二、一些主要血小板免疫学检测技术的原理简介1、血小板抗原单克隆抗体特异性免疫固定检测技术(MonoclonalAntibody-specificImmobilizationofPlateletAntigen,MAIPA)MAIPA是血小板抗体检测使用最广泛的方法,这个试验需要鼠抗人的单克隆抗体来识别感兴趣的靶抗原,且不与被测的人抗体竞争结合。临床上有重要意义的血小板反应性抗体特异性取决于血小板GPIIb/IIIa,Ib/IX,Ia/IIa,IV(CD36)和HLA-I类分子等。MAIPA方法中血小板谱细胞既与病人血清又与识别血小板膜糖蛋白的单克隆抗体反应。孵育后,洗涤并用非离子清洁剂裂解血小板。离心去除残留碎片后,将裂解液加入先前包被好羊抗鼠IgG的微孔板。单克隆抗体与其结合的血小板膜糖蛋白及人血小板抗体(三聚体)被捕获。经过洗涤步骤后,加入酶标的羊抗人免疫球蛋白检测之前捕获的人抗体。
MAIPA法检测HPA抗体原理图。洗涤过的完整的血小板与人血清孵育(以HPA-1a抗体为例),单克隆抗体与与相应糖蛋白结合(以GPIIb/IIIa为例)。裂解血小板,将上清加入先前包被抗鼠的IgG,用过氧化物酶标记的抗人IgG检测结合在糖蛋白上的人抗体,用合适的显色剂显色。
2、ELISA改良的抗原捕获试验(ELISAModifiedAntigenCapture,MACE)MACE与MAIPA主要区别于血小板与血清反应后就洗涤,裂解。含抗体及血小板膜糖蛋白的免疫复合物被先前固定特异的血小板膜糖蛋白单克隆抗体捕获。经洗涤后,用适当的酶标二抗检测结合的人抗体
MACE方法原理图。血小板先与血清反应,用清洁剂裂解;结合相应抗体的血小板膜糖蛋白(如GPIIb/IIIa)被固定在微孔中的特异性单克隆抗体结合;用适当的酶标二抗检测结合的人抗体。