检测及互作验证
2.1酵母转化方法
（1）将Y2HGold酵母菌种在YPDA平板上划线，30°C培养箱倒置培养3天左右，直到克隆大小为2-3mm
（2）挑取一个酵母克隆于3mL的YPDA培养基中（15mL灭菌的离心管）；在30°C摇床振荡培养8h；
（3）吸取5μL至50mLYPDA中（250mL三角瓶），在30°C摇床230-250rpm振荡培养16-20h，直至OD600=0.15-0.3；
（4）室温700g离心5min以收集菌体；
（5）倒去上清并用100mLYPDA重悬酵母；在30°C摇床230-250rpm振荡培养3–5h，至OD600=0.4-0.5；
（6）室温700g离心5min以收集菌体，倒去上清并用60mL无菌去离子水重悬酵母；
（7）室温700g离心5min以收集菌体，倒去上清并用3mL1.1xTE/LiAc溶液重悬酵母；
（8）将重悬液分装为3个1.5mL的离心管；高速离心15s；
（9）倒去上清并将酵母重悬于600μL1.1xTE/LiAc溶液；
（10）按照下表构建反应：
（11）每管反应中加入5μL预变性的CarrierDNA、300μL1xPEG/LiAc溶液，混匀；
（12）每管反应中加入50μL重悬酵母感受态细胞，缓慢混匀；
（13）30°C水浴30min，每10min混匀一次；
（14）每管加入20μLDMSO，混匀；
（15）42°C水浴热激15min，每5min上下颠倒混匀一次；
（16）700g离心5min；
（17）弃掉上清，用0.2mLYPDPlus液体培养基重新悬浮；注：YPDPlus是特别配制的增强转化；这个步骤不使用YPD培养基。
（19）高速离心15s；
（20）弃掉上清，用100μL0.9%NaCl溶液重新悬浮细胞。取10μL重悬液，稀释100x涂平板。
2.2诱饵自激活验证与毒性检测结
（1）阳性对照
图1阳性对照
（2）阴性对照
图2阴性对照
（3）自激活检测结果
图3自激活检测结果
（4）毒性检测
图4SD/-Trp
2.2.1毒性检测与自激活检测结果分析
（1）将诱饵质粒和猎物空载共转化Y2HGold感受态，涂布DDO平板能生长说明重组诱饵质粒成功转入宿主菌且对宿主菌无毒性；
（2）涂布TDO有轻微生长，说明诱饵蛋白有轻微自激活；
（3）涂布QDO不能生长，说明诱饵不能激活ADE2的表达，可用QDOXA进行后续实验；
（4）质粒pGBKT7-GRX转入Y2HGold后，菌落生长情况同pGBKT7空载转化酵母后的一致，表明pGBKT7-GRX质粒对酵母细胞均无毒性。
2.3互作验证结果
图5互作验证结果
2.3.1互作验证结果分析：
（1）将诱饵质粒和猎物质粒共转化Y2HGold感受态，涂布DDO平板能生长说明重组诱饵质粒成功转入宿主菌且对宿主菌无毒性；
（2）涂布TDO和QDO均能生长，说明诱饵蛋白和猎物蛋白能激活HIS3、ADE2的表达，所以诱饵蛋白和猎物蛋白有相互作用。
3、点板验证
挑取验证平板上面的单克隆稀释点板至DDO和QDOXA，点板结果如下：
图6点板验证图片
3.1互作验证结果分析：
（1）点板验证结果与前面验证一致，所有点板组合在DDO上生长正常，阳性对照在QDOXA生长且变蓝，说明阳性对照正常。阴性对照在QDOXA不生长，说明阴性对照正常。
（2）实验组pGBKT7-GRX+pGADT7-MYB、pGADT7-SKIP、pGADT7-NAC、pGADT7-Drought、pGADT7-Bzip75、pGADT7-Bzip68、pGADT7-PC在QDOXA上生长，说明能够激活下游报告基因。
综上所述：诱饵蛋白pGBKT7-GRX与猎物pGADT7-BAM3pGADT7-MYB、pGADT7-SKIP、pGADT7-NAC、pGADT7-Drought、pGADT7-Bzip75、pGADT7-Bzip68、pGADT7-PC之间有相互作用。