伏马毒素(FumonisinFB)是一种霉菌毒素,是由串珠镰刀菌产生的代谢产物。主要污染粮食及其制品,并对某些家畜产生急性毒性及潜在的致癌性,已成为继黄曲霉毒素之后的又一研究热点。目前我国现行标准《食品安全国家标准食品中真菌毒素限量》(GB2761-2017)尚未涉及伏马毒素的限量,不过在《饲料卫生标准》(GB13078—2017)规定了部分饲料原料和饲料产品中的FB1和FB2总量的限量标准。其中饲料原料玉米及其加工产品、玉米酒糟类产品、玉米青贮饲料和玉米秸秆中伏马毒素的限量为60mg/kg,其他饲料产品中伏马毒素的限量在5~50mg/kg。
关于检测方法
GB5009.240-2023食品安全国家标准食品中伏马菌素的测定(将于2024年3月实施)
LS/T6130-2017粮油检验粮食中伏马毒素B1、B2的测定超高效液相色谱法
本方案采用IAC-107伏马毒素免疫亲和柱
IAC-107伏马毒素免疫亲和柱能够特异性的纯化与浓缩样品中的伏马毒素B1、B2、B3.伏马毒素免疫亲和柱广泛地应用于粮食、食品、饲料、等样品的提取,该方法速度快、操作简单、准确性高,对准确灵敏的测定样品中的伏马毒素起到十分重要的作用。
操作流程
一、样品前处理
1.样品提取及稀释
1.1称取25.0g(精确到0.1g)过筛样品于均质杯中,加入乙腈水(5+5)100mL,以均质器高速搅拌提取2min或振荡提取20min,定量滤纸过滤。
1.2移取2.0mI滤液加入48mL0.1%的吐温/PBS稀释混匀。
2.样品净化
2.1将免疫亲和柱连接于玻璃注射器下准确移取50.0mL上述样品溶液注入玻璃注射器中。
2.2将空气压力泵与玻璃注射器连接,调节压力使溶液以约1滴/s的流速缓慢通过免疫亲和柱,直至空气进入亲和柱中。
2.3用10mL水淋洗亲和柱流速为1滴/s~2滴/s.直至空气进入亲和柱中,弃去全部流出液,抽干小柱。
2.4准确加入3mL甲醇-乙酸溶液(98+2洗脱流速约为1滴/s,收集洗脱液。50°C下氮气浓缩吹干后,用乙腈水(5+5)定容至1mL,待检测。
二、液相条件及衍生方法
柱前衍生法
色谱柱:Cloversil-C184.6*150mm(5um)或4.6*250mm(5um)
流动相:甲醇:0.1MNaH2PO4(77:23体积比)用磷酸将PH值调到3.3
检测器:激发波长335nm发射波长440nm
进样体积:20uL
衍生方法:取100uL标准溶液或样品净化液于进样瓶中加入100uLOPA衍生试剂A涡旋混合30s,在2分钟内进样分析。
柱后衍生法
流动相:甲醇/(65+35)
检测器:激发波长335nm发射波长440mm
衍生泵流速:0.4mL/min
衍生温度:50℃
衍生泵流动相:OPA行生试剂B
HP-L10柱后衍生系统
HP-L20柱后衍生系统
实验结果
1、柱效回收:
2、样品添加回收:取玉米样品,伏马B1B2B3混标添加各1000ppb。