检测报告的签发学习目标1、掌握HIV、HBV、HCV核酸检测的原理、实验有效性的判定、结论的判断。2、知道反应性和非反应性标本保存的方法病原学标志物的核酸检测原理PCR扩增检测采用TaqMan荧光探针标定技术。人类免疫缺陷病毒、丙型肝炎病毒、乙型肝炎病毒核酸扩增分别采用不同荧光染料标记的探针，故可对提取的标本和内对照模板同时进行HBV（DNA）、HCV（RNA）、HIV1（RNA）检测。在反转录酶的作用下HCVRNA/HIV1RNA/内对照RNA反转录成cDNA，再与HBVDNA/内对照DNA一同作为模板在TaqDNA聚合酶的作用下扩增病毒核酸的保守区域和内对照特定区域。TaqDNA聚合酶5’—3’外切酶活性切割反应系统中带荧光标记的TaqMan探针产生荧光信号，随着PCR反应的进行，荧光信号不断积累。实时荧光定量PCR仪通过检测达到和超过荧光阈值的信号给出样品的阴阳性结果。病原学标志物的核酸检测样本EDTA-K2真空采血管留取血液样本器材与试剂荧光定量PCR扩增仪、HIV、HBsAg、HCV病毒（DNA）核酸扩增荧光检测试剂盒等。病原学标志物的核酸检测分析项目内对照HBVDNAHCVRNAHIV-1RNA备注检测荧光HEXTAMRAFAMROXCY5/阴性对照++---否则重测阳性对照//+++否则重测
阳性对照、阴性对照、内对照结果判定规则病原学标志物的核酸检测分析项目内对照HBVDNAHCVRNAHIV-1RNA结果判定检测荧光HEXTAMRAFAMROXCY5检测样本++---HBVDNA/HCVRNA/HIV-1RNA阴性//+//HBVDNA阳性///+/HCVRNA阳性////+HIV-1RNA阳性-----所有结果重新测定-/-//HBVDNA结果重新测定/-/--HCVRNA或HIV-1结果重新测定（1.”/”表示不考虑；2.FAM/ROX/CY5荧光层“-”表示Ct>45orNoCt;“+”表示Ct≤45；3.HEX/TAMRA荧光层“-”表示Ct>40orNoCt;“+”表示Ct≤40）检测样本结果判定规则
采用双抗原夹心法和双抗体夹心法酶联免疫吸附试验原理，在微孔条上预包被重组HIV抗原和抗P24单抗，配以生物素抗体、酶标记抗原、酶标记亲和素及TMB显色剂等其它试剂，检测人血清或血浆中的HIV-1型和（或）HIV-2型抗体和HIVP24抗原。人类免疫缺陷病毒抗原/抗体检测样本EDTA-K2真空采血管留取血液样本器材与试剂手工加样仪、全自动加样及酶免处理系统、人类免疫缺陷病毒抗原抗体诊断试剂盒（酶联免疫法）等人类免疫缺陷病毒抗原/抗体检测操作试剂的平衡检查试剂盒配制洗液检查微孔反应板加样检查加样效果检测人类免疫缺陷病毒抗原/抗体检测结果判断两种试剂结果无反应性阴性一种或两种可疑或反应性单试剂待查单试剂双孔复试双试剂待查双试剂单孔复试一孔或两孔为可疑或反应性两孔均为无反应性任一种试剂为可疑或反应性两种试剂均为无反应性HIV阳性HIV阳性HIV阴性HIV阴性
人类免疫缺陷病毒抗原/抗体检测HIV初筛阳性样本的送检疫情上报人员填写HIV初筛阳性送检单取阳性血清于专用试管、标识填写HIV初筛阳性样本送检记录样品放入专用套桶并放入专用保温箱送确诊实验室人类免疫缺陷病毒抗原/抗体检测1．从冰箱中取出的试剂盒应至少在室温平衡30min以上。2．每次实验前试剂最多可添加试剂槽的3／4的量，添加时应小心，防止试剂砰溅导致试剂污染。3．整个实验过程中应严格遵守仪器和项目操作规程进行操作，不得擅自离岗。【质量控制】乙肝表面抗原检测原理应用双抗体夹心酶联免疫吸附实验原理。在微孔板预包被纯化乙肝表面抗体（抗-HBs），加入待检样本，同时加入酶标记乙肝表面抗体（HBsAb-HRP）进行温育，样本中存在的乙肝表面抗原（HBsAg）与包被抗体形成“包被抗体-抗原-酶标抗体”复合物。洗板后加入显色剂，复合物上连接的HRP催化显色剂反应，生成蓝色产物，终止反应后，变为黄色。乙肝表面抗原检测样本EDTA-K2真空采血管留取血液样本手工加样仪、全自动加样及酶免处理系统、人类乙肝表面抗原诊断试剂盒（酶联免疫法）等器材与试剂乙肝表面抗原检测
同人类免疫缺陷病毒抗原/抗体检测操作同人类免疫缺陷病毒抗原/抗体检测结果判断同人类免疫缺陷病毒抗原/抗体检测质量控制very丙型肝炎病毒抗体检测原理应用间接酶联免疫吸附实验原理，在微孔板预包被HCV抗原，加入稀释液及待检样品进行温育，样品中存在的HCV抗体与包被抗原形成“包被抗原-抗体”复合物，洗板去除不与包被抗原结合的物质；加入酶标试剂，进行第二次温育，酶标二抗与“包被抗原-抗体”复合物结合，形成“包被抗原-抗体-酶标二抗”复合物；再次洗板后加入显色剂，复合物上连接的HRP催化显色剂反应，生成蓝色产物，终止反应后，变为黄色。丙型肝炎病毒抗体检测样本EDTA-K2真空采血管留取血液样本手工加样仪、全自动加样及酶免处理系统、丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒（酶联免疫法）等器材与试剂
同人类免疫缺陷病毒抗原/抗体检测操作同人类免疫缺陷病毒抗原/抗体检测结果判断同人类免疫缺陷病毒抗原/抗体检测质量控制very丙型肝炎病毒抗体检测梅毒螺旋体抗体检测原理采用双抗原夹心ELISA方法定性检测血