干货:细胞迁移/侵袭实验,超全解析!

细胞迁移(cellmigration)又称为细胞爬行、细胞移动或细胞运动,是指细胞在接收到迁移信号或感受到某些物质的梯度后而产生的移动。细胞迁移为细胞头部伪足的延伸、新的黏附建立、细胞体尾部收缩在时空上的交替过程。细胞迁移是正常细胞的基本功能之一,是机体正常生长发育的生理过程,也是活细胞普遍存在的一种运动形式。胚胎发育、血管生成、伤口愈合、免疫反应、炎症反应、动脉粥样硬化、癌症转移等过程中都涉及细胞迁移。

细胞侵袭(cellinvasion)与细胞迁移是比较相似的,但是“侵袭”需要细胞穿过胞外基质层(ECM)或基底膜基质层(BME),这个过程是细胞先酶解去除ECM/BME的阻碍,然后在趋化因子浓度梯度驱使下完成从一处到另一处的移动。细胞迁移和侵袭这两种行为既有联系又有区别——迁移是在没有阻力的情况下的细胞移动,侵袭是需要裂解“阻力”后才能实现移动能力。总的来说,细胞侵袭是一种特殊的细胞迁移,侵袭细胞具有迁移能力,但不是所有的迁移细胞都具有侵袭性。

二、实验原理

1、细胞划痕

2、细胞侵袭

细胞迁移与侵袭实验将Transwell小室放入培养板中,小室内称上室,培养板内称下室,上室内盛装上层培养液,下室内盛装下层培养液,上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。将细胞种在上室内,由于聚碳酸酯膜有通透性,下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞,从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜,就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。

三、实验流程

实验流程如下:

(1)先用marker笔在6孔板背后,直尺比着,均匀得划横线,大约每隔0.5~1cm一道,横穿过孔。每孔至少穿过5条线。

(2)在孔中加入计数好的细胞,具体数量因细胞不同而定(过夜能铺满即可)。

(3)第二天用枪头比着直尺,尽量垂至于背后的横线划痕,枪头要垂直,不能倾斜。

(4)用PBS洗细胞3次,去处划下的细胞,加入无血清培养基。

(5)放入37度5%二氧化碳培养箱,培养0,6,12,24小时后取样,拍照。

注意:所有能灭菌的器械都要灭菌,直尺和marker笔在操作前紫外照射30min(超净台内)。

2、Transwell法

(1)换无血清或低血清培养基培养细胞,排除血清的影响。

(2)铺下室培养基:下室铺培养基(液体需刚刚好);

制备细胞悬液:使用胰酶消化细胞,制备细胞悬液;

铺上室细胞:将上层小室放入下层小室,将细胞铺在上层小室中。

(4)染色:先使用固定液固定细胞(防止细胞形态发生改变),然后使用结晶紫进行染色。

(5)拍摄及数据分析。

四、样品要求

1、待测样品要求

液体类样本:按照单次检测需要的3-5倍的量寄送;

粉末类样本:按照单次检测需要的3-5倍的量寄送,可溶性粉末需注明溶剂,不可溶样本注明样本处理方法寄灭菌方法;

块体类样本:样本寄实验室后,实验室根据方法进行处理(三种处理方式可选择)

2、提供具体实验方案与要求(涉及到的细胞、耗材试剂盒本实验室均可有偿提供)。

五、结果展示

使用光学显微镜进行白光拍摄,一般提供3-6个视野,可选择不同倍数,需要了解详细的结果形式,请联系e测试工作人员。

四、常见问题

1、如何选择细胞划痕法或Transwell法?

细胞划痕:适用贴壁细胞的创伤愈合。

Transwell法:构建细胞共培养体系;趋化性实验;肿瘤迁移/侵袭实验。

2、细胞划痕注意事项有哪些?

①铺板时一般选择6孔板,因为6孔板大小适中,可保证有相当距离的平直划痕,便于观察、误差也很小。

②实验时注意细胞生长状况,应当选择适当的细胞接种浓度。

③减少细胞增殖对实验结果的影响,应选择加入无血清或血清浓度低的培养基进行细胞培养。

3、Transwell细胞迁移检测注意事项有那些?

①选择实验细胞时需保证细胞状态良好。

②放入小室时,小心不要产生气泡。

③细胞用结晶紫固定时,用棉签擦时要控制力度,不要戳破底部膜,更不要擦去已穿膜的细胞。

4、Transwell细胞侵袭检测注意事项有那些?

将冻融后的Matrigel分装在多个小管,迅速冷冻并保存,避免多次冻融。所有用品在使用前需置于冰浴,必须使用预冷的移液管、吸头及小管操作Matrigel。

THE END
1.Transwell实验2. 工作流程 3. 提供样本要求 细胞以及相关试剂(均可委托本公司购买) 4. 客户需要提供详细的细胞处理信息 5. 公司交付报告 完整的实验报告(包含数据分析)、剩余试剂及图片 服务咨询 服务项目:* 咨询内容:* 您的称呼:* 联系电话:* 电子信箱:* 验证码:*...http://vigenbio.com/kyfwview.asp?id=1797
2.8.3.2transwell实验结果分析.pdf8.3.2 Transwell实验结果分析与注意事项 Matrigel是从小鼠肉瘤中提取的基质成分,含有各种细胞外基质蛋白,铺 在多孔膜上,能在DMEM培养基中重建形成类似天然基质膜结构,细胞不能自由 穿过,必须分泌水解酶,通过变形运动才能穿过铺有martrigel的滤膜,与体内 情况较为相似。 数据处理: 细胞穿过膜孔会黏附在膜的下面,如图吊...https://max.book118.com/html/2021/1130/8131015036004047.shtm
3.急切求助,transwell实验结果怎样分析生物科学请各位帮忙,请教现在transwell实验已经拍好照片,但是不知道该怎样分析结果,急切求助,万分感谢 ...https://muchong.com/t-8001559-1-pid-1
4.Transwell细胞培养设计Transwell 2-⑴ Transwell 2-⑵ 3.质谱分析蛋白ⅰ和蛋白ⅱ的差别,初步分析共培养条件下分泌组是否影响。 4.置换细胞A ,细胞B培养的上下层条件,相同方法培养细胞,打质谱分析蛋白,分析结果是否与实验一有差别,进一步分析原因。 总结:该方法尽可能的同一了共培养和单独培养的差异,即排除了其他影响条件,只对比在共培养...http://www.qlber.cn/jishu/198.html
5.类器官代谢分析仪应用案例:微生理监测Transwell上的三维小肠模型...应用案例(类器官代谢分析仪-IMOLA):微生理系统监测Transwell上的三维小肠模型 Tissue-on-a-Chip: Microphysiometry With Human 3D Models on Transwell Inserts 翻译整理:北京佰司特科技有限责任公司 微生理测量已被证明是用于监测活细胞能量代谢以及细胞间相互作用的有利工具,该技术之前主要用于监测二维的单分子细胞层...https://www.bio-equip.com/showarticle.asp?ID=453136427
1.病理AI领域的七大基础模型顶刊速递·241111这篇文章介绍了Virchow,一个基于人工智能的计算病理学基础模型,它能够通过分析数字化病理切片图像来检测常见和罕见癌症,具有提高诊断准确性和减少对昂贵测试依赖的潜力。 Virchow是迄今为止最大的计算病理学基础模型,它通过深度学习和自监督学习算法处理大量的病理图像数据。这项研究的主要目标是提高对罕见癌症的检测能力,...https://blog.csdn.net/m0_59164304/article/details/143722755
2.细胞迁移及浸润实验结果对比Transwell细胞迁移及侵袭的实验结果,通常采用直接计数法(直接人工读取穿膜的细胞数量)或间接计数法(MTT或荧光试剂标记等)。 Transwell 细胞迁移实验结果图片(很难做到对细胞准确计数): 无血清培养基 10%FBS 无血清+VEGF 查看更多 丁香通商铺https://www.biomart.cn/specials/aceabio2013/article/49901
3....Nanoanalytics实时无标记细胞动态分析仪」价格参数图片...德国NanoAnalytics公司推出的细胞跨膜电阻仪(即实时无标记细胞动态分析仪)——cellZscope是由电脑控制,全自动、长时间实时监测细胞层生理学参数的仪器,可实时输出跨膜电阻(TEER)重要指标,一次监测样品6/24/48/72/96个。尤其适用于细胞屏障(消化道、呼吸道、血脑屏障)特性,药物转运,纳米药物研发,Central Nervous Syste...https://www.yiqi.com/product/detail_386520.html
4.行为表达论文范文9篇(全文)结果使用Quantity One软件进行分析,以细胞转然前后RKIP蛋白与β-actin蛋白灰度值比值作为RKIP蛋白的相对表达含量。采用MTT检测细胞增殖情况,回执细胞生长曲线,分析增殖能力;进行双层软琼脂集落形成实验,计算细胞克隆形成平均数,取三次实验的平均值。最后进行Transwell小室侵袭实验,观察并计数穿过膜的细胞数。https://www.99xueshu.com/w/ikeyfjlb0n1d.html
5.增殖能力(精雅篇)二氧化碳培养箱,日本Sanyo(MLO-20AIC);倒置显微镜,日本Olympous(Imt-413);RT6000酶标分析仪,美国雷杜公司;流式细胞仪,美国Becton Dickinson公司。 1.3 试验方法 用胰蛋白酶消化方法分离培养人皮肤成纤维细胞,进行原代细胞培养及传代细胞;冻存及复苏细胞;测定细胞生长曲线;在细胞对数生长期用MTT法测定细胞的增殖能力;用...https://www.360wenmi.com/f/cnkeyxjl67tq.html
6.NOL8对口腔鳞状细胞癌细胞增殖迁移及侵袭的影响方法:利用基因表达谱交互分析2(gene expression profiling interactive analysis 2,GEPIA2)、肿瘤免疫评估资源(tumor immune estimation resource,TIMER)、阿拉巴马大学伯明翰分校癌症数据分析(the University of Alabama at Birmingham cancer data analysis portal,UALCAN)及RNA相互作用数据库(the encyclopedia of RNA ...https://www.medsci.cn/article/show_article.do?id=f33fe64881d2
7.细胞迁移及侵袭细胞检测实验细胞培养实验原始数据、图片、分析结果;实验流程及完整报告一份 服务说明 服务项目细分注释服务周期(工作日) 细胞迁移/细胞侵袭Transwell(不用Matrigel)用于检测细胞迁移12 Transwell(用Matrigel)用于检测细胞侵袭 案例展示 在线课堂 transwell细胞迁移实验 查看更多 常见问题与解析 (Q&A) ...https://www.genecreate.cn/cell_qyqx/
8.Transwell细胞侵袭实验步骤细胞技术与形态遗传6、染色:将小室取出,用PBS洗去培养基,结晶紫染色10min;自来水将表面的结晶紫洗除干净,用棉签将上室中接种侧的细胞擦除干净,于显微镜下对非细胞接种侧拍照。图片结果同transwell迁移。 7、结果分析:每种处理随机取5个视野,进行细胞计数,以细胞数量反应细胞的迁移能力。 https://3g.dxy.cn/bbs/topic/40344473
9.细胞屏障功能—细胞分析安捷伦现有细胞屏障功能分析:溶质渗透性检测 Transwell 溶质渗透性检测是一种在 Transwell 系统中测量溶质穿过多孔膜上生长的细胞单层的程度的方法。它反映了细胞屏障功能和细胞间连接的紧密性。该检测可以使用不同的溶质(如荧光或放射性分子),并在膜的另一侧检测它们。 https://www.agilent.com/zh-cn/solutions/cell-analysis/cancer-biology/cell-barrier-function
10.活细胞成像分析系统新闻仪器信息网活细胞成像分析系统专题为您提供2024年最新活细胞成像分析系统价格报价、厂家品牌的相关信息, 包括活细胞成像分析系统参数、型号等,不管是国产,还是进口品牌的活细胞成像分析系统您都可以在这里找到。 除此之外,仪器信息网还免费为您整合活细胞成像分析系统相关的耗材配件、试剂标物,还有活细胞成像分析系统相关的...https://www.instrument.com.cn/zhuti/59835/news.html
11.解读transwell细胞侵袭实验结果Transwell细胞侵袭实验是一种常用的体外细胞侵袭实验方法,用于研究细胞的侵袭能力及相关信号通路。该实验通过使用Transwell膜,可以模拟细胞通过基底膜进入下方培养基质的生理过程。本文将详细介绍Transwell细胞侵袭实验的原理、操作步骤和数据分析方法。一、实验原理Transwell细胞侵袭实验基于细胞通过基底膜进行侵袭的生 ...https://www.do-gene.com/industry/575.html