表1患者和对照组的人口统计学、临床和血清学特征
2.2方法
2.3分析评估
·精密度研究
·统计分析
3.结果
3.1精密度测试
表2根据CLSIEP15-A评价AQP4抗体ELISA检测的精密度
3.2AQP4抗体检测
由ROC曲线确定临界值为2.1U/mL，ELISA检测AQP4抗体在NMO患者的灵敏度为83.3%(95%CI62.6%~95.2%)，特异性为100%(95%CI87.1%-100%)，以及非常高的阳性似然比(∞)和阴性似然比(0.17)(表3)。NMO患者的计算出的曲线下面积(AUC)的值为0.895(95%CI0.777-0.963)(图2)。
图2aNMO患者AQP4自身抗体的(ROC)曲线分析。曲线下面积(AUC)是0.895。BLETM患者AQP4自身抗体检测的ROC曲线分析。AUC是0.625。连续线为ELISA法；虚线表示95%的置信区间
表3NMO和LETM患者的诊断灵敏度、特异性和似然比(阳性似然比、阴性似然比)
在相同的临界值下，LETM患者的灵敏度和特异性分别为25%(95%CI9.8%-46.7%)和100%(95%CI87.1%-100%)，阳性似然比是∞，阴性似然比是0.75（表3）。
NMO患者与LETM患者AQP4抗体比例的差异有统计学意义(分别为83.3%和25%)(Fisherexact检验，p=0.0001)。
13例ON患者组均为AQP4抗体阴性，3例脊髓炎患者组除1例外其他2例为AQP4抗体阴性。所有对照均为AQP4抗体阴性。
间接免疫荧光法（IIF）与ELISA方法的结果*一致(Cohen’sKappa=1.00)。
4.讨论
检测AQP4抗体的重要性不仅因为NMO与MS尽早和准确的鉴别诊断，并且还因为两者治疗策略的差异。诸如β-干扰素和醋酸格拉替雷(Copaxone)的免疫调节药物被认为是多发性硬化症的第一选择，免疫抑制药物特别是B细胞靶向治疗被认为是治疗NMO的有利因素。
多种AQP4抗体的检测方法已经被研发。其中基于AQP4-M1异构体的血清学检测是首先被使用的方法。直到近些年，随着OAPs被证明为是NMO-IgG主要的靶点，AQP4-M23才被越来越广泛地用作靶点抗原。
Kim等使用内部ELISA，同时检测了两种异构体，在确诊或高危NMO患者的检出率方面，没有发现异构体之间的任何差异，他们选择使用M23异构体，因为它提高了信噪比。同样的，Waters等通过商用CBA，在比较人类M1或M23异构体时，没有发现灵敏度的差异，但使用M23的信号增加。Mader使用活的人胚胎肾(HEK)细胞，发现M23异构体的灵敏度更高。这些作者还观察到两种方法中不同的染色模式。与M23异构体相比，与M1异构体结合的抗体显示出更小的染色斑点，这支持了之前的数据，M23异构体在HEK细胞中形成OAP。
此外，使用NMO患者的血清和重组AQP4特异性单克隆抗体，Crane等发现，由于OAP结构的原因，M23比M1在AQP4-IgG单克隆抗体或其Fab片段上显示出具有持续的更高的亲和力，这再次表明AQP4异构体的选择以及OAP的结构可以直接影响检测灵敏度。
本研究的目的是评价一种新的商用M23抗原ELISA检测AQP4抗体的性能。结果与间接免疫荧光法商用IIF产品的结果进行比较。虽然没有直接与使用M1-AQP4的ELISA进行比较，但我们的数据显示，灵敏度(83.3%)高于之前使用M1异构体的研究报告，与CBA获得的平均灵敏度相似(76.7%；范围55.6-96.7%)，显著高于其他方法(范围48.5-62.3%)。
最后，ELISA检测结果与目前检测AQP4抗体的参考方法（间接免疫荧光法IIF）检测结果一致(100%一致)。
我们的研究也旨在评价这种新的AQP4抗体ELISA分析方法的准确性。它的重要性在于，因为一些方法在不同的实验室应用时产生了不一致的结果，同一样品在不同的检测方法中检测出不一致的结果。然而，结果可重复的AQP4抗体检测对于大型多中心研究来说至关重要，这些研究旨在更好地确定NMO患者的流行病学、临床和病理特征以及他们对治疗的反应。
我们发现，使用两种不同抗体浓度检测批内、不同日间和实验室内以CV表示的精密度变异系数低，在对低浓度和高浓度AQP4抗体的阳性对照上测量的总重复性甚至比相同浓度水平下制造商所声称的更好。
该检测具有良好的分析精密度和准确度，以及在全自动系统上体现的相对易用和快速响应的的特性，证明该检测对于适用于日常检测，并可能适合用于AQP4抗体的长期监测。
本研究的进步意义体现在两个重要方面。一方面是可以使各家实验室获得简单易用的AQP4抗体定量方法，另一方面是这款新的ELISA方法在特异性与灵敏度上的良好表现，其性能与当下的金标准CBA方法一致。
本研究初次评价了一种新型的商用ELISA检测AQP4抗体的方法，是一种有效的CBA替代方法。我们相信，我们的发现可以为辅助AQP4抗体检测奠定基础，从而促进对NMOSD病人更早、更准确的诊断。
原文标题：
AnewM23-basedELISAassayforanti-aquaporin4autoantibodies:diagnosticaccuracyandclinicalcorrelation